多奈哌齐促进脑梗死后室管膜下区神经发生的实验研究

目的:探讨多奈哌齐对脑梗死后室管膜下区神经发生的作用。方法:将60只雄性小鼠随机分为假手术+溶剂组、脑梗死+溶剂组、脑梗死+多奈哌齐组,各20只。建立局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用Mash1标记神经干/祖细胞,Doublecortin(DCX)标记神经母细胞。免疫荧光观察各组小鼠室管膜下区DCX的表达,Western blot分析各组小鼠室管膜下区Mash1和DCX表达量的变化。结果 :MCAO术后10 d,各组小鼠室管膜下区均可观察到表达DCX的细胞,且脑梗死+溶剂组DCX和Mash1的表达较假手术+溶剂组明显增多(P<0.05),脑梗死+多奈哌齐组DCX和Mash1的表达较另两组显著增加(P<0.05)。结论:多奈哌齐作为一种胆碱酯酶抑制剂,能够促进脑梗死后室管膜下区神经发生。

不同神经递质系统调控室管膜下区神经发生的研究进展

随着人们生活水平的提高和社会老龄化的进展，脑卒中已成为严重危害国民健康的重大疾病之一。脑梗死是最常见的脑卒中类型。发病率、致残率、死亡率均很高。研究显示，脑梗死后室管膜下区（subventricularzone，SVZ）神经发生处于亢进状态。新生的神经前体细胞一方面能够迁移至梗死灶周围，通过分化为神经元或神经胶质细胞以替代、修复受损脑组织；另一方面通过旁分泌功能发挥抗炎、抗凋亡、神经调节等作用，促进神经功能恢复。这提示SVZ神经发生可能是脑梗死治疗的重要靶点。

骨髓单个核细胞对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响

目的研究骨髓单个核细胞（BMMNCs）对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分为PBS治疗组和BMMCs治疗组。线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型；梯度离心法提取BMMNCs；酶联免疫吸附法（ELISA）评价常氧及低氧培养条件下BMMNCs分泌IL-10、VEGF和IGF-1的能力。脑梗死后6h经尾静脉注射BMMNCs或PBS，脑梗后1，4，7d采用神经功能损害评分表（mNSS）、免疫荧光法、Fluoro—JadeB（FJB）染色进行神经功能、小胶质细胞活性及神经元变性死亡数目的评估。脑梗死后7d，TTC染色评价脑梗死体积。结果（1）BMMNCs在常氧或低氧条件下培养24h后，低氧环境下BMMNCs分泌细胞因子（IL-10、VEGF和IGF-1）的能力明显强于常氧环境，差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）与PBS治疗组相比，BMMNCs治疗组小鼠在脑梗死后第4，7天的mNSS评分、小胶质细胞的活性、神经元变性死亡数量均显著降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）BMMNCs治疗组小鼠脑梗死体积[（27．8±7．5）％]明显小于PBS治疗组[（37．1±6．9）％]，差异有统计学意义0P〈0．05）。结论骨髓单个核细胞可通过分泌细胞因子IL-10、VEGF和IGF-1抑制小胶质细胞的活性，明显抑制脑梗死后神经元的变性死亡，减少脑梗死体积，促进神经功能恢复。

骨髓单核细胞移植对脑梗死小鼠白质损伤及血管再生的影响

目的 探讨评价骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells,BMMNCs）移植对大脑中动脉栓塞小鼠脑白质损伤的疗效及梗死周围血管再生的影响.方法 线栓法将成年雄性小鼠制成大脑中动脉栓塞模型,模型成功后按随机表法随机分成假手术组,MCAO组,PBS组及BMMNCs移植组（BMMNCs组）.梯度密度离心法提取分离BMMNCs,模型成功后24 h经尾静脉移植入0.5 ml含1×106个BMMNCs细胞悬液,PBS组给予等体积的PBS溶液,神经功能学评分（mNSS）评价小鼠神经功能,luxol fast blue（LFB）染色观察梗死周围脑白质损伤情况,免疫荧光染色观察梗死周围血管再生情况.结果 除假手术组外,其他各组均有不同程度的神经功能缺损.梗死后56 d,BMMNCs组LFB着色减少百分比[（24.06±5.48）％]明显低于MCAO组[（62.22±5.38）％]及PBS组[（61.22±5.48）％],BMMNCs组血管密度[（249.8±11.8）个/mm2]明显高于MCAO组[（119.1 ±11.2）个/mm2]及PBS组[（114.3±12.1）个/mm2],差异有统计学意义（P＜0.05）,MCAO组与PBS组相比,LFB着色减少百分比和血管密度差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 BMMNCs移植可促进血管新生,增加梗死周围区血管密度,减轻脑白质损伤程度,显著改善脑梗死小鼠神经功能.

儿童中央轴空病5例的临床、肌肉病理和分子生物学特征

目的探讨儿童中央轴空病的临床、肌肉病理和分子生物学特征。方法收集2011年1月至2016年3月郑州大学第五附属医院诊治的5例儿童中央轴空病的病历资料，对其临床、肌肉病理和分子生物学特征进行回顾性分析。结果 1．临床特征：主要为出生时肌张力严重低下、非进展或缓慢进展的对称性四肢近端无力、高腭弓、脊柱侧弯、关节脱位等。2．肌肉病理特征：可见萎缩和肥大肌纤维，结缔组织增生，肌纤维中央异常结构不明显；还原型辅酶I四氮唑还原酶、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶染色均可见典型中央轴空现象，部分肌纤维存在偏心轴空、多轴空和微小轴空；单磷酸腺苷脱氢酶染色可见酶活性不均匀、轴空边缘深染；苏丹黑B、高碘酸-Sehiff反应染色显示中央轴空区域脂质和糖原减少；三磷酸腺苷酶学染色显示轴空主要位于I型肌纤维，I型肌纤维占绝对优势。3．分子生物学特征：RYR1基因外显子100～102发生突变，依次为c．14566C〉T、C．14582G〉A、C．14387A〉G、C．14677C〉T和C．14693T〉C，3例患儿的父亲或母亲有同样的突变。结论儿童中央轴空病临床表现复杂，肌肉病理是诊断的金标准，RYRl基因突变主要集中于c端外显子100～102，认识这些特征有助于早期诊治、减少误诊。

