郑州地区22 708例女性HPV感染及基因亚型分布研究

目的分析郑州地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染现状及基因亚型分布情况。方法选取2012年5月至2017年11月在该院进行HPV检测的门诊、住院患者及健康体检女性22708例,采用聚合酶链反应-反向点杂交技术进行HPV基因分型检测,可检测HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82共17种高危型,以及HPV6、11、42、43、81、83共6种低危型,并对检测结果进行统计分析。结果22708例研究对象中HPV感染阳性者7581例,检出率为33.38%。检出率位于前5位的高危型分别为HPV16(12.48%)、52(9.13%)、58(7.33%)、56(5.54%)、53(4.36%);低危型检出率位于前3位的分别为HPV6(8.52%)、43(7.61%)、11(5.44%)。HPV单一感染率为64.53%,多重感染率为35.47%,多重感染中以二重感染为主,占22.48%。2012-2017年每年HPV感染的基因亚型分布情况基本一致,感染亚型主要为HPV16、58、52,HPV感染类型也基本保持一致。结论该地区HPV亚型分布有其特点,以高危型和单一感染为主。

Netrin-1对心肌细胞H9c2缺氧复氧损伤中的保护作用研究

目的研究Netrin-1在心肌细胞H9c2缺氧复氧损伤中的作用,并探讨其机制。方法建立心肌细胞H9c2缺氧复氧损伤模型;将A/R+Netrin-1组(转染pcDNA 3.1-Netrin-1)、A/R+Ctrl组(转染pcDNA 3.1)、A/R+Netrin-1+LY294002组(转染pcDNA 3.1-Netrin-1与抑制剂LY294002共处理)、A/R+Netrin-1+DMSO组(转染pcDNA 3.1-Netrin-1与DMSO共处理)均用脂质体法转染H9c2细胞;ELISA检测细胞中LDH、MDA、SOD的含量;MTT法检测细胞活力;WB检测细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Netrin-1、p-AKT的蛋白表达;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果与A/R+Ctrl组相比,A/R+Netrin-1组细胞中LDH、MDA含量明显降低,SOD含量明显升高,细胞活力显著升高,Bax、Cleaved caspase-3的蛋白表达量均显著降低,Bcl-2蛋白表达量显著升高,Netrin-1、p-AKT蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与A/R+Netrin-1+DMSO组相比,A/R+Netrin-1+LY294002组细胞中LDH、MDA含量明显升高,SOD含量明显降低,细胞活力显著降低,Bax、Cleaved caspase-3的蛋白表达量均显著升高,Bcl-2蛋白表达量显著降低,Netrin-1、p-AKT蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 Netrin-1可通过激活Akt通路促进缺氧复氧心肌细胞活力,抑制凋亡,发挥保护作用,将可为心肌损伤的治疗提供理论依据。

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响

目的 :探讨 8 Br cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca 10 9细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响。 方法 :将培养的Eca 10 9细胞分为 3组 :①加 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②加槲皮素组 (Q组 ) ;③不加任何药物对照组 (C组 )。同时培养 4 8h ,将野生型DNApolβ的cDNA ,EGFRcDNA ,野生型 (wt)p5 3cDNA及c myccDNA分别制备了生物素 /地高辛标记的探针进行原位杂交和RNA斑点印迹阵列。另进行POLB ,XRCC1,VEGF及PCNA的免疫组化染色及免疫斑点印迹阵列。结果 :Br组和Q组的DNApolβ ,EGFR ,c myc基因表达下调而wtp5 3基因表达上调。POLB ,XRCC1,PCNA及VEGF免疫斑点印迹减弱。 8 Br cAMP及槲皮素显著下调Eca 10 9细胞的DNApolβ基因表达及相关癌基因表达 ,同时上调抑癌基因的表达。作为POLB的异二聚体XRCC1及恶性细胞生物标志的PCNA及VEGF表达下调。结论 :分化诱导剂下调Eca 10 9细胞DNApolβ基因表达 ,提示Eca 10 9细胞的polβ基因是高表达的 ;功能调整后的polβ通过相关基因表达的改变尤其是wtp5

