靶向谷氨酰胺代谢增强抗肿瘤免疫和免疫治疗的研究进展

代谢重编程和免疫逃逸被认为是肿瘤的两大特征,在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。免疫检查点抑制剂的成功,开启了免疫疗法治疗肿瘤的新纪元。越来越多的证据表明,肿瘤细胞的代谢重编程有助于肿瘤免疫逃逸。肿瘤细胞处于高代谢状态,通过改变代谢途径来满足不受控制的生长和增殖需求。对谷氨酰胺的高需求导致多种类型的肿瘤对谷氨酰胺的依赖性。谷氨酰胺的代谢变化对肿瘤侵袭性和肿瘤微环境的重塑有显著影响。谷氨酰胺对免疫细胞的增殖和激活也至关重要。肿瘤细胞对谷氨酰胺的大量消耗会导致免疫抑制性肿瘤微环境,以及对免疫检查点抑制剂的耐药性。本综述总结了肿瘤细胞的谷氨酰胺代谢特征及促进肿瘤免疫逃逸的研究进展,并探讨了靶向谷氨酰胺代谢增强抗肿瘤免疫和免疫治疗的最新策略。

鸢尾素对抑郁小鼠行为学、外周血CD4^+细胞Th17分化和糖酵解的影响

目的:探讨鸢尾素是否能够改善小鼠的抑郁症状并分析相关机制。方法:将小鼠分为正常对照组、模型组及鸢尾素组,每组6只。模型组及鸢尾素组用皮质醇诱导小鼠抑郁模型。鸢尾素组造模成功后连续腹腔注射鸢尾素(100μg/kg)6 d。采用糖水偏好实验、旷场实验及强迫游泳实验评价小鼠抑郁行为的变化,检测小鼠外周血中Th17细胞比例,ELISA法检测外周血中IL-17A含量。分选正常小鼠初始CD4^+T细胞,分为对照组和鸢尾素组,给予Th17细胞分化条件刺激3 d后,鸢尾素组再用鸢尾素(500μg/L)培养3 d;检测Th17细胞分化率,分光光度法检测细胞中丙酮酸、乳酸含量,Western blot法检测丙酮酸激酶2(PKM2)的表达。结果:与模型组比较,鸢尾素组小鼠旷场中心区运动时间及进入次数增加,强迫游泳不动时间缩短,糖水偏好度增加,外周血中Th17细胞比例及IL-17A含量下降(P均<0.05)。与对照组比较,鸢尾素组Th17细胞分化率,细胞内丙酮酸、乳酸含量及PKM2表达水平均降低(P<0.05)。结论:鸢尾素可能通过调控初始CD4^+T细胞的糖酵解程度,抑制其向Th17细胞分化,从而减少Th17细胞形成,发挥抗抑郁作用。

血小板内皮细胞黏附分子-1在急性肺损伤中的作用研究进展

急性肺损伤(ALI)是炎症调节失调和肺泡/毛细血管屏障破坏导致的以肺水肿为特征的肺部疾病,其发病率和病死率较高。目前机械通气是ALI的主要治疗措施。血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)具有多种抗炎及促炎作用,在调节血管通透性和介导中性粒细胞迁移中起着重要作用。本文就PECAM-1在多种ALI模型中的作用机制研究进展进行综述,以期为ALI的预防及临床治疗提供新的思路。

