PD-1在非小细胞肺癌肿瘤细胞表达水平及预后的临床意义

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤细胞程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的表达情况及其与临床病理参数和预后的关系。方法:收集138例NSCLC患者的临床资料,包括年龄、性别、病理分型、TNM分期及淋巴结转移情况,采用免疫组化法检测肿瘤细胞中PD-1的表达水平,根据肿瘤细胞PD-1表达水平,将患者分为PD-1阴性组、PD-1低表达组、PD-1中表达组和PD-1高表达组,并分析肿瘤细胞表面PD-1的表达水平与临床病理参数和预后的关系。结果:肿瘤细胞PD-1的表达水平与NSCLC患者TNM分期(P=0.024)和淋巴结转移有关(P=0.004),与患者年龄、性别、病理分型及肿瘤大小无关(P>0.05);肿瘤细胞PD-1阴性组和PD-1低、中、高表达组生存曲线差异有统计学意义(χ^2=19.503,P<0.001),PD-1阴性组中位生存期(28.7个月)长于PD-1低表达组(15.1个月)、中表达组(10.9个月)、高表达组(14.5个月);PD-1的表达是NSCLC进展的危险因素。结论:肿瘤细胞表面PD-1的表达与NSCLC患者的TNM分期及淋巴结转移有关,可能作为评价NSCLC恶性程度和预后的指标。

肿瘤免疫治疗百年回顾与展望

2018年全球大约有1 810万癌症新发病例和960万癌症死亡病例,其中亚洲人群分别占近一半和近七成[1]。恶性肿瘤严重威胁到了人类的健康和生活。手术、放疗、化疗是肿瘤治疗的传统手段[2],免疫治疗目前已经成为治疗肿瘤的第四种手段。随着肿瘤生物学、免疫学和基因组学研究的快速发展,肿瘤免疫治疗在基础研究和临床试验中不断取得突破性的成果,获得了一系列令人瞩目的成绩,逐渐成为肿瘤治疗的重要手段。而免疫治疗取得目前的地位,也几经沉浮,历经一百三十多年的发展(图1)。

食管鳞状细胞癌患者外周血和肿瘤组织来源的髓源抑制性细胞中PD-1和TIM-3的表达

目的:探讨程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)和T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)患者外周血和肿瘤组织来源的髓源抑制性细胞(MDSCs)上的表达情况。方法:将48例ESCC手术患者外周血单个核细胞和肿瘤组织单细胞进行CD11b、CD14、CD33、HLA-DR标记,并检测单核MDSCs和多形核MDSCs两个亚群上PD-1和TIM-3的表达,分析其表达水平与临床病理指标的关系。结果:肿瘤组织来源的MDSCs上PD-1和TIM-3的表达均高于外周血来源的MDSCs(P <0. 05)。肿瘤组织来源的多形核MDSCs上PD-1和TIM-3的表达水平高于单核MDSCs(P <0. 05),但是PD-1、TIM-3高表达和低表达患者生存曲线差异无统计学意义(P>0. 05)。PD-1、TIM-3在外周血和肿瘤组织来源的MDSCs上的表达均与ESCC患者临床病理指标无关(P> 0. 05)。结论:PD-1和TIM-3在ESCC患者肿瘤组织来源的MDSCs上的表达明显升高,二者可能成为与MDSCs功能相关的标志物。

T细胞受体基因修饰在肿瘤免疫细胞治疗中的应用及研究进展

长期以来,人们一直期望能够用一种有效的手段来控制和治愈肿瘤,并且不断地探索和研究肿瘤治疗的新方法。近些年来细胞免疫治疗已经成为继手术、放疗、化疗之后在恶性肿瘤治疗中具有巨大前景的一种治疗方法。T细胞受体（T cell receptor,TCR）基因修饰T细胞治疗是将针对肿瘤特异性抗原的受体导入T细胞中,再将这些基因修饰T细胞回输给患者达到治疗肿瘤的目的。

