骨髓单个核细胞移植在脑梗死小鼠脑内分化为星形胶质样细胞的研究

目的探讨骨髓单个核细胞(BMMNC)移植对大脑中动脉栓塞小鼠的治疗作用以及脑内分化情况。方法选择41只雄性昆明小鼠,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型后,将制模成功的34只小鼠随机分为溶剂组和BMMNC移植组(移植组),每组17只。分别于模型成功后1、3、7、14和28d采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评价小鼠神经损害严重程度,免疫荧光双标法观测BMMNC脑内分化情况。结果与溶剂组比较,移植组1、3、7、14和28d各时间点mNSS明显降低[(12.54±1.50)分vs(13.02±1.52)分、(9.52±1.25)分vs(11.17±1.05)分、(7.92±1.24)分vs(10.75±1.06)分、(5.82±1.23)分vs(7.93±1.23)分、(4.92±1.25)分vs(6.83±1.12)分,P<0.05];移植组梗死皮质及海马齿状回区5-溴脱氧尿嘧啶核苷和胶质纤维酸性蛋白双标阳性细胞。结论BMMNC移植在脑梗死小鼠脑内分化为星形胶质样细胞,能显著改善脑梗死小鼠神经功能。

激活蛋白-1、巨噬细胞游走抑制因子与人颈动脉粥样硬化斑块的关系研究

目的探讨激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)、巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在人颈动脉粥样硬化斑块中的表达变化及作用机制。方法收集60例人颈动脉粥样硬化斑块标本(试验组,A组)和30例正常人肠系膜动脉标本(对照组,B组)。根据颈动脉超声检查结果将颈动脉粥样硬化斑块标本分为软斑组(A1,n=20)、混合斑块组(A2,n=20)、硬斑组(A3,n=20)。分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法测定标本中AP-1亚单位c-Jun mRNA及蛋白表达水平,反映AP-1的表达水平。用酶联免疫法(ELISA)测定斑块组和对照组血清中MIF水平。结果 (1)人颈动脉粥样硬化斑块中c-Jun mRNA及蛋白较对照组表达上调(P<0.05),A1组较A3组表达显著升高(P<0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P>0.05)。(2)斑块组比健康对照组血清中MIF的含量显著增高(P<0.05);A1组较A3组含量显著增高(P<0.05),A2组与A1组和A3组分别比较无明显差异(P>0.05)。(3)在人颈动脉粥样硬化斑块中,MIF浓度与c-Jun表达水平明显呈正相关(r=0.759,P<0.01)。结论 AP-1和MIF与人颈动脉粥样硬化斑块的形成及稳定性显著相关,其可能作为预测颈动脉粥样硬化斑块病变情况及斑块稳定性的一个指标。AP-1表达量与MIF浓度越高,斑块不稳定性越高。

脑梗死后室管膜下区ChAT^+神经元促进梗死周围区血管新生

目的:观察脑梗死后室管膜下区(SVZ)胆碱乙酰基转移酶阳性(ChAT^+)神经元的活性变化及其对脑梗死周围区血管新生的影响,并探讨其可能的相关信号通路。方法:将小鼠随机分为假手术组、脑梗死组、阿托品组。采用电凝法夹闭大脑中动脉制备脑梗死模型。利用蛋白免疫印迹法测定各组ChAT/乙酰胆碱酯酶(AChE)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体2(VEGFR2)及其下游分子磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)的表达情况,利用免疫荧光法观察表达VEGFR2和5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)/CD31的细胞数量变化。结果:脑梗术后14 d,脑梗死组SVZ区ChAT/AChE较假手术组高(P<0.05)。与假手术组相比,脑梗死组鼠的梗死周围区VEGF、VEGFR2、pERK表达量以及VEGFR2、BrdU/CD31阳性细胞数明显增多(P<0.05);与脑梗死组相比,阿托品组的上述指标含量减少(P<0.05)。结论:脑梗死后,SVZ区ChAT^+神经元活性相对增强,胆碱能系统效应增强,其可通过上调VEGF-VEGFR2信号通路促进脑梗死周围区的血管新生,促进脑功能恢复。