食管鳞癌和腺癌转录组差异基因综合分析

目的食管鳞癌和腺癌在分组特征方面有多大的差异目前并不明确。文中旨在分析食管鳞癌、食管腺癌转录组分子特征的差异性。方法下载TCGA数据库中食管鳞癌和腺癌转录组数据,筛选癌及癌旁组织差异表达的RNA(mRNA、lncRNA、miRNA),构建食管鳞癌和腺癌相关的竞争性内源RNA(ceRNA)网络,对重要miRNA进行靶基因预测及GO、KEGG分析,利用生存分析显示食管鳞癌和腺癌共有差异基因。结果ceRNA网络显示:PVT1、LINC00524、miR-204、miR-383、HOXC8、NTRK2等在食管鳞癌和腺癌中均起重要调控作用。miR-204-5p经miRWalk共预测到13227个调控靶基因,在targetscan,miRDB数据库共筛选出232个靶基因。GO功能分析显示38个富集,主要参与细胞-基质粘附的调节、细胞膜投射形态发生、β-连环蛋白结合等过程。KEGG分析显示4个相关通路:Hedgehog信号通路、寿命调节通路、雌激素信号通路、松弛素信号通路。生存分析结果显示,食管鳞癌中与患者生存相关的差异lncRNA包括LINC00261、MLIP-IT1、LINC00504,差异miRNA包括hsa-mir-338,未发现与生存相关的mRNA。食管腺癌中与生存相关的差异lncRNA包括CYP1B1-AS1、HOTAIR,差异mRNA包括IL11、NTRK2、ANGPT2、PBK。食管鳞癌和腺癌共有的差异lncRNA上调占15.4%(150个),下调占26.8%(158个);miRNA上调占24.2%(22个),下调占27.6%(8个);mRNA上调占20.5%(234个),下调占23.7%(418个)。结论食管鳞癌和腺癌存在明显的分子差异,lncRNA、miRNA及mRNA有望为食管癌的治疗和预后预测提供新的靶点与分子标志物。

8-Br-cAMP与顺铂对Eca-109细胞DNA polβ,wtp53基因表达及多药耐受蛋白的影响

目的 :比较分化诱导剂 8 Br cAMP与基因毒性药物顺铂对Eca 10 9细胞DNApolβ及wtp5 3基因表达和多药耐受蛋白的影响。方法 :分别制备生物素和地高辛标记的polβ探针和生物素标记的野生型p5 3(wtp5 3)探针 ,并检测各探针灵敏度。将培养的人食管癌Eca 10 9细胞分组如下 :① 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②不加 8 Br cAMP的对照组 (C1组 ) ,①②组同时培养 4 8h ;③顺铂组 (Pt组 ) ;④不加Pt的对照组 (C2组 ) ,③④组同时培养 2 4h。应用原位杂交技术显示各组细胞polβ基因的表达。对①②及③组细胞进行polβ及wtp5 3双信号原位杂交 ,并应用多药耐受蛋白 (MRP)的免疫组化方法检测耐药性。结果 :生物素标记的polβ探针的杂交信号呈兰紫色细颗粒 ,分布于胞质 ;Br组信号弱于C1组 ,P <0 .0 5。Pt组的信号比C2组强 ,P <0 .0 5。Br组的MRP IR弱于C1组 ,P <0 .0 5 ;Pt组的多药耐受蛋白免疫反应性 (MRP IR)强于C2组 ,P <0 .0 5。地高辛标记的polβ探针的杂交信号呈橙色细颗粒 ,生物素标记的wtp5 3探针的杂交信号呈蓝紫色细颗粒 ,均分布于胞质。在双杂交信号细胞内C1组的橙色强于蓝紫色信号 ;而Br组的蓝紫色信号较明显 ,Pt组的橙色信号较C1组更显著 ,3组相比P皆 <0 .0 5。结论 :8 Br cAMP可下调polβ基因表达及耐药性 ,上?