黄体酮对脑梗死大鼠血脑屏障保护作用的机制研究

目的观察黄体酮对大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠脑部炎症反应的抑制作用以及对血脑屏障结构的影响。方法健康雄性SD大鼠按照完全随机数字表法分为4组，即假手术组、缺血组、溶剂治疗组和黄体酮治疗组。后三组采用线栓法制作MCAO大鼠模型，假手术组只分离、暴露血管，不结扎动脉，不插入尼龙鱼线；黄体酮治疗组造模成功后腹腔注射黄体酮，溶剂治疗组给予等体积的环糊精溶液治疗。Westernblot检测梗死半球脑组织内TNF—α与血脑屏障紧密连接蛋白主要成分Claudin5的表达情况，并通过干湿重法检测脑组织含水量的变化。结果脑梗死发生后，脑部TNF-α的表达水平明显升高，Claudin5蛋白的表达水平明显下降。黄体酮治疗后，梗死半球脑组织内TNF-α的表达水平明显下降，Claudin5蛋白的丢失减少，脑组织含水量亦下降。结论黄体酮可以通过抑制脑梗死大鼠脑部的炎症反应，减轻血脑屏障的破坏，进而发挥神经保护作用。

正常与脑梗死后大鼠来源的骨髓单个核细胞治疗缺血性脑卒中的效果对比

目的对比正常与梗死后大鼠来源的骨髓单个核细胞（Nor—BMMNCs；Isch—BMMNCs）移植治疗大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠的疗效及对血管新生效应的影响。方法线栓法制作大鼠MCAO模型；梯度离心法分别提取Nor—BMMNCs及Isch—BMMNCs；用酶联免疫吸附法（ELISA）检测常氧及低氧条件下体外培养BMMNCs的上清液中VEGF、bFGF、Ang-1的表达水平；MCAO1d后行股静脉1×10^7BMMNCs或PBS输注并行mNSS；细胞移植后14d行TTC染色及免疫荧光检测。结果低氧条件下培养1d后，Isch—BMMNCs组分泌促血管因子的量[VEGF：（114．24±10．6）pg／ml，bFGF：（133．6±19．7）pg／ml，Ang-1：（131．3±21．9）pg／m1]明显高于Nor—BMMNCs组[VEGF：（96．04±12．6）pg／ml，bFGF：（107．1±19．6）pg／ml，Ang-1：（103．04±17．0）pg／m1]，差异有统计学意义（P〈0．05）；mNSS评分显示，在细胞移植后10d，Isch—BMMNCs组神经缺损症状明显改善，与Nor-BMMNCs组及PBS组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；细胞移植14d后，Isch—BMMNCs组微血管数目及脑梗死体积[（372．5±40．1）支／mm^2，（18．7±4．5）％]与Nor—BMMNCs组[（314．0±40．1）支／mm^2，（26．5±7．2）％]及PBS组[（222．3±56．7）个／mm^2，（34．5±6．3）％]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Isch—BMMNCs治疗缺血性脑卒中的价值明显高于Nor—BMMNCs，可能与其分泌促血管因子能力增强有关。

自体骨髓单核细胞移植对脑梗死的治疗作用

目的观察自体骨髓单核细胞移植对大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠脑梗死体积、血脑屏障破坏程度及行为学评分等的影响，评价骨髓单核细胞移植对脑梗死的治疗价值。方法将72只成年雄性SD大鼠按完全随机数字表法分为假手术组、模型组、生理盐水组及骨髓单核细胞移植组，后三组采用线栓法制作MCAO大鼠模型。采用梯度离心法分离大鼠股骨骨髓腔中的单核细胞，并通过流式细胞术检测CD45＋细胞比例。将分离得到的自体骨髓单核细胞经颈静脉途径移植到骨髓单核细胞移植组大鼠体内，生理盐水组大鼠给予等体积的生理盐水注射。造模后72h时伊文氏蓝染色及脑组织含水量检测显示血脑屏障的破坏情况，造模后1d、3d、7d时通过Zea—Longer评分评价大鼠神经功能变化，最后一次Zea—Longer评分结束后TTC染色检测大鼠脑梗死体积。结果流式细胞术检测发现骨髓单核细胞中CD45＋细胞的比例为91．2％。脑梗死体积、伊文氏蓝含量及脑组织含水量在模型组与生理盐水组中均较高，且相互比较差异无统计学意义（P〉0．051；骨髓单核细胞移植组脑梗死体积、伊文氏蓝含量及脑组织含水量均明显下降．较模型组与生理盐水组差异均有统计学意义（P〈0．05）。Zea．Longer评分显示，除假手术组外，其余大鼠均有不同程度的神经功能缺损：造模后7d时骨髓单核细胞移植组神经功能评分明显改善，与模型组及生理盐水组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论骨髓单核细胞分离过程简单，利用其移植治疗脑梗死可以显著减轻脑损伤程度并促进神经功能恢复，对脑梗死具有很高的治疗价值。