IL-10联合二甲双胍对CD8^(+)T细胞记忆分化及抗肿瘤效应的影响

目的:探讨IL-10联合二甲双胍对CD8^(+)T细胞记忆分化及抗肿瘤效应的影响。方法:采用密度梯度离心法和细胞免疫磁珠分选法从健康供者外周血中获得CD8^(+)T细胞。将CD8^(+)T细胞分为对照组(未处理)、IL-10处理组(100μg/L人IL-10重组蛋白处理)、二甲双胍处理组(200μmol/L二甲双胍处理)和联合处理组(100μg/L人IL-10重组蛋白和200μmol/L二甲双胍共同处理)。分组处理7 d后,采用流式细胞术分别检测各组CD8^(+)T细胞记忆亚群比例、表面标志物、功能性细胞因子及增殖标志物的表达水平。结果:IL-10和二甲双胍均可有效增加CD8^(+)T细胞向干细胞样及中心记忆性CD8^(+)T细胞的分化(P均<0.05),促进表面激活型标志CD28、CD69表达(P均<0.05),并有效提高功能性细胞因子IFN-γ、颗粒酶B和增殖标志物Ki-67的表达(P均<0.05);两者联合具有一定的协同作用(P<0.05)。结论:IL-10联合二甲双胍能够促进CD8^(+)T细胞记忆分化,同时增强其抗肿瘤效应。

萝卜硫素对HER2 CAR-T细胞分化、细胞内因子分泌及抗肿瘤作用的影响

目的:探讨萝卜硫素(SFN)对靶向人类表皮生长因子受体-2(HER2)的嵌合抗原受体修饰T细胞(CART)分化、细胞内因子分泌、抗肿瘤能力的影响。方法:采用密度梯度离心法及细胞免疫磁珠分选健康供者外周血CD8^+ T细胞,制备HER2 CAR-T细胞,用15μmol/L SFN处理72 h后检测其分化情况。将HER2 CAR-T细胞与A549共孵育,检测HER2 CAR-T细胞内IFN-γ和TNF-α的表达及A549细胞的凋亡,采用qRT-PCR检测细胞糖酵解途径相关酶[己糖激酶2(HK2)、磷酸果糖激酶(PFKM,PFKP)、丙酮酸激酶(PKM)]及脂肪酸氧化过程相关酶[肉毒碱棕榈酰基转移酶(CPT1A)]mRNA的表达。以未经SFN处理的细胞作为对照。结果:与对照组相比,SFN组中心记忆性T细胞亚群比例增加(P <0. 05),IFN-γ及TNF-α分泌水平增加,对A549细胞的杀伤能力增强(P <0. 05),HK2、PFKM、PFKP和PKM mRNA表达下调,CPT1A mRNA表达上调(P <0. 05)。结论:SFN通过抑制糖酵解途径促进HER2 CAR-T细胞向记忆亚群分化,同时增强其抗肿瘤效应。

脂多糖通过调节浸润性淋巴细胞抑制小鼠肺腺癌的进展

目的:观察脂多糖(LPS)对小鼠肺腺癌进展的影响,并探讨相关免疫学机制。方法:小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞分为3组,分别给予PBS或LPS(10、20 mg/L)处理0、24、48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用Annexin-V/PI双染法检测处理48 h后细胞凋亡率。取10只6~8周龄C57BL/6J雌性小鼠,皮下注射LLC细胞构建移植瘤小鼠模型,成瘤后将小鼠均分为两组,每组5只;分别腹腔注射PBS(对照组)或LPS(LPS组),每3 d注射1次,共注射4次。小鼠第1次腹腔注射PBS或LPS 6 h后,尾静脉取血,采用ELISA法检测小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。末次注射后第3天处死小鼠,测量肿瘤体积及质量。采用荧光抗体标记法检测小鼠肿瘤组织中CD45^(+)淋巴细胞、CD3^(+)T淋巴细胞、CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例及CD8^(+)T淋巴细胞表面细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)、T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)的表达水平。结果:LPS体外对LLC细胞的增殖、凋亡无影响(P>0.05)。与对照组比较,LPS组小鼠肿瘤体积和质量均减小,血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平升高(P均<0.05);LPS组小鼠肿瘤组织中CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例增加,而CD8^(+)T淋巴细胞表面PD-1、TIM-3表达降低(P均<0.05)。结论:LPS可能通过促进浸润性淋巴细胞增多并降低CD8^(+)T淋巴细胞表面PD-1、TIM-3的表达,抑制小鼠体内肺腺癌移植瘤的生长。