高迁移率蛋白1、核因子-κB与人颈动脉粥样硬化斑块稳定性关系的研究

目的探讨高迁移率蛋白1(HMGB1)、核因子-κB(NF-κB)与人颈动脉粥样硬化斑块的稳定性关系。方法收集54例人颈动脉粥样硬化斑块标本作为颈动脉斑块组,其依据术前螺旋CTA检查将颈动脉粥样硬化斑块分为软斑组(A1组,n=21)、混合斑组(A2组,n=15)、硬斑组(A3组,n=18)。收集25例人肠系膜动脉标本及其血清作为对照组(B组,n=25)。分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western Blotting检测HMGB1mRNA及蛋白表达水平,用酶联免疫法(ELISA)法检测颈动脉斑块组和对照组血清中NF-κB含量。结果颈动脉粥样硬化斑块的HMGB1 mRNA及蛋白表达与对照组相比显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);而且软斑组HMGB1 mRNA及蛋白表达水平明显高于硬斑组,差异有统计学意义(P<0.05);混合斑组与软斑组和硬斑组分别比较无统计学差异(P>0.05)。颈动脉斑块组患者血清中NF-κB含量明显高于对照组(P<0.05);其中软斑组患者血清中NF-κB含量明显高于混合斑及硬斑组(P<0.05);混合斑组与软斑组和硬斑组分别比较无统计学差异(P>0.05);颈动脉斑块组中NF-κB含量与HMGB1蛋白表达水平呈明显正相关表达(r=0.721,P<0.05)。结论 HMGB1和NF-κB与人颈动脉粥样硬化斑块稳定性密切相关,其可能成为预测人颈动脉斑块病变情况及稳定性的指标。

多奈哌齐促进脑梗死后室管膜下区神经发生的实验研究

目的:探讨多奈哌齐对脑梗死后室管膜下区神经发生的作用。方法:将60只雄性小鼠随机分为假手术+溶剂组、脑梗死+溶剂组、脑梗死+多奈哌齐组,各20只。建立局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用Mash1标记神经干/祖细胞,Doublecortin(DCX)标记神经母细胞。免疫荧光观察各组小鼠室管膜下区DCX的表达,Western blot分析各组小鼠室管膜下区Mash1和DCX表达量的变化。结果 :MCAO术后10 d,各组小鼠室管膜下区均可观察到表达DCX的细胞,且脑梗死+溶剂组DCX和Mash1的表达较假手术+溶剂组明显增多(P<0.05),脑梗死+多奈哌齐组DCX和Mash1的表达较另两组显著增加(P<0.05)。结论:多奈哌齐作为一种胆碱酯酶抑制剂,能够促进脑梗死后室管膜下区神经发生。

骨髓单个核细胞分泌细胞因子对脑梗死后小鼠细胞分化的影响

目的研究骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells;BMMNCs)分泌的细胞因子对脑梗死小鼠细胞分化的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分为PBS治疗组和BMMCs治疗组。线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型;梯度离心法提取BMMNCs;酶联免疫吸附法(ELISA)评价常氧及低氧培养条件下BMMNCs分泌bFGF、VEGF和IGF-1的能力。脑梗死后24 h经尾静脉注射BMMNCs或PBS,脑梗死后1、4、7、14 d行神经功能损害评分(modified Neurological Severity Scores,mNSS)并评价脑组织含水量;脑梗死后7 d TTC染色评价脑梗死体积;脑梗死后14 d免疫荧光检测BMMNCs在脑内的存活、迁移、分布和分化情况。结果 (1)BMMNCs在常氧或低氧条件下培养24 h后,低氧环境下BMMNCs分泌细胞因子(bFGF、VEGF和IGF-1)的能力明显强于常氧环境,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与PBS溶剂组相比,BMMNCs治疗组小鼠在脑梗死后4、7、14 d的mNSS评分显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)BMMNCs治疗组小鼠在4、7 d脑组织含水量明显低于PBS治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);(4)BMMNCs能够迁移分布至小鼠脑损伤区,并分化为星形胶质细胞和小胶质细胞。结论骨髓单个核细胞可通过分泌细胞因子bFGF、VEGF和IGF-1促进细胞分化,促进神经功能恢复,减少脑梗死体积,减轻脑水肿。

