Chemerin/ChemR23在早期糖尿病肾病中的作用及其与炎症因子表达关系的研究

目的观察糖尿病肾损伤早期Chemerin/ChemR23的表达水平及与炎症因子的关系。方法80只SD大鼠,随机分为正常对照组(NC组,n=40)和糖尿病组(DM组,n=40)。DM组大鼠单次腹腔注射75 mg/kg链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立早期糖尿病肾病模型。分别于注射后1、2、3、4和12周,检测每只大鼠的体重、血糖、肾重指数(肾脏重量/体重)、尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin creatinine ratio,UACR)、血肌酐(SCr)水平和肾脏病理结构的变化,并检测肾组织中Chemerin、ChemR23的表达水平,血清中Chemerin的表达水平,分析Chemerin与ChemR23与肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃6(IL⁃6)、C反应蛋白(CRP)的相关关系。结果注射STZ 72 h后,糖尿病模型建立成功。造模后4周,大鼠出现微量白蛋白尿,尿白蛋白/肌酐比值从(0.36±0.22)mg/mmol升高至(1.46±0.49)mg/mmol。肾脏病理学也显示早期肾损伤。12周DM组大鼠出现大量白蛋白尿,尿白蛋白/肌酐比值升高至(2.64±1.11)mg/mmol,血肌酐水平明显升高,肾脏病理学显示糖尿病肾损伤进一步加重。4周时,肾组织中Chemerin和ChemR23的表达水平明显升高。采用Spearman相关分析发现,DM组血清和肾组织中Chemerin的蛋白表达水平与TNF⁃α、IL⁃6和CRP(P<0.01)呈正相关。结论Chemerin、ChemR23与糖尿病肾病炎症反应及肾病进展相关。

感染性休克患者发生AKI的危险因素分析

目的分析感染性休克患者发生急性肾损伤(AKI)的危险因素,为临床预防AKI的发生提供理论依据。方法随机选取2014年8月至2017年8月该院重症监护病房(ICU)收治的98例感染性休克患者作为研究对象,并依据是否发生AKI及AKI分级标准分为未发生AKI(NAKI)组、AKI 1级组、AKI 2级组、AKI 3级组共4组,对比分析各组间相关指标的变化。结果感染性休克患者中AKI的发生率为63.3%。AKI 1~3级各组ICU住院时间、急性生理学及慢性健康状况评分量表(APACHEⅡ)评分、器官衰竭个数、机械通气占比均显著高于NAKI组,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着AKI分级增加各指标水平均逐渐增加,AKI 3级组以上各指标显著高于AKI 2级组和AKI 1级组,差异均有统计学意义(P<0.05);AKI 3级组和AKI 2级组血清CRP水平均显著高于AKI 1级组和NAKI组,差异均有统计学意义(P<0.05);AKI 1~3级各组6 h补液量均显著高于NAKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素logis-tic回归分析显示,APATHEⅡ评分、器官衰竭个数、应用机械通气是影响感染性休克患者发生AKI的独立危险因素(P<0.05),其风险比值分别为1.576、1.863、1.176。结论 AKI是感染性休克的常见并发症。ICU住院时间、APACHEⅡ评分、器官衰竭个数、应用机械通气、炎症指标和6 h补液量等与AKI的发生密切相关,其中APATHEⅡ评分、器官衰竭个数、应用机械通气是感染性休克患者发生AKI的独立危险因素。在临床治疗中应密切监测、及时干预,以降低AKI的发生率,改善患者预后。

纤维连接蛋白肾病FN1基因突变家系报告及致病机制分析

纤维连接蛋白肾病（glomerulopathy with fibronectin deposits, GFND ）是一种罕见的遗传性疾病，临床表现为不同程度的蛋白尿、血尿、肾功能恶化，肾组织病理表现为肾小球结节样改变。目前认为该病遗传方式为常染色体显性遗传，已发现位于染色体2q35的FN1基因突变与GFND发病有关。

高糖环境下趋化素与其受体ChemR23通过活化p38MAPK促进肾小球内皮细胞炎性因子IL-6、TNF-α的表达

目的观察趋化素（Chemerin）及其受体ChemR23在高糖刺激肾小球内皮细胞（GEnC）中的作用及机制。方法使用高糖体外刺激小鼠GEnC，分为正常对照组、20．0mmol／L高糖组、40．0mmol／L高糖组及渗透压对照组，检测培养上清中白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的浓度，及细胞内Chemerin、ChemR23、IL-6和TNF-α的蛋白和mRNA的表达。应用慢病毒转染干扰ChemR23表达，并分别给予Chemerin及高糖刺激细胞，检测IL-6及TNF-α上清中的浓度和胞内mRNA的表达，及高糖刺激下p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38MAPK）磷酸化水平。在高糖刺激前加入p38MAPK特异性抑制剂，检测培养上清IL-6、TNF-α的浓度，及其胞内mRNA的表达。各因子在培养上清中的浓度采用ELISA检测，Western印迹检测胞内蛋白表达和磷酸化水平，实时定量PCR检测胞内mRNA的表达。结果与对照组比较，20．0mmol／L和40．0mmol／L高糖组IL-6、TNF—α的表达及Chemerin蛋白和mRNA表达均增加（均P〈0．05），而ChemR23表达均无明显变化（均P〉0．05），Chemerin刺激组IL-6、TNF—α上清表达和胞内mRNA表达均增加（均尸〈0．05）。应用慢病毒干扰ChemR23表达后，Chemerin或高糖诱导的IL-6及TNF-α过表达均受到抑制（均P〈0．05）。同时，高糖组p38MAPK的磷酸化水平高于对照组（P〈0．05），而干扰ChemR23表达后，高糖刺激的p38MAPK磷酸化水平降低（与高糖组比较P〈0．05）。加入p38MAPK抑制剂，高糖诱导的IL-6、TNF-α过表达均降低（与高糖组比较均P〈0．05）。结论高糖刺激可诱导GEnC合成Chemerin，并通过其受体ChemR23引起p38MAPK信号通路的活化，从而诱导炎性因子IL-6、TNF-α的表达，促进GEnC的炎性反应。