携带TP53和ERBB2基因突变的肝细胞癌类器官的培养及药物敏感性鉴定

目的?培养肝细胞癌类器官用于药物筛选,为肝细胞癌患者的个体化治疗提供参考。方法将1例肝细胞癌患者的肿瘤组织消化为单细胞后接种于基质胶中培养。通过H-E染色观察类器官与原代肿瘤组织的细胞形态。采用免疫组织化学染色观察类器官与原代肿瘤组织中细胞角蛋白7(CK7)、细胞角蛋白8(CK8)、p53、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)等分子的表达情况。通过靶向测序检测类器官中肿瘤相关基因的突变情况。根据靶向测序结果进行药物筛选,采用CellTiter-Glo细胞活性检测试剂盒检测varlitinib[表皮生长因子受体/erb-b2受体酪氨酸激酶2(ERBB2)特异性抑制剂]、索拉非尼(激酶多靶点抑制剂)、顺铂和nutlin3(p53激活剂)对类器官活性的影响。结果成功建立了携带肿瘤蛋白p53(TP53)和ERBB2基因突变的肝细胞癌类器官。H-E染色结果显示,类器官与原代肿瘤组织具有极为相似的结构和细胞学特征。免疫组织化学染色结果显示,类器官与原代肿瘤组织中CK7均为阴性,CK8、p53和GPC-3均为阳性。靶向测序结果显示,类器官中的突变基因有TP53(E271K,100%)、ERBB2(A1232V,62.29%)、RUNX转录因子1(RUNX1)(E395A,20.21%)、雄激素受体(AR)(Q91dup,70%)。细胞活性检测结果显示,varlitinib和索拉非尼对类器官的IC;分别为2.81μmol/L和1.327μmol/L,顺铂对类器官的IC;为40.98μmol/L,nutlin3对类器官生长无明显影响。结论成功建立了1例携带TP53和ERBB2基因突变的肝细胞癌类器官,该类器官保留了原代肿瘤组织的结构和分子特征,药物筛选结果可能为肝细胞癌患者的个体化治疗提供参考。

基于癌基因组图谱数据挖掘分析CC亚族趋化因子配体20在食管癌中的表达及临床意义

目的探讨CC亚族趋化因子配体20(CCL20)在食管癌中的表达及对病程进展和预后的影响。方法利用癌基因组图谱(TCGA)、UALCAN、GEO等相关数据库分析CCL20基因在食管癌组织与癌旁组织中的表达差异,通过Kaplan-Meier模型探讨CCL20表达水平与预后的关联性;分析CCL20与肥胖、甲基化等之间的关系;最后通过mRNA、蛋白水平,分析CCL20在食管癌组织和癌旁组织的表达差异。结果CCL20在食管癌尤其是腺癌类型中高表达,高表达CCL20患者生存率明显降低;CCL20的表达量与食管癌患者肥胖程度成正比、与其甲基化程度成反比;食管癌组织中CCL20的表达量显著增加。结论CCL20在食管癌组织中高表达,且CCL20高表达与患者的生存预后成显著负相关。

载锰单原子纳米酶和驱蛔素的壳聚糖水凝胶制备及其抗幽门螺杆菌活性

目的设计一类共载锰单原子纳米酶(manganese single-atom nanozyme,MnSAE)和驱蛔素(ascaridole,Asc)的壳聚糖靶向水凝胶,为幽门螺杆菌Helicobacter pylori的根除治疗提供一种新思路。方法首先以NH2-PEG-COOH为连接臂,将脲基(urea-)修饰到壳聚糖的C6-羟基上,制备壳聚糖靶向材料脲基PEG壳聚糖(Urea-PEG-Cs,UPCs),然后以中空的沸石咪唑酯骨架材料-8(zeolitic imidazolate frameworks-8,ZIF-8)为模板吸附锰离子(Mn2+),并通过高温热解法构建MnSAE,最后将MnSAE和土荆芥Chenopodium ambrosioides的药效成分驱蛔素加入到UPCs溶液中,构建共递送MnSAE和驱蛔素的壳聚糖靶向水凝胶(Asc/MnSAE@UPCs);利用核磁共振氢谱(1H-NMR)、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)对UPCs结构进行鉴定,扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察水凝胶的形态和元素分布。并对水凝胶的释药、溶胀率、黏附性、类酶催化活性和体外安全性进行评价;最后考察其体外抗幽门螺杆菌活性和胞内产生活性氧能力。结果1H-NMR、FTIR结果表明,脲基修饰到壳聚糖骨架上。Asc/MnSAE@UPCs水凝胶为片状多孔结构,具有良好的溶胀性、黏附强度和体外安全性;该水凝胶具有过氧化物酶和氧化物酶活性,能够产生羟基自由基和超氧阴离子,与驱蛔素联用发挥优异的抗幽门螺杆菌活性。结论Asc/MnSAE@UPCs水凝胶能够整合MnSAE和土荆芥的中药单体成分驱蛔素的优势,发挥优异的化学动力、化学治疗的协同靶向抗菌作用,具有重要的研究价值和临床意义。