埃克替尼联合化疗治疗EGFR突变型晚期非小细胞肺癌的临床效果

目的:探讨埃克替尼联合化疗治疗EGFR突变型晚期非小细胞肺癌的临床效果。方法:选取80例EGFR突变型(19外显子缺失突变或21外显子突变)晚期(ⅢB-Ⅳ期)肺腺癌患者,其中45例接受埃克替尼单药治疗(埃克替尼组),35例接受埃克替尼联合以铂类为基础的双药联合化疗(联合治疗组),比较两组患者的治疗效果、治疗相关不良反应及肿瘤无进展生存期等。结果:联合治疗组近期疗效优于埃克替尼组(P<0.001)。联合治疗组总有效率为65.7%,高于埃克替尼组(37.8%)(P=0.013)。联合治疗组骨髓抑制发生率高于埃克替尼组(P<0.001),但其他不良反应如皮疹、消化道反应、肝功能损伤等差异均无统计学意义(P>0.05)。两组均未出现与治疗相关的死亡。联合治疗组的肿瘤无进展生存期长于埃克替尼组(P<0.001)。结论:埃克替尼联合以铂类为基础的双药联合化疗治疗EGFR突变型晚期肺腺癌疗效较佳,可明显改善患者预后。

三氧化二砷对前列腺癌DU-145细胞RASSF1A基因的去甲基化作用

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对RASSF1A基因去甲基化和蛋白表达的影响。方法应用MTT法检测不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、12.0、20.0μmol/L)的As2O3不同作用时间(24、48、72 h)对DU145细胞的生长抑制作用;应用甲基化特异性PCR(MSP)和West-ern blot检测As2O3对DU145细胞RASSF1A基因甲基化状态及蛋白表达的影响。结果 As2 O3可抑制DU145细胞的增殖,在一定范围内随着药物浓度的增高,抑制作用逐渐增强(F=838.089,P<0.05);同一浓度作用时间越长,抑制率越高(F=8.849,P<0.05);且As2O3可使RASSF1A基因甲基化逆转,蛋白重新表达。结论 As2O3可以逆转前列腺癌DU145细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,诱导该抑癌基因的重新表达,抑制前列腺癌DU145细胞的增殖。

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肺癌的临床观察

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在晚期肺癌治疗中的临床安全性和疗效。方法:59例晚期肺癌患者按照治疗方法不同分为两组。29例(对照组)接受传统的以铂类为基础的双药联合化疗。30例(CIK组)接受传统治疗和CIK回输治疗。采集患者外周血50～100 m L,按照标准流程体外诱导为CIK细胞,根据临床治疗方案静脉回输。观察两组患者的不良反应,随访并评价临床疗效。结果:CIK组患者均未出现严重的不良反应; 8例患者出现一过性的发热,对症处理后迅速好转,2例患者分别出现寒战和乏力。与对照组相比,CIK细胞输注之后,患者的精神及体力方面改善(P <0. 05)。CIK组2例患者病灶缩小。两组生存曲线差异有统计学意义(P=0. 041),CIK组中位生存期(29个月)明显长于对照组(12个月)。结论:CIK细胞治疗可以提高晚期肺癌患者的生活质量并延长总体生存期,临床不良反应较轻微,大部分患者能够耐受。

