病毒性心肌炎患儿外周血中微小RNA-98的表达及其对凋亡相关蛋白/凋亡相关蛋白配体表达的影响

目的探讨病毒性心肌炎(VM)患儿外周血中微小RNA-98(miR-98)的水平及其对凋亡相关蛋白(Fas)/凋亡相关蛋白配体(FasL)表达的影响。方法选择2015年9月至2017年7月郑州大学附属儿童医院收治的VM患儿62例作为VM组,根据左心室射血分数(LVEF)及心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)水平将VM组患儿分为轻度组(n=38)和重度组(n=24),另选择56例健康儿童作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定3组受试者外周血中miR-98、Fas、FasL mRNA表达水平,Western blot检测Fas、FasL蛋白表达水平。体外培养人心肌细胞(HCM)、H9C2心肌细胞至占培养皿底面积80%时,将细胞分为空白组(不做任何处理)、阴性转染组(无意义序列转染至细胞内)和miR-98转染组(miR-98 siRNA转染至细胞内)。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测3组细胞培养12、24、48、72 h时细胞增殖情况;平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 VM组患儿外周血中miR-98相对表达量低于对照组(P<0.05),Fas、FasL mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05),重度组患儿外周血中miR-98相对表达量低于轻度组,Fas、FasL mRNA相对表达量高于轻度组(P<0.05)。VM组患儿外周血中Fas、FasL蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05),重度组患儿外周血中Fas、FasL蛋白相对表达量高于轻度组(P<0.05)。VM组患儿外周血中miR-98与Fas、FasL呈显著负相关(r=-516、-463,P<0.05)。miR-98转染组HCM、H9C2心肌细胞抑制率在各时间点均高于空白组和阴性转染组(P<0.05)。miR-98转染组HCM、H9C2心肌细胞克隆数量和miR-98相对表达量低于空白组和阴性转染组(P<0.05),HCM、H9C2细胞凋亡率及HCM、H9C2心肌细胞中Fas、FasL蛋白相对表达量高于空白组和阴性转染组(P<0.05)。结论 miR-98在VM患儿外周血中表达水平下降,其可能是通过调节Fas/FasL基因在心肌细胞中的表达来参与心肌细胞损伤和凋亡。