脓毒症相关持续性急性肾损伤的危险因素及预测模型

目的本文旨在利用大型国际数据库,确定脓毒症相关持续性急性肾损伤(sepsis associated AKI,SA-AKI)的危险因素,构建预测模型森林图,并验证模型准确率。方法从2019年4月15日公开发布的大型国际数据库eICU数据库中识别脓毒症相关急性肾损伤(SA-AKI)患者(886例),将SA-AKI患者分为短暂性SA-AKI组(668例)和持续性SA-AKI组(218例)。使用单因素和多因素logistic回归分析,寻找持续性SA-AKI独立危险因素,构建预测模型森林图,并通过分类模型评价指标评估模型。回顾性收集湖北某三甲医院195例数据作为外部验证组进行模型外部验证。结果单因素logistic回归分析表明:年龄、尿素氮、胆红素、SOFA评分、CRRT、KDIGO 2期、高血压病、心血管病、慢性肾病、肝病、升压剂、OASIS评分、Apache IV评分、纳入时肌酐水平、入院24 h肌酐变化、血红蛋白、血小板、ICU住院天数是持续性SA-AKI独立危险因素;多因素logistic回归向前LR分析表明:CRRT、升压剂、Apache IV评分、胆红素、纳入时肌酐、ICU内天数、24 h肌酐水平变化是持续性SA-AKI的独立预测因素,预测模型灵敏度78.9%,特异度78.7%,AUC曲线下面积0.858。以此构建SA-AKI模型整体预测准确率为83.4%,召回率83.4%,精确率82.6%,F1分数82.1%。将验证集中数据带入最终模型中,得出ROC曲线下面积0.865,灵敏度为89.1%,特异度为78.6%。结论确定了持续性SA-AKI危险因素并成功构建持续性SA-AKI预测模型。

热休克转录因子1对视网膜色素上皮细胞抗氧化和抗衰老的调控作用

目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中HSF 1基因,构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(ARPE/Hsf1-/-),分别命名为H8、H9细胞株。取野生型、H8和H9细胞株,应用DHE探针染色结合流式分析技术测定细胞内活性氧簇(ROS)含量,应用流式细胞分析方法测定细胞周期;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定不同培养时间点细胞活力值;采用结晶紫染色实验测定细胞相对存活率;采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验检测衰老细胞比率;采用Western blot法检测各细胞株中热休克蛋白(HSP)70、HSP27、聚集素(CLU)、p53、p21和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR法测定各细胞株中p53、p21、IL-6、IL-8、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)mRNA表达水平。比较各细胞株在不同热休克处理条件下和HSP90抑制剂IPI504处理下热休克反应相关蛋白相对表达量,比较各细胞株不同浓度H_(2)O_(2)处理后相对存活率,比较各细胞株经或未经ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理后p21蛋白相对表达量。结果基因测序显示H8和H9细胞株成功携带突变基因,Western blot检测结果显示H8、H9细胞株不表达HSF1蛋白,HSF1在ARPE-19细胞中被成功敲除。与野生型细胞株相比,H8、H9细胞株中的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);各细胞株HSP90蛋白相对表达水平总体比较,差异无统计学意义(F=0.29,P>0.05)。在不同热休克刺激和IPI504诱导下野生型细胞株中HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与野生型细胞株相比,H8和H9细胞株的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著低于相应处理的野生型细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与野生型细胞株相比,H8和H9细胞株培养24、48、72和96 h的细胞活力均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与野生型细胞株比较,H8和H9细胞株G1期细胞百分比显著升高,细胞周期抑制因子p53、p21的mRNA和蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),SA-β-gal染色阳性细胞比率显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.001);衰老相关炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、MCP1 mRNA相对表达量显著下降,差异均有统计学意义(均P<0.001)。H8和H9细胞株ROS含量明显高于野生型细胞株,差异均有统计学意义(均P<0.001);H8和H9细胞株经NAC处理后p21蛋白相对表达量较未经NAC处理明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。H8和H9细胞株200、400、600、800μmol/L H 2O 2处理条件下细胞相对存活率明显低于野生型细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论敲除HSF1可下调HSP的表达,激活ROS/P53/P21通路,诱导RPE细胞衰老,并增加RPE对氧化应激刺激的敏感性。HSF1在RPE细胞中可能具有抗衰老和抗氧化调控作用。