非小细胞肺癌患者外周血中HIF-1α^+MDSC比例对低氧条件下CD8^+T细胞杀伤活性的影响

目的:非小细胞肺癌患者外周血中HIF-1α^+髓源抑制细胞(MDSC)比例对低氧条件下CD8^+T细胞杀伤活性的影响。方法:采用流式细胞术检测35例非小细胞肺癌患者及29名健康人(正常对照)外周血中HIF-1α^+MDSC(M-MDSC和G-MDSC)的比例,分析非小细胞肺癌患者外周血中HIF-1α^+MDSC比例与非小细胞肺癌患者临床参数和疗效的关系。利用体外培养技术共孵育NSCLC患者HIF-1α^+MDSC和正常CD8^+T细胞,分为加入和不加入HIF-1α抑制剂组,采用流式细胞术检测HIF-1α^+MDSC与CD8^+T细胞孵育比例和HIF-1α抑制剂对CD8^+T细胞分泌颗粒酶B和穿孔素水平的影响。结果:①非小细胞肺癌患者外周血中HIF-1α^+G-MDSC和HIF-1α^+M-MDSC比例均高于正常对照(P<0.05)。②HIF-1α^+MDSC比例与淋巴结转移、临床分期及肿瘤分化程度有关(P<0.05)。③化疗前HIF-1α^+MDSC比例高者疗效差(P=0.026)。④HIF-1α^+G-MDSC和HIF-1α^+M-MDSC均可抑制CD8^+T细胞分泌颗粒酶B和穿孔素的能力,其抑制作用呈一定的剂量依赖性;HIF-1α抑制剂可增强CD8^+T细胞分泌颗粒酶B和穿孔素的能力(P<0.05)。结论:非小细胞肺癌患者外周血中HIF-1α^+MDSC比例与预后有关,HIF-1α^+MDSC可抑制低氧条件下CD8^+T细胞的杀伤活性,可作为评价预后的指标及肿瘤治疗的新靶点。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS的PD-1抑制剂治疗的晚期肺腺癌患者血清代谢组学研究

目的:探索晚期肺腺癌患者化疗联合免疫治疗前后的差异代谢物及代谢通路,为评估预后寻找生物指标。方法:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对14例晚期肺腺癌患者在第1次使用化疗联合PD-1抑制剂治疗前3 d的血清以及治疗2周期后的血清进行代谢组学分析。通过对采集得到的图谱进行峰识别和匹配等相关处理,应用主成分和正交偏最小二乘法-判别分析对代谢组学的数据进行分析,筛选出重要变量性投影>1和P<0.05的差异代谢物,并筛选代谢通路。结果:治疗前后血清代谢物质有明显差异,治疗后患者血清代谢物中谷氨酰丝氨酸、脯氨酸、犬尿氨酸、脱氢抗坏血酸、N-硬脂酰鞘磷脂、5-羟基吲哚乙酸水平升高;色氨酸、亮氨酰脯氨酸、柠檬酸、硬脂酸、吲哚丙烯酸、丙酰肉碱、吲哚、3-甲基吲哚水平降低。色氨酸代谢通路是治疗前后的差异代谢通路。结论:犬尿氨酸/色氨酸比值可能作为评估PD-1抑制剂治疗的晚期肺腺癌患者预后的生物指标。

急性脑梗死患者外周血CD8^(+)T细胞中PD-1、Tim-3和CTLA-4的表达

目的:探讨急性脑梗死患者外周血CD8^(+)T细胞中PD-1、Tim-3和CTLA-4的表达,并分析其与患者预后的关系。方法:用流式细胞学的方法检测108例急性脑梗死患者以及90例健康对照外周血CD8^(+)T细胞中PD-1、Tim-3和CTLA-4的表达。急性脑梗死患者随访90 d后给予modified Rankin Scale(mRS)评分评价患者预后(0~2分为预后好,3~5分为预后差)。采用logistic回归筛选影响急性脑梗死患者预后的因素。采用ROC曲线评价患者外周血CD8^(+)T细胞中PD-1、Tim-3和CTLA-4阳性率对患者预后的预测价值。结果:急性脑梗死患者CD8^(+)T细胞中PD-1和CTLA-4的阳性率降低(P<0.001)。患者外周血CD8^(+)T细胞中PD-1阳性率在预后好的急性脑梗死患者中表达上调(P<0.001)。Logistic回归结果显示PD-1阳性率是急性脑梗患者预后的影响因素(OR为1.794,95%CI:1.411~2.281)。急性脑梗患者外周血CD8^(+)T细胞中PD-1阳性率预测患者较好预后的ROC曲线下面积为0.888(95%CI:0.825~0.951),截断值是13.65%,此时的敏感度为88.4%,特异度为80.0%。结论:CD8^(+)T细胞中PD-1阳性率可能成为急性脑梗死患者的预后指标。

