FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖凋亡及cyclinD1、cyclinA表达的影响

目的探讨FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖、凋亡及cyclinD1、cyclinA表达的影响。方法体外构建FLT3靶向短发夹状干扰RNA(FLT3-shRNA),转染HL-60细胞,RT-PCR、流式细胞术(FCM)鉴定FLT3的表达;CCK-8法检测细胞增殖活力;FCM检测细胞周期;AnnexinV染色法检测凋亡;RT-PCR及Western blot检测cyclinD1,cyclinA在mRNA、蛋白水平的表达。结果FLT3-shRNA转染可下调FLT3的表达,它对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达(81.66±10.25)%,(76.76±11.23)%。FLT3表达下降后细胞增殖活力受到抑制,转染48h抑制率达(31.66±2.97)%,72h达(33.10±3.43)%;细胞生长曲线低平,缺乏指数增殖特征。与对照组比,转染48h细胞周期重新分布,G0/G1期(58.48±6.17)%的明显上升,S期(27.72±5.10)%下降;细胞早期凋亡率(8.95±0.88)%上升;细胞内cyclinD1的mRNA、蛋白表达下降,cyclinA的表达无明显改变。结论FLT3靶向RNA干扰通过下调cyclinD1表达有效地抑制细胞增殖,具有潜在的临床应用价值。

FLT3靶向RNA干扰对THP-1细胞增殖的影响及其可能机制

目的研究FAM样酪氨酸激酶3(FLT3)靶向RNA干扰对急性髓细胞白血病细胞株THP-1的细胞增殖和周期的作用,探讨其可能的机制。方法体外转录合成FLT3靶向短发夹状干扰RNA(FLT3-shRNA),转染THP-1细胞;CCK-8法检测增殖抑制率、绘制增殖曲线,流式细胞法测细胞周期,半定量RT-PCR及Western blot测干扰前后cyclin D1和cyclin A的mRNA、蛋白水平的表达。结果FLT3-shRNA干扰可抑制THP-1细胞增殖,抑制率为(36.70±3.67)%;干扰后THP-1细胞增殖曲线滞后于对照,曲线低平缺乏典型的指数增殖特征;干扰48h细胞G0/G1期比例(65.51±4·48)%明显增高,S期(25.11±2.70)%下降;干扰后cyclinD1的表达下降,48、72h对其mRN A的抑制率分别是(37.09±3·76)%、(34.30±7.60)%,对蛋白的抑制率是(37.51±1.58)%、(39.40±5.44)%,cyclin A的mRNA、蛋白的表达无变化。结论FLT3靶向RNA干扰可抑制THP-1细胞增殖,其机制可能与下调cyclin D1的表达有关。

FLT3靶向短发夹状干扰RNA体外转录合成及作用

FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关。为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRNA(shRNA1、shRNA2、shRNA3),体外转染THP-1细胞;以RT-PCR法检测FLT3mRNA水平表达,用流式细胞术、免疫荧光测定法检测FLT3蛋白的表达。结果显示:shRNA1、shRNA3可显著下调FLT3mRNA的表达,其中shRNA1的抑制作用较强。25nmol/LshRNA1转染48小时对FLT3mRNA的抑制率是(72.95±2.07)%,作用可达72小时。5nmol/L及以上浓度的shRNA1对FLT3mRNA表达有下调作用,作用存在量-效关系。15nmol/LshRNA1的抑制率是(67.53±0.66)%。FLT3蛋白位于细胞膜上,shRNA1对其有较强的抑制作用,转染72小时蛋白抑制率达(79.67±0.66)%。结论:FLT3-shRNA1具有较好的FLT3基因靶向抑制作用,可作为进一步研究该基因作用机制及靶向治疗可能性的工具。

FMS样酪氨酸激酶3靶向RNA干扰对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响

目的探讨短发夹状干扰 RNA(shRNA)诱导 FMS 样酪氨酸激酶3(FLT3)的靶向抑制对急性单核细胞白血病(AMOL)细胞株 THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成 FLT3靶向 shRNA(FLT3-shRNA),转染 THP-1细胞。以半定量逆转录 PCR(RT-PCR)、流式细胞法(FCM)检测细胞 FLT3在 mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8(CCK-8)检测细胞增殖活力,FCM 法检测细胞周期,DNA 梯度条带(DNA Ladder)和 Annexin V-FITC 染色法分析细胞凋亡。结果合成的 FLT3-shRNA 15 nmol/L 转染48 h 对 FLT3 mRNA 和蛋白的抑制率分别达(72.95±2.07)%、(65.39±5.57)%。shRNA 干扰后细胞增殖活力受到抑制,48 h 抑制率达(36.66±3.67)%,72 h 达(35.56±0.73)%。转染48 h 细胞周期出现 G_0/G_1期到 S 期的阻滞,FLT3-shRNA 组 G_0/G_1期的细胞百分比(65.71±4.47)%明显高于对照组,S 期(25.11±2.70)%低于对照组。FLT3-shRNA 作用48 h 有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC 检测细胞的早期凋亡率(18.59±2.07)%明显高于对照组。结论由 shRNA 诱导的 FLT3靶向干扰可有效的抑制 THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童 AMOL 治疗中具有潜在的价值。