乙型肝炎相关肝癌患者乙型肝炎病毒不同抗原肽特异性CD3＋CD8＋人白细胞抗原-A2＋细胞表达

目的探讨乙型肝炎相关肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMc）中HBV不同抗原肽特异性CD3＋CD8＋人白细胞抗原（HLA）-A2＋细胞的表达。方法从4例HLA-A2阳性乙型肝炎相关HCC患者外周血中分离PBMC，分别与HBV抗原肽sAg（FLLTRILTI、GLSPTVWLSV、WLSLLVPFV），HBVcore（FLPSDFFPSV）和HBVpol（FLLSLGIHL）及抗一CD3一pacific blue、抗-CD8-异硫氰酸荧光素共育，流式细胞仪分析HBV／HLA—A2-CD3-CD8阳性细胞，克隆培养，筛选出克隆培养的抗HBVT淋巴细胞；再与含有HBV的肝癌细胞株HepG2（HLA-A2^＋）共育，ELISA法检测其分泌IFN-γ水平。结果4例患者体内受GLSPTVWLSV肽诱导的特异性抗HBVT淋巴细胞占所有CD8^＋细胞的1．44％±0．04％，高于FLLTRILTI肽的0．68％±0．08％、FLPSDFFPSV肽的1．06％±0．09％、FLLSLGIHL肽的0．56％±0．04％和WLSLLVPFV肽的0．46％±0．08％（t=0．001，P〈0．05）。将GLSPTVWLSV／HLAA2获得的HBV／HLA-A2 Pentamer-CD3-CD8阳性细胞克隆，获得2株抗HBVCD8T淋巴细胞，与负荷GLSPTVWLSV肽段的HepG2（HLA-A2＋）细胞共育，CD8T淋巴细胞分泌较高水平的IFN-γ。结论乙型肝炎相关HCC患者外周血中存在针对不同HBV抗原肽的特异性抗HBVCD8T淋巴细胞，其表达量与抗原肽段有关。