《霍乱》微课在传染病学混合式教学中的初步探索应用

目的探讨《霍乱》微课在传染病学教学中的可行性和应用效果。方法选取首都医科大学2013级3个五年制临床医学专业班学生(97人)设为实验组、2012级3个五年制临床医学专业班学生(92人)设为对照组作为研究对象。实验组采用微课教学模式,对照组采用传统教学模式。课程结束后,进行期末理论考核评估两组学生的学习效果,并对实验组学生进行问卷调查,以了解学生对微课的认知、评价及对微课教学模式教学效果的评价。结果实验组学生期末理论考核成绩[(75.41±8.18)分]略高于对照组学生考核成绩[(74.17±8.03)分],但差异无统计学意义(P>0.05)。调查问卷结果表明,大部分学生对《霍乱》微课视频感到满意,对微课在传染病学教学中应用的优点表示赞同,认为微课具有短小精悍、新颖、有创意、有助于提高学习兴趣、提高学习主动性、支持碎片化学习、移动学习、泛在学习、个性化学习、翻转课堂学习、混合式学习等优点。结论微课有助于提高学生学习传染病学的兴趣、提高学习主动性,具有广阔的发展前景。

大鼠急性心肌梗死区同种异体骨髓单个核细胞移植观察

目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)在急性心肌梗死区分化增殖潜能及其修复重建心肌作用,为细胞移植治疗急性心肌梗死提供新种子细胞。方法:健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为急性心肌梗死对照组(10只)和急性心肌梗死实验组(10只)。用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,分别将培养基和制备的BM-MNCs悬液心外膜下植入梗死心肌周围,移植术后4周,观察心肌梗死区及其周边区组织形态学特点、心肌梗死面积变化。结果:移植术后4周,实验组与对照组相比心肌梗死面积缩小(P<0.01);实验组心肌梗死区内有BrdU标记阳性的BM-MNCs移植细胞存活,向心肌源性细胞分化并且诱导了大量的新生毛细血管。结论:同种异体BM-MNCs在细胞水平完成了对心肌梗死区再心肌化和再血管化过程,是治疗急性心肌梗死的理想种子细胞。

同一细胞非放射性双原位杂交信号显示技术

目的 :探讨同一细胞内双原位杂交信号的显示技术。方法 :以地高辛标记的polβ探针加生物素标记的表皮生长因子受体 (EGFR)探针或生物素标记的wtp5 3探针对人食管癌Eca 10 9细胞同时进行原位杂交后 ,以anti Dig AP孵育 ,以AP Red为底物显色 ,杂交信号呈桔红色或桔黄色细颗粒。继之以SA AP孵育后以NBT/BCIP底物显色 ,杂交信号呈蓝紫色颗粒。结果 :在同一细胞内可见桔黄色和蓝紫色颗粒双杂交信号。结论 :应用非放射性双杂交信号的原位杂交技术可观察单个细胞内

小儿类风湿关节炎患者外周血CD4^+、CD8^+ T细胞CD_(69)表达及意义

目的分析小儿类风湿关节炎(RA)患者的外周血CD4+、CD8+T细胞CD69表达水平,探讨其在小儿关节炎症发生过程中的免疫病理作用。方法收集32例RA患儿和30例健康儿童外周血标本,利用流式细胞仪检测CD4+、CD8+T细胞CD69表达,分析它们在疾病发展过程中的作用。结果RA患儿外周血CD4+、CD8+T细胞CD69表达明显升高,与健康者比较有统计学差异(P<0·05),所有患儿均接受了有效的药物治疗,待症状控制后,分析发现患者的CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平显著下降(P<0·05)。结论RA患儿外周血T细胞表达CD69水平明显升高,提示T细胞在关节炎症病变过程中激活、增殖,参与关节滑膜组织及全身免疫应答。

宫颈癌相关新癌基因hWAPL的原核表达和免疫原性分析

目的:构建hWAPL原核表达载体,诱导hWAPL蛋白表达并制备其多克隆抗体。方法:RT-PCR技术扩增hWAPL cDNA片段,连接到pMD18-T载体,测序正确后亚克隆入原核表达载体pET28a并转化BL21菌株,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,制备hWAPL蛋白并免疫BALB/c小鼠,ELISA法测定其抗体效价,Western blot鉴定表达hWAPL蛋白的免疫原性。结果:①经PCR、双酶切鉴定和测序,证实hWAPL正确插入pMD18-T载体,序列正确。②经IPTG诱导的pET28a-hWAPL重组菌表达出相对分子质量(Mr)约为25000的蛋白,与预期蛋白Mr相符。③免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1∶3200。④Western blot结果显示Mr约25000处有反应蛋白条带。结论:pET28a载体能够表达hWAPL蛋白,表达蛋白具有良好的免疫原性,其免疫小鼠后获得的多克隆抗体具有高效价和特异性。