胆碱能信号调节脑梗死后自体神经干细胞分化

目的探讨胆碱能信号对内源性神经干细胞(NSC)在脑梗死周围区分化的调节。方法将小鼠随机分为假手术+溶剂组、脑梗死+溶剂组、脑梗死+多奈哌齐组、脑梗死+阿托品组,每组25只。线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。术后1、7、14、21 d进行神经功能缺损评分,第3天测脑含水量,第14、28天免疫荧光观察梗死周围区或相应位置Neu N/Brd U、CNPase/Brd U、GFAP/Brd U阳性细胞数。结果小鼠脑梗死后脑含水量增高(P<0.05),多奈哌齐处理可降低其脑含水量和神经功能缺损评分(P<0.05);梗死后梗死周围区Neu N/Brd U、CNPase/Brd U、GFAP/Brd U阳性细胞增多(P<0.05);对比脑梗死+溶剂组、脑梗死+多奈哌齐组Neu N/Brd U、CNPase/Brd U、GFAP/Brd U阳性细胞增多(P<0.05),脑梗死+阿托品组Neu N/Br-d U、CNPase/Brd U阳性细胞减少(P<0.05)。结论胆碱能信号促进NSCs在脑梗死周围区向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞共同分化,减轻脑水肿,促进脑梗死后神经功能恢复。

脂联素、肿瘤坏死因子-α、白介素一6与人颈动脉粥样硬化斑块关系的研究

目的探讨脂联素（APN）、肿瘤坏死因子-α（TNF．仪）、白介素一6（IL．6）与人颈动脉粥样硬化斑块形成及稳定性的关系。方法选取郑州大学第五附属医院血管外科自2011年4月至2012年7月行颈动脉内膜剥脱术患者48例作为颈动脉粥样硬化斑块组，并依据术前颈动脉CTA检查结果分为软斑组（n=16）、混合斑组（n=16）和硬斑组（n=16）；选取普通外科因外伤手术切除的25例肠系膜上动脉标本作为标本对照组；选取同期体检健康者25例作为健康对照组。采用酶联免疫吸附法（ELISA法1测定颈动脉粥样硬化斑块组和健康对照组血清TNF-α、IL．6含量，应用反转录一聚合酶链反应（RT—PCRl和Westernblotting方法分别检测颈动脉粥样硬化斑块组和标本对照组APNmRNA和蛋白表达水平。结果与健康对照组相比，软斑组、混合斑组、硬斑组血清TNF-α、IL一6含量均明显增高，差异有统计学意义（P〈0．05）；且软斑组TNF-α、IL．6含量明显高于硬斑组，差异有统计学意义（P〈0．05）。与标本对照组相比，软斑组、混合斑组、硬斑组APNmRNA及蛋白表达均明显下调，差异有统计学意义（P〈0．05）；且软斑组APNmRNA及蛋白表达水平明显低于硬斑组，差异有统计学意义俨〈0．05）。颈动脉粥样硬化斑块组血清TNF一仪与IL一6含量呈正相关关系（r=0．810，P=0．000），血清TNF-α、IL-6含量分别与APN蛋白表达水平呈负相关关系（F一0．760，P=-0．000；F一0．519．p=-0．007）。结论APN、TNF-α、IL．6可能参与了人颈动脉粥样硬化斑块的形成及稳定。