食管癌增效化疗的基础与疗效

以DDP为基础治疗食管癌有效率在40%以上的化疗方案计有20余种[1].目前增效化疗已在食管癌治疗中显示出了50%～70%的较高疗效,其方案的组成均具有一定的理论基础.

急性脑梗死患者外周血髓源抑制性细胞比例与预后的关系

目的:探讨髓源抑制性细胞(MDSC)与急性脑梗死预后的关系。方法:采集128例急性脑梗死患者以及100例健康对照外周血进行流式细胞学检测并分析MDSC的比例。用改良Rankin评分评价急性脑梗死患者随访90 d的预后(0~2分为预后好,3~5分为预后差)。分析预后好组(n=51)与预后差组(n=77)临床参数之间的差异,采用logistic回归分析影响急性脑梗死预后的因素,采用ROC曲线评价患者外周血MDSC比例对患者预后的预测价值。结果:与健康对照组比较,急性脑梗死组外周血中多形核MDSC(PMN-MDSC)以及单核MDSC(M-MDSC)的比例上调(P<0.05)。与预后差组相比,预后好组急性脑梗死患者外周血中PMN-MDSC以及M-MDSC的比例上调(P<0.05)。PMN-MDSC与M-MDSC比例是影响急性脑梗死患者预后的危险因素。PMN-MDSC比例预测急性脑梗死患者预后的AUC为0.619(95%CI为0.519~0.720),截断值是4.220,敏感度为0.588,特异度为0.636;M-MDSC比例的AUC为0.747(95%CI为0.661~0.833),截断值是1.410,敏感度为0.784,特异度为0.623。结论:MDSC比例在急性脑梗死患者外周血中增加,并且可以作为患者的预后判断指标。

BFM90方案与Hyper CVAD方案对不同年龄T淋巴母细胞淋巴瘤患者的疗效对比

目的对比分析不同化疗方案对T淋巴母细胞淋巴瘤患者的疗效。方法回顾性分析59例T淋巴母细胞淋巴瘤患者的临床资料,对比BFM90方案及Hyper CVAD方案对T淋巴母细胞淋巴瘤的治疗效果。结果 40岁以下患者中,21例(46.7%)单独应用BFM90方案,客观缓解率(objective response rate,ORR)为84.0%,完全缓解率(complete remission,CR)为56.0%,2 a总生存率(overall survival,OS)和无进展生存期(progress free survival,PFS)分别为62.3%和54.4%;14例(31.1%)单独应用Hyper CVAD方案,ORR为84.2%,CR率为26.3%,2 a OS率和PFS率分别为31.6%和16.1%。40岁以上患者中,2例(14.3%)单独应用BFM90方案,1例就诊后1个月死亡,1例治疗后存活至今;12例(85.7%)患者单独应用Hyper CVAD方案,ORR为77.8%,CR率为44.4%,2 a OS率和PFS率分别为8.3%和8.3%。结论在小于40岁患者中,与Hyper CVAD方案相比,BFM 90方案有较好的预后;在大于40岁患者中,两种方案预后无明显差别。

