细胞衰老在老年小鼠急性肾损伤慢性化中的作用与机制研究

目的探讨细胞衰老在老年小鼠缺血再灌注所致急性肾损伤慢性化中的作用及其机制。方法青年（8-10周龄）和老年（20～24月龄）C57BL／6雄性小鼠各16只，用小鼠缺血再灌注损伤模型构建急性肾损伤模型。随机数字表法分为4组：青年假手术（Young—Sham）组、老年假手术（Old—Sham）组、青年缺血再灌注损伤（Young—IRI）组、老年缺血再灌注损伤（Old．IRI）组。术后第1、3、7天称重并尾静脉取血，术后第14天处死小鼠，留取全血及双侧肾脏备检。检测血肌酐水平；肾组织标本用苏木精一伊红（HE）染色和天狼星红染色观察肾脏组织形态学改变；免疫荧光法检测I型胶原蛋白（Collagen—I）、巨噬细胞标志物F4／80及细胞周期阻滞标志物磷酸化组蛋白H3（p-HH3）和细胞核增殖抗原Ki67的表达；Western印迹法检测Collagen．I表达；实时荧光定量PCR法检测肿瘤坏死因子o【（TNF—O／_）、白细胞介素（IL）6、转化生长因子p（TGF—p）及Collagen．ImRNA的表达。结果与Sham组相比，Young—IRI组及Old．IRI组小鼠术后血肌酐均明显升高（P〈0．05）；与Young—IRI组相比，Old，IRI组术后各时间点血肌酐水平均显著增高（均Pc0．05）。肾组织病理结果提示，Young—IRI组小鼠术后第14天肾组织大部分损伤已修复；Old—Sham组肾组织有少量炎性细胞浸润及胶原沉积；Old。IRI组肾组织可见大量炎性细胞浸润及胶原沉积。免疫荧光结果显示，与Young—Sham组相比，Old—Sham组肾组织有散在F4／80阳性巨噬细胞浸润、Collagen—I沉积及部分p-HH3及Ki67双阳性的G2／M周期阻滞细胞，差异有统计学意义（均P〈0．05）；与Old—Sham组相比，Old—IRI组。肾组织上述各项指标相对表达量均显著增加（均P〈0．叭）。Western印迹结果显示，Old—Sham组Collagen—I表达量明显高于Young—Sham组（P〈0．05），Old—IRI组Collagen—I表达量亦显著高于Young—IRI组（P〈0．01）。实时荧光定量PCR结果显示：Old—Sham组TNF一仅、IL．6、TGF—B及Collagen．ImRNA表达量显著高于Young，Sham组（均P〈0．05）；Old—IRI组TNF一仪、IL一6、TGF—B及Collagen—ImRNA表达量均显著高于Young—IRI组（均P〈0．01）。结论老年小鼠肾组织存在微炎症、轻度纤维化及部分细胞周期阻滞改变；缺血再灌注损伤可致炎性反应加重且持续，更多的肾小管上皮细胞发生G2／M细胞周期停滞，加剧。肾脏纤维化的形成。

中性粒细胞与淋巴细胞比值对动静脉内瘘经皮腔内血管成形术后通畅率的影响

目的观察中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)对自体动静脉内瘘(autologous arteriovenous fistulas,AVF)狭窄经皮腔内血管成形术(percutaneous transluminal angioplasty,PTA)术后通畅率的影响。方法纳入2018年6月~2019年7月在安徽医科大学第二附属医院肾内科成功行PTA术患者84例,收集临床和随访资料。根据术前NLR水平分为高NLR组和低NLR组,对比2组基线资料,采用Log-rank检验分析2组间通畅率,使用COX多因素回归分析影响PTA术后通畅率的因素。结果男47例,女37例,平均随访时间(263.51±120.41)d。高NLR组较低NLR组术后再狭窄率高(χ^2=7.683,P=0.006),高NLR组血镁水平较低(t=2.486,P=0.015),高NLR组AVF通畅率低于低NLR组(Log Rank检验,χ^2=7.885,P=0.005)。结论高NLR是影响PTA术后AVF通畅率的独立危险因素。

sEH抑制剂在小鼠单侧输尿管梗阻模型中的保护作用及机制

目的探讨可溶性表氧化物水解酶（sEH）抑制剂（sEHI）在单侧输尿管梗阻（UUO）肾脏纤维化模型中的保护作用，及其对核转录因子（NF）-κB通路和肾小管上皮细胞G2／M期阻滞的调控作用。方法用单侧输尿管结扎法建立肾间质纤维化模型。32只雄性C57BL／6小鼠用随机数字表法分为4组：假手术（Sham）组、假手术＋sEH抑制剂（Sham＋sEHI）组、UUO模型（UUO）组和UUO＋sEH抑制剂（UUO＋sEHI）组。术后分别给予2％DMSO及1mg／kg的sEHI[1-（1-甲磺酰-哌啶-4-烃基）-3-（4-三氟代甲基-苯）脲，TUPS]灌胃，术后第14天处死动物，留取肾组织行相关检查。肾组织标本用苏木精．伊红（HE）染色和天狼星红染色观察肾脏组织形态学改变；Western印迹法检测肾组织sEH、NF—κB p65、IκB的表达；实时荧光定量PCR法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、IL-6、转化生长因子β（TGF—β）、结缔组织生长因子（CTGF）、IV型胶原（Collagen—IV）、α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达；免疫荧光法检测细胞G2／M周期阻滞标志物磷酸化组蛋白H3（P—HH3）及Ki67表达。结果Western印迹结果显示，与Sham组比较，UUO组肾组织sEH表达及活性增加（均P〈0．05）；sEHI可明显抑制sEH活性及肾间质炎细胞浸润。与Sham组比较，UUO组肾组织NF-κB p65表达增加，IκB表达减少；sEHI可明显抑制NF—κB p65上调及IκB下调（均Pc0．05）。实时荧光定量PCR结果显示，与Sham组比较，UUO组肾组织炎性因子TNF—α、IL-1β、MCP-1、IL-6及纤维化指标TGF—β、CTGF、Collagen-IV、α—SMA明显上调（均P〈0．05）；与UUO组比较，UUO＋sEHI组小鼠肾组织上述炎性因子及纤维化指标表达下调（均P〈0．05）。免疫荧光结果显示，与UUO组相比，UUO＋sEHI组肾小管上皮p-HH3及Ki67阳性细胞数明显减少（均P〈0．05），肾间质阳性细胞数无明显变化。结论sEH抑制剂可通过抑制sEH活性，抑制p65的活化，促进IκB的表达，进而抑制NF—κB通路，减轻炎性反应。sEH抑制剂还可能通过调节肾小管上皮细胞细胞周期，抑制促纤维化因子的释放，发挥抗纤维化作用。