骨髓单核细胞移植对脑梗死小鼠白质损伤及血管再生的影响

目的 探讨评价骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells,BMMNCs）移植对大脑中动脉栓塞小鼠脑白质损伤的疗效及梗死周围血管再生的影响.方法 线栓法将成年雄性小鼠制成大脑中动脉栓塞模型,模型成功后按随机表法随机分成假手术组,MCAO组,PBS组及BMMNCs移植组（BMMNCs组）.梯度密度离心法提取分离BMMNCs,模型成功后24 h经尾静脉移植入0.5 ml含1×106个BMMNCs细胞悬液,PBS组给予等体积的PBS溶液,神经功能学评分（mNSS）评价小鼠神经功能,luxol fast blue（LFB）染色观察梗死周围脑白质损伤情况,免疫荧光染色观察梗死周围血管再生情况.结果 除假手术组外,其他各组均有不同程度的神经功能缺损.梗死后56 d,BMMNCs组LFB着色减少百分比[（24.06±5.48）％]明显低于MCAO组[（62.22±5.38）％]及PBS组[（61.22±5.48）％],BMMNCs组血管密度[（249.8±11.8）个/mm2]明显高于MCAO组[（119.1 ±11.2）个/mm2]及PBS组[（114.3±12.1）个/mm2],差异有统计学意义（P＜0.05）,MCAO组与PBS组相比,LFB着色减少百分比和血管密度差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 BMMNCs移植可促进血管新生,增加梗死周围区血管密度,减轻脑白质损伤程度,显著改善脑梗死小鼠神经功能.

儿童中央轴空病5例的临床、肌肉病理和分子生物学特征

目的探讨儿童中央轴空病的临床、肌肉病理和分子生物学特征。方法收集2011年1月至2016年3月郑州大学第五附属医院诊治的5例儿童中央轴空病的病历资料，对其临床、肌肉病理和分子生物学特征进行回顾性分析。结果 1．临床特征：主要为出生时肌张力严重低下、非进展或缓慢进展的对称性四肢近端无力、高腭弓、脊柱侧弯、关节脱位等。2．肌肉病理特征：可见萎缩和肥大肌纤维，结缔组织增生，肌纤维中央异常结构不明显；还原型辅酶I四氮唑还原酶、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶染色均可见典型中央轴空现象，部分肌纤维存在偏心轴空、多轴空和微小轴空；单磷酸腺苷脱氢酶染色可见酶活性不均匀、轴空边缘深染；苏丹黑B、高碘酸-Sehiff反应染色显示中央轴空区域脂质和糖原减少；三磷酸腺苷酶学染色显示轴空主要位于I型肌纤维，I型肌纤维占绝对优势。3．分子生物学特征：RYR1基因外显子100～102发生突变，依次为c．14566C〉T、C．14582G〉A、C．14387A〉G、C．14677C〉T和C．14693T〉C，3例患儿的父亲或母亲有同样的突变。结论儿童中央轴空病临床表现复杂，肌肉病理是诊断的金标准，RYRl基因突变主要集中于c端外显子100～102，认识这些特征有助于早期诊治、减少误诊。

黄体酮对脑梗死大鼠血脑屏障保护作用的机制研究

目的观察黄体酮对大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠脑部炎症反应的抑制作用以及对血脑屏障结构的影响。方法健康雄性SD大鼠按照完全随机数字表法分为4组，即假手术组、缺血组、溶剂治疗组和黄体酮治疗组。后三组采用线栓法制作MCAO大鼠模型，假手术组只分离、暴露血管，不结扎动脉，不插入尼龙鱼线；黄体酮治疗组造模成功后腹腔注射黄体酮，溶剂治疗组给予等体积的环糊精溶液治疗。Westernblot检测梗死半球脑组织内TNF—α与血脑屏障紧密连接蛋白主要成分Claudin5的表达情况，并通过干湿重法检测脑组织含水量的变化。结果脑梗死发生后，脑部TNF-α的表达水平明显升高，Claudin5蛋白的表达水平明显下降。黄体酮治疗后，梗死半球脑组织内TNF-α的表达水平明显下降，Claudin5蛋白的丢失减少，脑组织含水量亦下降。结论黄体酮可以通过抑制脑梗死大鼠脑部的炎症反应，减轻血脑屏障的破坏，进而发挥神经保护作用。