中性粒细胞淋巴细胞比值和淋巴细胞单核细胞比值对PD-1抑制剂治疗的晚期非小细胞肺癌患者预后的预测价值

目的:探讨中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)与淋巴细胞单核细胞比值(LMR)对PD-1抑制剂治疗的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的预测价值。方法:回顾性分析2015年1月至2021年1月于郑州大学第一附属医院接受PD-1抑制剂治疗的75例NSCLC患者的资料,将其分为治疗前NLR<5组和NLR≥5组,LMR<1.5组和LMR≥1.5组,比较不同组别患者疾病控制率、客观缓解率的差异;采用Cox回归分析LMR对PD-1抑制剂治疗的NSCLC患者预后的预测价值。结果:NLR<5组与LMR≥1.5组有更高的疾病控制率(P<0.05)。Cox回归分析显示,早期给予免疫治疗(HR=0.345,95%CI:0.183~0.650)、LMR≥1.5(HR=0.327,95%CI:0.168~0.638)是NSCLC患者PFS生存获益的预测因素。结论:NLR、LMR可用于PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC预后的预测。

非小细胞肺癌组织中Foxp3、PD-1和CD45RO蛋白的表达

目的:观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中免疫抑制标志物Foxp3和PD-1以及记忆性T细胞标志物CD45RO的表达情况,探讨3种标志物与患者临床病理因素和预后的关系。方法:采用免疫组化染色检测87例NSCLC组织和38例正常肺组织中Foxp3、PD-1和CD45RO的表达,比较不同临床病理特征的NSCLC组织中以上3种蛋白表达的差异,以及3种蛋白不同表达水平的NSCLC患者无进展生存曲线的差异。结果:与正常对照相比,NSCLC组织中Foxp3和PD-1高表达(P<0.05),而CD45RO在两种组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。Foxp3高表达与淋巴结转移和肿瘤分化程度有关,而CD45RO高表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。Foxp3高表达的患者预后较差(P=0.042)。结论:Foxp3和CD45RO的高表达与NSCLC患者某些临床病理因素有关,Foxp3可能影响患者预后。

不同亚群CD8^+ T细胞表型、功能分子及分化相关基因的表达

目的:探讨不同亚群CD8^+ T细胞的表型、功能分子及分化相关基因表达的差异。方法:密度梯度离心法从健康人外周血中分离外周血单个核细胞,并用MACS细胞免疫磁珠分选获取CD8^+ T细胞。采用CD3、CD8、CD45RA、CCR7标记CD8^+ T细胞亚群,检测各亚群表面标志物(CD69、CD28、PD-1)及功能分子(IFN-γ、IL-2)的表达;采用qRT-PCR检测CD8+T细胞亚群中功能、转录因子、凋亡及干性等相关基因的表达。结果:与效应记忆性T细胞(Tem)和效应性T细胞(Teff)相比,中心记忆性T细胞(Tcm)表面激活性标志物CD69和CD28表达水平增高(P <0. 05),而抑制性分子PD-1表达水平降低(P <0. 05);功能分子(IFN-γ、IL-2)的表达水平上调(P <0. 05);趋化因子受体(CCR7、CXCR4)、STAT3、干性基因(C-myc、Lin28)及抗凋亡等相关基因表达水平上调(P <0. 05)。结论:抗凋亡、自我更新、STAT3等相关基因在Tcm细胞中高表达,且与记忆性T细胞的分化相关,为体外诱导记忆性T细胞提供了基础。

抑制Notch1信号通路对CD8^+ T细胞免疫检查点、功能及增殖的影响

目的:探讨抑制Notch1信号通路对CD8^+ T细胞免疫检查点、功能及增殖的影响。方法:收集健康人外周血标本,分选CD8^+ T细胞。对照组利用CD3/CD28活化磁珠激活CD8^+ T细胞,实验组在激活的同时加入Notch1信号通路抑制剂LY3039478。应用流式细胞术检测2组细胞免疫检查点(PD-1、TIM-3)、功能性细胞因子[(IFN-γ、IL-2和颗粒酶B(GZMB)]及增殖(Ki-67)的变化。结果:与对照组相比,实验组CD8^+ T细胞PD-1、TIM-3、IFN-γ、IL-2、GZMB和Ki-67的表达明显受抑(P <0. 05)。结论:Notch1信号通路在CD8^+ T细胞免疫检查点、功能、增殖的表达中起到了重要作用。