选择性环氧化酶抑制剂塞来昔布促进自然杀伤细胞杀伤食管癌细胞的机制

目的探讨塞来昔布在自然杀伤(NK)细胞对食管癌细胞的杀伤作用中的影响及其机制。方法选择人食管癌细胞系EC-1(所有细胞均来源于中国科学院上海细胞库)按实验转染方案随机分组,分为实验组(si-ULBP1)、对照组(si-ULBP1 NC)。采用实时定量反转录聚合酶链反应(qPCR)检测EC-1细胞中ULBP1、ULBP2、ULBP3、MICB、PD-L1、4-IBBL在30μmol/L塞来昔布处理0、6、12、24、36、48、72 h后的表达;小干扰RNA(siRNA)敲除48 h后,实验组和对照组EC-1细胞ULBP1表达量;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测10、20、30、40、50、60、80、100μmol/L浓度下,塞来昔布处理24、36、48 h对EC-1细胞生长的影响;采用流式细胞术分析体外培养14 d后NK细胞、CD107a阳性细胞、干扰素α(IFN-α)表达阳性细胞群的比例;在1∶1、5∶1、10∶1效靶比下,NK细胞对塞来昔布处理EC-1细胞的杀伤效应;siRNA敲除后,NK细胞对实验组和对照组EC-1细胞的杀伤效应。采用t检验比较两组间差异。结果CCK-8结果显示,在36 h不同浓度塞来昔布处理条件下,50μmol/L组细胞存活率低于10μmol/L组[(78.82±1.93)%比(91.66±1.50)%,t=9.12,P<0.05],60μmol/L组细胞存活率低于20μmol/L组[(57.65±6.42)%比(91.87±1.07)%,t=9.11,P<0.05],80μmol/L组细胞存活率低于30μmol/L组[(43.53±1.93)%比(90.16±1.50)%,t=33.12,P<0.05],100μmol/L组细胞存活率低于40μmol/L组[(19.79±1.50)%比(88.88±2.57)%,t=40.27,P<0.05]。qPCR结果显示ULBP1组表达量高于ULBP2、ULBP3、MICB、PD-L1、4-IBBL组(ULBP1组μ=6.37比ULBP2组μ=3.76,t=7.95,P<0.01,ULBP3组μ=2.57,t=12.14,P<0.01,MICA组μ=2.32,t=12.27,P<0.01,MICB组μ=1.55,t=12.13,P<0.01,PDL1组μ=0.41,t=17.06,P<0.01,4-IBBL组μ=0.70,t=13.53,P<0.01);流式细胞术结果显示,NK细胞对塞来昔布处理组EC-1细胞杀伤效应高于对照组[1∶1(12.23±2.70)%比(24.06±1.58)%,t=6.48,P<0.01、2∶1(28.57±2.93)%比(45.49±3.38)%,t=6.54,P<0.01、4∶1(61.50±3.39)%比(74.36±2.94)%,t=4.97,P<0.01、8∶1(88.12±2.48)%比(94.21±3.84)%,t=2.31,P>0.05],NK细胞对敲低si-ULBP1实验组的杀伤效应低于si-ULBP1 NC对照组[(61.58±4.21)%比(88.42±2.63)%,t=9.36,P<0.01]。结论塞来昔布通过上调食管癌细胞中ULBP1的表达增强NK细胞的杀伤效应。