阻断JAK2／STAT3信号通路对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织上皮细胞间充质转分化的影响

目的探讨JAK2／STAT3信号通路是否参与了尿毒症腹膜透析（PD）大鼠腹膜间皮细胞上皮细胞-间充质转分化（EMT）。方法Sprague—Dawley雄性大鼠按照随机数字表法被分为6组：正常对照组、假手术组、尿毒症组、腹膜透析组、S3I-201对照组、S3I-201组，每组均8只。构建5／6肾切除尿毒症腹膜透析大鼠模型，腹膜透析组、S3I-201对照组、S3I-201组每天经腹透管注人4．25％葡萄糖腹膜透析液（3ml／100g体重），S3I—201组大鼠隔天经腹透管注入STAT3抑制剂S3I-201（2．5mg/kg），同时S3I-201对照组经腹透管注入等量的S3I-201溶剂。透析28d后分别检测腹膜功能、腹膜病理变化和毛细血管密度（MVD），血液和腹透液中的肌酐值和IL-6浓度，大鼠腹膜组织中p-JAK2、p-STAT3的活化状态，以及E—cadherin、α-SMA和VEGFmRNA和蛋白的表达。结果与正常对照组相比，尿毒症组和腹膜透析组大鼠腹膜功能呈现超滤衰竭状态，腹膜厚度和MVD增加，透析液和血清中IL-6浓度升高，E—cadherin表达降低，α-SMA、VEGF、p—JAK2和P—STAT3的表达升高。与尿毒症组相比，腹膜透析组腹膜功能进一步恶化，腹膜厚度和MVD增加（均P〈0．01），透析液和血清中IL-6浓度升高（均P〈0．01），E—cadherin表达降低，α-SMA、VEGF、p-JAK2和p-STAT3的表达升高。S3I-201对照组与腹膜透析组相比较，各指标差异均无统计学意义（均P〉0．05）。与S3I-201对照组相比，S3I-201组腹膜功能得到改善，腹膜厚度和MVD减少（均P〈0．01），透析液和血清中IL-6浓度降低，E．cadherin mRNA和蛋白表达增加（均P〈0．05），α-SMA、VEGF、p-JAK2和p-STAT3mRNA和蛋白的表达降低（均P〈0．05）。结论抑制STAT3后，腹膜透析大鼠腹膜厚度、血管新生和IL-6浓度均降低，EMT也被抑制，腹膜功能得到改善。因此，JAK2／STAT3信号通路可能通过调节IL-6的表达参与尿毒症腹膜透析大鼠腹膜组织EMT。

白细胞介素6通过STAT3诱导腹膜间皮细胞上皮间质转分化

目的探讨信号传导与转录激活基因3（STAT3）对白细胞介素6（IL-6）诱导人腹膜间皮细胞（HPMC）上皮间质转分化（EMT）的作用。方法体外培养HPMC并分组：（1）50μg/LIL-6刺激HPMC不同时间，按刺激时间24、48、72h分组；（2）不同浓度IL-6刺激HPMC24h，按IL-6浓度50、100μg/L分组；（3）应用慢病毒介导的RNA干扰技术建立稳定沉默STAT3基因的HPMC，分成空白对照组、IL-6组、空载体组、空载体＋IL-6组、慢病毒感染组、慢病毒感染＋IL-6组，其中IL-6刺激均以50μg/L终浓度刺激24h。实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素（E—cadherin）、仅平滑肌肌动蛋白（仅．SMA）及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达；Western印迹检测上述分子的蛋白表达及通路蛋白Janus激酶2（JAK2）、STAT3磷酸化水平；细胞免疫荧光观察E-cadherin、d—SMA的表达和分布。结果与对照组比较，不同IL-6浓度组和不同作用时间组细胞E-cadherin蛋白和mRNA表达均下降（均P〈0．05），α-SMA、VEGF的蛋白和mRNA表达均升高（均P〈0．05），通路蛋白磷酸化（P）-JAK2／JAK2比值和P-STAT3／STAT3比值均升高（均P〈0．05），且均呈剂量和时间依赖性。沉默STAT3基因后，与空载体＋IL-6组比较，慢病毒感染＋IL-6组α-SMA、VEGF蛋白表达均下降（均P〈0．05），E-cadherin蛋白表达上升（P〈0．05）。结论IL-6通过激活STAT3通路而刺激HPMC分泌VEGF并诱导EMT的发生。沉默STAT3基因可抑制人腹膜间皮细胞EMT的发生。