肾损伤分子1对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和纤维连接蛋白的影响

目的观察肾损伤分子1（KIM-1）对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响，探讨KIM-1参与糖尿病肾病肾间质纤维化（RIF）的可能机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）并分为5组：（1）空白对照组（D．葡萄糖5．6mmol／L）；（2）高渗组（D-葡萄糖5．6mmol／L＋D-甘露醇24．4mmol／L）；（3）高糖组（D-葡萄糖30mmol／L）；（4）siRNA对照组；（5）KIM-1siRNA组。ELISA法检测细胞上清液中MCP-1和FN蛋白水平；Western印迹法检测细胞KIM-1蛋白的表达；RT—PCR法检测细胞KIM-1、MCP-1、FNmRNA的表达。结果与空白对照组相比，高糖组细胞KIM-1蛋白和mRNA的表达于12h时间点增高（P〈0．05），48h时达最高值（P〈0．05）；MCP-1及FN蛋白和mRNA的表达于24h时增多（P〈0．05），48h时达最高值（P〈0．05）。与高糖组相比，KIM-1siRNA转染组MCP-1及FN蛋白和mRNA表达显著减少（均P〈0．05）。结论下调KIM-1的表达能显著抑制高糖条件下肾小管上皮细胞表达MCP-1和FN，提示KIM-1可能通过调控MCP-1及FN的表达参与糖尿病肾病肾间质纤维化（RIF）的进程。

缺氧诱导因子1α-肾损伤分子1信号通路对高糖环境下人肾小管上皮细胞细胞外基质降解的影响

目的研究缺氧诱导因子1α（HIF1α）-肾损伤分子1（KIM1）信号通路对高糖环境下人肾小管上皮细胞（HK2）细胞外基质降解的影响，探讨HIF1α-KIM1通路参与糖尿病肾病肾间质纤维化（RIF）的可能机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系（HK2）。按如下处理分组：（1）正常对照组（D-葡萄糖5．6mmol／L）；（2）甘露醇组（D．葡萄糖5．6mmol／L＋D-甘露醇24．4mmol／L）；（3）高糖组（D-葡萄糖30mmol／L）；（4）转染对照组；（5）HIF1αsiRNA组；（6）KIM1siRNA组。分别于培养12、24、36h收获细胞。用Western印迹、实时荧光定量PCR（qRT—PCR）和细胞免疫荧光方法检测细胞HIF1α、KIM1、基质金属蛋白酶9（MMP9）、基质金属蛋白酶抑制物1（TIMP1）、纤维连接蛋白（FN）及I型胶原（COL-I）等蛋白及mRNA的表达。结果与正常对照组相比，高糖组细胞HIF1α、KIM1、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性增加（均P〈0．01）；MMP9蛋白及mRNA表达呈时间依赖性减少（均P〈0．01）。与高糖组相比，HIF1αsiRNA组细胞HIF1α、KIM1、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表达明显减少（均P〈0．01），MMP9蛋白及mRNA表达明显增多（P〈0.01）。与高糖组相比，KIM1siRNA组细胞KIM1、TIMP1、FN及COL-I蛋白及mRNA表达明显减少（均P〈0．01），MMP9蛋白及mRNA表达明显增多（均P〈0．01），而HIF1α表达水平的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖环境下HIF1α可能通过调控肾小管上皮细胞KIM1的表达参与糖尿病肾病肾间质纤维化的进程。