信号素4C在巨噬细胞高表达与早期肺腺癌淋巴结转移相关

目的探讨信号素4C (SEMA4C)在巨噬细胞中的高表达影响早期肺腺癌发生淋巴结转移的机制及临床价值。方法收集2019年12月至2021年12月来自郑州大学第一附属医院的16例T1期肺腺癌患者(8例有淋巴结转移, 8例无淋巴结转移)的肿瘤组织和邻近正常肺组织进行转录组测序, 通过癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)数据库下载数据集作为外部验证队列。采用实时定量反转录聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)等方法分析SEMA4C相对表达量, 并使用CIBERSORT算法和R语言程序包进行数据处理和分析。采用t检验比较两组间差异基因, 采用Kaplan-Meier法χ^(2)检验比较两组间生存函数差异。结果 M0巨噬细胞高浸润组病人的生存率低于低浸润组[TCGA:(81.92±10.50)个月比(95.98±11.80)个月, χ^(2)=6.778, P<0.01;GSE68465:(72.74±5.89)个月比(96.69±6.15)个月, χ^(2)=5.413, P<0.05]。SEMA4C在3个队列中转移组和高浸润组表达高于无转移组和低浸润组(测序队列:30.68±8.02比23.72±4.76, t=2.912, P<0.01;TCGA:44.08±22.45比24.93±11.64, t=2.734, P<0.01;GSE68465:908.61±363.72比822.00±312.53, t=1.978, P<0.05)。qPCR结果示M0巨噬细胞表达高于肺腺癌细胞和M1、M2巨噬细胞(M0巨噬细胞μ=23.880比A549细胞系μ=3.085, t=21.340, P<0.001、Calu-3细胞系μ=0.462, t=24.032, P<0.001、H1975细胞系μ=2.930, t=21.510, P<0.001、M1巨噬细胞μ=5.303, t=16.043, P<0.001、M2巨噬细胞μ=8.120, t=15.934, P<0.001);Western blot结果示M0巨噬细胞表达高于单核THP-1和M1、M2巨噬细胞(M0巨噬细胞μ=1.216比THP-1细胞系μ=1.000, t=32.940, P<0.001、M1巨噬细胞μ=0.485, t=15.992, P<0.001、M2巨噬细胞μ=0.394, t=42.545, P<0.001)。结论 SEMA4C是潜在的趋化M0巨噬细胞浸润从而引起早期肺腺癌发生淋巴结转移的关键基因。

早期经鼻高流量氧疗在呼吸困难伴低氧血症的急诊患者中的应用:一项随机对照研究

目的探讨在急诊科采用经鼻高流量氧疗(high-fl ow nasal cannula,HFNC)作为初始氧疗,与传统氧疗(conventional oxygen therapy,COT)相比是否可以降低呼吸困难伴低氧血症患者的气管插管率,并改善其他临床结局。方法自2019年10月1日至2020年9月30日在郑州大学第一附属医院进行前瞻性单中心随机对照研究。研究人员于急诊抢救室筛选出呼吸困难伴低氧血症的患者,并进行评估,纳入符合条件的急诊抢救室急性呼吸困难伴低氧血症患者210例,1∶1随机分配至HFNC组或COT组,分组后立即接受HFNC或COT治疗1 h。主要指标包括24 h内气管插管率,次要指标包括本次就诊总气管插管率、升级呼吸支持比率、患者治疗后去向、重症监护室时间和住院病死率等。计量资料根据数据分布采用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验进行分析。计数资料采用卡方检验,并对60天生存率进行Kaplan-Meier分析。结果HFNC降低了就诊24 h内气管插管率(4.8%vs.14.3%,P=0.019),减少了患者被迫升级氧疗的比率(34.3%vs.53.3%,P=0.005),但不影响本次就诊的总气管插管率(χ2=0.463,P=0.509)。在急诊抢救室期间,HFNC使更多的患者达到目标指脉氧饱和度(90.5%vs.78.1%,P=0.02)、呼吸频率降至24次/min以下(68.6%vs.49.0%,P=0.004),但不影响住院时间,住院病死率和60 d存活率(P>0.05)。结论在急诊科初始应用HFNC可降低24 h内气管插管率,降低就诊过程中氧疗措施升级率,改善氧合,缓解呼吸困难。