胃腺癌中ceRNA网络的构建和miR-204-5p、HOXC8基因的表达及其相关性检测

目的:构建胃腺癌竞争性内源RNA(ceRNA)网络,并观察miR-204-5p和HOXC8 mRNA之间的相关性。方法:利用生物信息学方法和TCGA转录组数据库筛选胃腺癌差异基因,构建ceRNA网络,检测了miR-204-5p和HOXC8 mRNA在胃腺癌组织和SGC7901细胞株中的表达,并分析了两基因间的相互关系。结果:成功构建胃腺癌ceRNA网络,miR-204-5p是重要节点基因,并预测到其靶基因HOXC8;在32例胃腺癌中检测到miR-204-5p低表达,HOXC8高表达,两者呈负相关关系;上调胃腺癌SGC7901细胞中miR-204-5p的表达可以抑制HOXC8 mRNA的表达。结论:miR-204-5p和HOXC8可能是潜在的胃腺癌诊断指标,两者可能存在ceRNA调控关系。

IL-21及其受体表达与溃疡性结肠炎分级的相关性

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者炎性反应严重程度分级与IL-21及其受体表达之间的关系。方法收集34例UC患者(包括轻度组10例、中度组8例、重度组6例、缓解组10例)和30例健康成人外周血标本,分离血清和外周血单个核淋巴细胞(PBMC),双抗夹心法ELISA检测血清IL-21水平,流式细胞仪检测外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞IL-21R的表达。结果UC患者血清IL-21水平及外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞IL-21R表达水平与健康对照比较显著升高(P<0.01),并且与病情严重程度有一定相关性。结论IL-21及其受体IL-21R在UC肠黏膜炎症病变过程中起着重要作用,可能参与了肠道黏膜组织免疫损伤过程。

食管鳞状细胞癌组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达及与预后的关系

目的:探讨食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达及与预后的关系。方法:制备组织芯片,应用免疫组化SP法检测63例食管鳞癌及其癌旁正常食管黏膜组织中Galectin-9和MMP-2蛋白的表达,分析2种蛋白的表达与临床病理指标和预后的关系。结果:食管鳞癌组织中Galectin-9蛋白的阳性表达率为62.5%,低于癌旁正常食管黏膜组织的89.3%(χ2=11.529,P<0.001),其表达与肿瘤的分化程度有关(P=0.001),且阳性表达者生存期更长(P=0.013)。食管鳞癌组织中MMP-2蛋白的阳性表达率为67.9%,高于癌旁正常食管黏膜组织的35.7%(χ2=9.633,P=0.001),其表达与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),且阳性表达者生存期较短(P=0.036)。结论:食管鳞癌组织中Galectin-9低表达,MMP-2高表达;检测二者可用于判断食管鳞癌预后。

侵袭及非侵袭性KYSE150细胞的体外分离及p75NTR的表达

目的:体外分离人食管鳞状细胞癌(ESCC)KYSE150细胞系侵袭和非侵袭性细胞亚系,比较2种细胞亚系p75NTR的表达。方法:用涂有Matrigel的Transwell小室对KYSE150进行体外侵袭实验,回收侵袭性和非侵袭性细胞,用免疫细胞化学SP法检测2者p75NTR的表达情况。结果:镜下观察,2种细胞亚系形态无明显差异。侵袭性细胞亚系p75NTR表达较非侵袭性细胞亚系显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:用涂有Matrigel的Tanswell可成功分离及回收侵袭性和非侵袭性KYSE150细胞;可能存在ESCC干细胞。

hIFN-β基因重组腺病毒载体的构建

目的构建hIFN-β基因的腺病毒载体,为探索hIFN-β在肿瘤基因治疗中的作用作准备。方法从健康人外周血中提取出基因组DNA,pyrobestTaq酶PCR法扩增出hIFN-β基因片段。将目的基因克隆入中间载体pMD18T载体,经蓝白筛选和PCR筛选后测序证实序列无误。酶切目的基因并将之克隆入穿梭载体pAdTrackCMV中,将新形成的pAdTrackCMVhIFNβ用限制性内切酶PmeI线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy1共转染大肠杆菌株BJ5183细胞中。卡那霉素及酶切筛选出重组子pAdhIFNβ,内切酶pacI再次将重组子线性化,脂质体转染细胞株HEK293。借助GFP的表达可以在转染的2～3天观察到包装病毒AdhIFNβ产生,7～10天出现病毒斑。结果经PCR法及酶切证实各中间过程载体,且最终的包装病毒中携带有目的基因hIFNβ。结论大肠杆菌内同源重组法能有效和较为方便的构建出含有目的基因的腺病毒载体AdhIFNβ,重组子能够在HEK293细胞中扩增。