不同神经递质系统调控室管膜下区神经发生的研究进展

随着人们生活水平的提高和社会老龄化的进展，脑卒中已成为严重危害国民健康的重大疾病之一。脑梗死是最常见的脑卒中类型。发病率、致残率、死亡率均很高。研究显示，脑梗死后室管膜下区（subventricularzone，SVZ）神经发生处于亢进状态。新生的神经前体细胞一方面能够迁移至梗死灶周围，通过分化为神经元或神经胶质细胞以替代、修复受损脑组织；另一方面通过旁分泌功能发挥抗炎、抗凋亡、神经调节等作用，促进神经功能恢复。这提示SVZ神经发生可能是脑梗死治疗的重要靶点。

正常与脑梗死后大鼠来源的骨髓单个核细胞治疗缺血性脑卒中的效果对比

目的对比正常与梗死后大鼠来源的骨髓单个核细胞（Nor—BMMNCs；Isch—BMMNCs）移植治疗大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠的疗效及对血管新生效应的影响。方法线栓法制作大鼠MCAO模型；梯度离心法分别提取Nor—BMMNCs及Isch—BMMNCs；用酶联免疫吸附法（ELISA）检测常氧及低氧条件下体外培养BMMNCs的上清液中VEGF、bFGF、Ang-1的表达水平；MCAO1d后行股静脉1×10^7BMMNCs或PBS输注并行mNSS；细胞移植后14d行TTC染色及免疫荧光检测。结果低氧条件下培养1d后，Isch—BMMNCs组分泌促血管因子的量[VEGF：（114．24±10．6）pg／ml，bFGF：（133．6±19．7）pg／ml，Ang-1：（131．3±21．9）pg／m1]明显高于Nor—BMMNCs组[VEGF：（96．04±12．6）pg／ml，bFGF：（107．1±19．6）pg／ml，Ang-1：（103．04±17．0）pg／m1]，差异有统计学意义（P〈0．05）；mNSS评分显示，在细胞移植后10d，Isch—BMMNCs组神经缺损症状明显改善，与Nor-BMMNCs组及PBS组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；细胞移植14d后，Isch—BMMNCs组微血管数目及脑梗死体积[（372．5±40．1）支／mm^2，（18．7±4．5）％]与Nor—BMMNCs组[（314．0±40．1）支／mm^2，（26．5±7．2）％]及PBS组[（222．3±56．7）个／mm^2，（34．5±6．3）％]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Isch—BMMNCs治疗缺血性脑卒中的价值明显高于Nor—BMMNCs，可能与其分泌促血管因子能力增强有关。

骨髓单个核细胞对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响

目的研究骨髓单个核细胞（BMMNCs）对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分为PBS治疗组和BMMCs治疗组。线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型；梯度离心法提取BMMNCs；酶联免疫吸附法（ELISA）评价常氧及低氧培养条件下BMMNCs分泌IL-10、VEGF和IGF-1的能力。脑梗死后6h经尾静脉注射BMMNCs或PBS，脑梗后1，4，7d采用神经功能损害评分表（mNSS）、免疫荧光法、Fluoro—JadeB（FJB）染色进行神经功能、小胶质细胞活性及神经元变性死亡数目的评估。脑梗死后7d，TTC染色评价脑梗死体积。结果（1）BMMNCs在常氧或低氧条件下培养24h后，低氧环境下BMMNCs分泌细胞因子（IL-10、VEGF和IGF-1）的能力明显强于常氧环境，差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）与PBS治疗组相比，BMMNCs治疗组小鼠在脑梗死后第4，7天的mNSS评分、小胶质细胞的活性、神经元变性死亡数量均显著降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）BMMNCs治疗组小鼠脑梗死体积[（27．8±7．5）％]明显小于PBS治疗组[（37．1±6．9）％]，差异有统计学意义0P〈0．05）。结论骨髓单个核细胞可通过分泌细胞因子IL-10、VEGF和IGF-1抑制小胶质细胞的活性，明显抑制脑梗死后神经元的变性死亡，减少脑梗死体积，促进神经功能恢复。