血浆游离DNA完整性指标在恶性甲状腺肿瘤中的诊断价值

目的探讨血浆中细胞游离DNA(cfDNA)浓度和cfDNA完整性指标作为一种非侵入性方法用于术前甲状腺癌诊断的作用。方法收集2017年2月至4月郑州大学第一附属医院甲状腺外一科收治的75例甲状腺肿瘤患者血浆,其中良性甲状腺瘤患者31例,恶性甲状腺瘤患者44例,用ALU-荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测良恶性肿瘤患者血浆中cfDNA浓度和cfDNA完整性指标,并比较其在这两组中的差异。用受试者工作特征(ROC)曲线研究将血浆中cfDNA浓度和cfDNA完整性指标作为恶性甲状腺肿瘤诊断的可行性。分类资料的比较采用χ2检验。结果恶性甲状腺肿瘤患者血浆中以ALU115为引物定量的cfDNA总浓度为4132μg/L(1055~9372μg/L),良性组1491μg/L(387~3031μg/L);cfDNA完整性指标为0.65(0.56~0.83),良性组0.39(0.25~0.52);恶性组均显著高于良性组(P<0.01,P<0.01)。ROC曲线显示当联合超声检查和血浆cfDNA完整性指标对恶性肿瘤进行诊断时,其灵敏度、特异性、准确率、阳性预测值PPV和阴性预测值NPV分别为95.0%、94.0%、95.0%、89.4%和73.0%。均显著高于以超声、cfDNA总浓度和cfDNA完整性指数单独诊断。结论对于甲状腺肿瘤患者,应首先使用甲状腺超声检查,对于怀疑恶性甲状腺肿瘤的患者,血浆中cfDNA完整性指数有助于恶性甲状腺肿瘤的诊断,从而减少细针穿刺病理活检等有创检查。

神经导航辅助下穿刺抽吸治疗儿童脑脓肿的疗效及预后因素分析

目的探讨神经导航辅助下穿刺抽吸治疗儿童脑脓肿(PBA)的疗效及预后因素。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院2013年1月至2019年1月经神经导航辅助下穿刺抽吸治疗的47例PBA患儿的临床资料。根据格拉斯哥预后评分结果评估手术疗效,将患儿分为预后良好组和预后不良组,对2组患儿的预后因素进行单因素分析和二分类Logistic回归模型多因素分析。结果47例患儿中预后良好38例(80.9%),预后不良9例(19.1%)。单因素分析显示,脓肿体积>4 cm(χ^(2)=5.650,P=0.017)、多发/多房型脓肿(χ^(2)=3.258,P=0.027)、脓肿位于脑深部/功能(χ^(2)=6.187,P=0.013)与PBA预后不良有关。多因素Logistic回归分析显示,脓肿体积>4 cm(OR=5.913,95%CI:2.241~25.917,P=0.023)、脓肿位于脑深部/功能(OR=10.519,95%CI:3.918~62.513,P<0.001)为PBA预后不良的独立危险因素。结论神经导航辅助下穿刺抽吸治疗PBA安全、有效、创伤小,总体疗效满意。脓肿体积>4 cm、脓肿位于脑深部/功能区是预后不良的独立危险因素。

儿童颅内非典型畸胎样/横纹肌样瘤的诊治及预后分析

目的探讨儿童颅内非典型畸胎样/横纹肌样瘤(AT/RT)的诊断、治疗策略及预后。方法回顾性分析2012年1月至2019年6月郑州大学第一附属医院经病理学诊断为颅内AT/RT的15例患儿的临床资料,采用Kaplan-Meier法计算总体生存(OS)率和无进展生存(PFS)率。采用Log-rank比较不同组间生存差异,采用COX回归模型研究影响生存的因素。结果本组患儿男12例,女3例;中位年龄5.5岁(8个月~17.1岁);患儿均首选手术切除,其中全切10例,次全切5例;6例患儿行"手术+放疗+化疗+鞘内注射",4例患儿行"手术+化疗+鞘内注射",2例患儿行"手术+放疗",3例患儿仅行手术治疗。截至2020年1月,15例患儿中位生存期为18个月(1~27个月),存活率为33.3%。患儿1年OS率和PFS率分别为71.5%和49.7%,2年OS率和PFS率分别为17.9%和0。Log-rank检验结果显示<3岁和≥3岁患儿1年OS率分别为87.5%和57.1%,差异有统计学意义(χ^(2)=4.257,P=0.039)。全切组和次全切组患儿1年OS率分别为90.0%和40.0%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.057,P=0.014)。肿瘤未播散组和播散组患儿1年OS率分别为100.0%和33.3%,差异有统计学意义(χ^(2)=9.865,P=0.002)。标危组和高危组患儿1年OS率分别为88.9%和41.7%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.111,P=0.024)。COX回归模型显示,年龄、肿瘤切除程度、肿瘤是否播散和危险度分层是影响患儿OS预后的独立危险因素[风险比(HR)=3.411、3.795、5.245、3.397,P=0.025、0.011、0.001、0.017]。结论儿童颅内AT/RT临床罕见,初诊困难,预后差,最大范围的安全切除仍是首选治疗,年龄、肿瘤切除程度、肿瘤是否播散和危险度分层是AT/RT患儿的独立预后因素。