食管癌术后早期进食显著改善患者的“疲劳/疼痛”型和“吞咽困难”症状

目的评估胸腹腔镜食管癌根治术后早期进食与常规进食之间的症状群差异。方法早期进食组为胸腹腔镜食管癌根治术后第1天经口进食,常规进食组为术后第7天经口进食。术后第6个月,用欧洲癌症调查和研究协会的QLQ-30和QLQ-OES18问卷进行随访并填写问卷。结果早期进食组45例患者,常规进食组25例患者。所有患者中,有16例(16/70,22. 9%)患者表现有"疲劳/疼痛"型症状群,早期进食组的"疲劳/疼痛"显著少于常规进食组(P=0. 011),早期进食组"吞咽困难"型症状群也显著少于常规进食组(P=0. 02),"反流/咳嗽"型症状群两组差异无统计学意义(P=0. 061)。结论食管癌术后早期进食较常规第7天进食能够显著减少患者术后第6个月的"疼痛/疲劳"型和"吞咽困难"型等症状群。

ADAMTS9-AS1-SEMA3G通路对胰腺癌组织中免疫细胞的影响

目的影响胰腺癌中免疫细胞浸润的机制尚未明确。文章旨在研究胰腺癌中影响免疫浸润相关的lncRNA-mRNA调控通路。方法利用TCGA以及GEO基因表达数据筛选共同的差异lncRNAs,并对筛选出的差异lncRNAs进行生存分析、靶基因预测、GO、KEGG富集分析、免疫浸润分析以及基因集富集分析(GSEA),找到免疫浸润相关通路。结果 ADAMTS9-AS1高表达的胰腺癌患者较低表达患者有更高的生存率(P=0.010)。ADAMTS9-AS1相关性较强的差异mRNA,GO富集结果共筛选到356个条目,结果与免疫相关,如白细胞-细胞黏附、肿瘤坏死因子超家族细胞因子产生的调控等;KEGG结果共筛选到9个通路,分别为金黄色葡萄球菌感染、细胞周期、补体和凝血级联、卵母细胞减数分裂、孕酮介导的卵母细胞成熟、破骨细胞分化、类风湿关节炎、百日咳以及人T细胞白血病病毒1感染。对照IMMPORT数据库中2498个肿瘤免疫相关基因,发现SEMA3G为免疫相关基因,且与ADAMTS9-AS1相关性最高(r=0.657,P<0.05)。ADAMTS9-AS1及SEMA3G的表达与免疫细胞浸润呈正相关(P<0.05)。GSEA富集分析结果显示ADAMTS9-AS1也可能与柠檬酸盐循环、脂肪酸代谢、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、溶酶体、过氧化物酶体、丙酸盐代谢、蛋白酶体、丙酮酸盐代谢、核糖体、缬氨酸-亮氨酸和异亮氨酸降解通路相关。结论 ADAMTS9-AS1-SEMA3G与胰腺癌的预后和免疫浸润水平相关,可为后续的基因验证实验和免疫研究提供理论依据。

原发性肝癌GPC3基因异常表达和相关miRNA与lncRNA预测

目的分析GPC3对原发性肝细胞癌(HCC)的诊断价值,并预测其非编码RNA调控机制。方法用组织芯片和免疫组化方法检测GPC3蛋白表达,并用在线工具和TCGA数据库分析、预测GPC3相关的mi RNA和lnc RNA。结果 HCC中GPC3 m RNA和蛋白表达均高于癌旁组织,且和HCC肿瘤病理分级相关,GPC3蛋白表达和患者临床分期相关。预测到和GPC3存在调控关系的mi RNA 10个、lnc RNA 2个。结论 GPC3 m RNA和蛋白可作为HCC的诊断标志物,预测到与GPC3相互作用的非编码RNA。