AnnexinA1、Lp-PLA2、Bax与人颈动脉粥样硬化斑块的关系

目的 探讨膜联蛋白A1（AnnexinA1）、脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）和Bax与人颈动脉粥样硬化斑块形成及稳定性的关系。方法 选择郑州大学第五附属医院血管外科自2010年5月至2011年6月行颈动脉内膜剥脱术（CEA）的颈动脉粥样硬化狭窄（〉70％）患者45例作为颈动脉粥样硬化组，根据术前颈动脉超声检查结果再分为软斑组、混合斑组、硬斑组，每组15例；选取郑州大学第一附属医院同期外科手术切除的正常肠系膜动脉标本20例作为标本对照组；选取社区健康志愿者20例作为健康对照组。酶联免疫法（ELISA）测定颈动脉粥样硬化组和健康对照组血清中LD-PLA2的含量；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western bloRing分别检测颈动脉粥样硬化组和标本对照组中Annexin A1、Bax mRNA和蛋白的表达。结果与健康对照组相比．软斑组、混合斑组、硬斑组患者血清中Lp-PLA2含量均增高，而且软斑组LD-PLA2的含量高于硬斑组，差异有统计学意义（P〈0．05）；与标本对照组相比，软斑组、混合斑组、硬斑组Annexin A1、Bax mRNA及蛋白表达水平均上调，而且软斑组Annexin A1 mRNA及蛋白表达水平低于硬斑组，Bax mRNA及蛋白表达水平高于硬斑组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Annexin A1、Lp-PLA2和Bax参与了人颈动脉粥样硬化斑块的形成及稳定。

自体骨髓单核细胞移植对脑梗死的治疗作用

目的观察自体骨髓单核细胞移植对大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠脑梗死体积、血脑屏障破坏程度及行为学评分等的影响，评价骨髓单核细胞移植对脑梗死的治疗价值。方法将72只成年雄性SD大鼠按完全随机数字表法分为假手术组、模型组、生理盐水组及骨髓单核细胞移植组，后三组采用线栓法制作MCAO大鼠模型。采用梯度离心法分离大鼠股骨骨髓腔中的单核细胞，并通过流式细胞术检测CD45＋细胞比例。将分离得到的自体骨髓单核细胞经颈静脉途径移植到骨髓单核细胞移植组大鼠体内，生理盐水组大鼠给予等体积的生理盐水注射。造模后72h时伊文氏蓝染色及脑组织含水量检测显示血脑屏障的破坏情况，造模后1d、3d、7d时通过Zea—Longer评分评价大鼠神经功能变化，最后一次Zea—Longer评分结束后TTC染色检测大鼠脑梗死体积。结果流式细胞术检测发现骨髓单核细胞中CD45＋细胞的比例为91．2％。脑梗死体积、伊文氏蓝含量及脑组织含水量在模型组与生理盐水组中均较高，且相互比较差异无统计学意义（P〉0．051；骨髓单核细胞移植组脑梗死体积、伊文氏蓝含量及脑组织含水量均明显下降．较模型组与生理盐水组差异均有统计学意义（P〈0．05）。Zea．Longer评分显示，除假手术组外，其余大鼠均有不同程度的神经功能缺损：造模后7d时骨髓单核细胞移植组神经功能评分明显改善，与模型组及生理盐水组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论骨髓单核细胞分离过程简单，利用其移植治疗脑梗死可以显著减轻脑损伤程度并促进神经功能恢复，对脑梗死具有很高的治疗价值。