溴结构域蛋白4通过Noxa诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制

目的探讨溴结构域蛋白4(BRD4)通过Noxa诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制。方法采用小分子干扰RNA(siRNA)沉默骨肉瘤细胞中BRD4的表达,通过蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Noxa及凋亡相关分子表达;应用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,通过Western blot和RT-qPCR方法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)家族蛋白成员Noxa及凋亡相关分子表达。siRNA沉默Noxa在骨肉瘤细胞中的表达后使用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,通过Western blot和RT-qPCR方法检测Noxa的表达,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测骨肉瘤细胞的增殖,采用单因素方差分析比较各组间的差异。结果siRNA沉默BRD4在MNNG/HOS和Saos-2骨肉瘤细胞中的表达后,Western blot实验显示,沉默组BRD4蛋白表达含量低于对照组(MNNG/HOS:0.332±0.076、0.175±0.059比1.000±0.128,F=67.550,P<0.01;Saos-2:0.264±0.038、0.023±0.005比1.000±0.043,F=703.600,P<0.01);沉默组超大B细胞淋巴瘤/白血病(bcl-XL,bcl-2家族蛋白成员)蛋白表达含量低于对照组(MNNG/HOS:0.580±0.100、0.432±0.044比1.000±0.200,F=15.120,P<0.05;Saos-2:0.397±0.102、0.420±0.083比1.000±0.215,F=16.550,P<0.05),沉默组Noxa蛋白表达含量高于对照组(MNNG/HOS:5.508±1.173、4.969±1.335比1.000±0.274,F=16.870,P<0.05;7.085±1.371、13.750±1.567比1.000±0.264,F=83.110,P<0.001),差异均有统计学意义;应用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,处理组Noxa蛋白及mRNA表达高于对照组(Western blot,MNNG/HOS:4.361±0.432、19.570±4.179、22.830±4.035、23.450±4.449比1.000±0.270,F=28.710,P<0.01;Saos-2:5.154±1.577、35.780±4.295、58.530±3.601、62.120±5.153比1.000±0.318,F=192.500,P<0.01;RT-qPCR:MNNG/HOS:2.957±0.803、7.656±1.539、7.258±1.523比1.000±0.026,F=24.01,P<0.01;Saos-2:4.081±0.463、9.594±2.667、7.412±2.300比1.000±0.025,F=13.520,P<0.01);处理组bcl-XL蛋白及mRNA表达水平低于对照组(Western blot,MNNG/HOS:0.864±0.191、0.677±0.155、0.512±0.166、0.365±0.077比1.000±0.189,F=7.646,P<0.05;Saos-2:0.958±0.270、0.799±0.223、0.686±0.234、0.422±0.121比1.000±0.299,F=2.883,P<0.05;RT-qPCR:MNNG/HOS:0.400±0.175、0.341±0.164、0.332±0.041比1.000±0.075,F=15.080,P<0.01;Saos-2:0.530±0.062、0.584±0.051、0.567±0.091比1.000±0.020,F=38.780,P<0.01)。使用siRNA沉默Noxa在Saoa-2骨肉瘤细胞中的表达,再使用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,Noxa蛋白表达水平低于对照组(0.088±0.025、0.183±0.015比1.000±0.112,F=169.900,P<0.01),ARV-825处理组对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用低于对照组,ARV-825浓度为0.03 mol/L时效果明显(1.000±0.097、0.971±0.489比0.090±0.017,F=199.200,P<0.01),差异有统计学意义。结论BRD4通过抑制Noxa对骨肉瘤细胞发挥抗肿瘤作用。