探讨不同手术方式治疗胆结石的临床疗效

目的 研究分析在胆结石治疗中采取不同的手术方式获得的临床治疗效果。方法 选取本院于2015年2月~2016年2月收治70例胆结石患者作为本次研究对象,随机分为研究组和参照组。参照组采用传统的开腹胆囊切除手术进行治疗,研究组则采用小切口胆囊切除手术。观测并比较两组患者手术前后各项指标。结果 经过手术治疗,两组患者都取得良好治疗效果。在各临床指标方面,研究组各指标数据较参照组患者更优,差异具有统计学意义（P〈0.05）。研究组患者总并发症发生率明显低于参照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 在胆结石的临床治疗工作中,采用小切口胆囊切除手术能明显提高治疗质量,在临床治疗上具有极高的应用价值。

F框WD40域蛋白7在胃癌组织的表达变化及对细胞增殖和上皮-间充质转化的影响

目的观察F框WD40域蛋白7(FBXW7)在胃癌中的表达变化及对细胞增殖和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法选取2016年3月到2019年3月郑州大学附属医院南阳中心医院经手术切除的154例胃癌组织和癌旁组织作为研究材料,采用蛋白质印迹法(Western blot)分析肿瘤组织和癌旁组织中FBXW7蛋白表达水平。采用慢病毒在胃癌细胞SGC-7901中构建FBXW7过表达细胞株(FBXW7组)和对照细胞株(对照组)。采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)和细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖水平;采用Western blot分析两组细胞EMT标记分子蛋白表达水平。采用含基质胶的Transwell分析细胞的侵袭能力。组间比较采用t检验。结果与癌旁组织FBXW7蛋白表达水平(1.32±0.23)比较,肿瘤组织中FBXW7表达水平(0.52±0.12)显著下调,差异有统计学意义(t=3.091,P<0.05)。与对照组(1.98±0.27)比较,FBXW7组细胞72 h增殖程度(1.21±0.18)显著下降,差异有统计学意义(t=2.615,P<0.05)。与对照组[(54.32±7.32)%]比较,FBXW7组细胞EdU阳性率[(20.98±4.89)%]显著下降,差异有统计学意义(t=3.111,P<0.05)。与对照组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平(0.89±0.19、1.20±0.28、1.39±0.21、1.51±0.26)比较,FBXW7组细胞E-cadherin和ZO-1表达水平(1.98±0.27、2.59±0.31)显著增加,而N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平(0.40±0.11、0.53±0.19)显著下调,差异均有统计学意义(t=2.094、2.812、2.458、2.931,P<0.05)。与对照组细胞侵袭数量[(152.69±20.14)个]比较,FBXW7组细胞侵袭数量[(81.44±12.10)个]明显下降,差异有统计学意义(t=4.259,P<0.05)。结论FBXW7在胃癌组织中呈低表达,参与了胃癌细胞的增殖和EMT。

葫芦巴碱对荷胆囊癌小鼠抑制作用及其机制

目的探讨葫芦巴碱对荷胆囊癌小鼠抑制作用及其机制。方法胆囊癌细胞系SGC-996随机分为对照组、50μmol/L组、150μmol/L组,分别采用0、50、150μmol/L葫芦巴碱处理细胞24 h,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析3组细胞活力;采用Transwell检测细胞迁移,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9 mRNA和蛋白质表达水平。采用胆囊癌细胞系SGC-996建立异体移植瘤模型随机分为模型组和葫芦巴碱组,葫芦巴碱组小鼠经腹腔给予葫芦巴碱50 mg/kg,模型组小鼠注射等体积生理盐水。连续治疗30 d,计算肿瘤体积和重量。计量数据比较采用t检验。结果对照组胆管癌细胞吸光度值(1.94±0.21)明显高于50μmol/L葫芦巴碱组(1.64±0.17),差异有统计学意义(t=3.091,P<0.05)。50μmol/L葫芦巴碱组细胞吸光度值(1.64±017)明显高于150μmol/L葫芦巴碱组胆管癌细胞(1.32±0.11),差异有统计学意义(t=2.784,P<0.05)。对照组胆管癌细胞迁移数量[(138.44±12.09)个]明显高于50μmol/L葫芦巴碱组细胞[(109.37±9.33)个],差异有统计学意义(t=6.018,P<0.05)。50μmol/L葫芦巴碱组细胞迁移数量[(109.37±9.33)个]明显高于150μmol/L葫芦巴碱组胆管癌细胞[(79.36±7.81)个],差异有统计学意义(t=5.091,P<0.05)。对照组胆管癌细胞MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平(1.09±0.12、1.16±0.14)明显高于50μmol/L葫芦巴碱组细胞(0.75±0.18、0.80±0.12),差异有统计学意义(t=4.115、4.001,P<0.05)。50μmol/L葫芦巴碱组细胞MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平(0.75±0.18、0.80±0.12)明显高于150μmol/L葫芦巴碱组(0.50±0.11、0.49±0.10),差异有统计学意义(t=3.819、3.618,P<0.05)。模型组治疗30 d后小鼠肿瘤体积[(1542.49±254.88)cm3]明显高于葫芦巴碱组[(1127.38±142.29)cm3],差异有统计学意义(t=6.099,P<0.05)。模型组治疗30 d后小鼠肿瘤质量[(5.29±0.41)g]明显高于葫芦巴碱组[(2.71±0.34)g],差异有统计学意义(t=4.971,P<0.05)。模型组治疗30 d后小鼠肿瘤组织MMP-3和MMP-9蛋白表达水平(2.39±0.14、1.52±0.16)明显高于葫芦巴碱组小鼠肿瘤组织(1.03±0.10、0.79±0.14),差异有统计学意义(t=3.901、3.428,P<0.05)。结论葫芦巴碱可显著下调MMP-2和MMP-9,抑制胆管癌细胞增殖和迁移,达到抗肿瘤作用。

骨桥蛋白基因高表达的重组腺病毒对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察骨桥蛋白（OPN）基因高表达的重组腺病毒对肝癌细胞恶性生物学行为的影响.方法 培养原发性肝癌HepG2细胞株并分为OPN基因高表达的重组腺病毒（rAd-OPN组）和rAd-NC组转染包含无效片段的重组腺病毒（rAd-NC组）,测定细胞中OPN的表达量以及肝癌细胞迁移、侵袭,选取并测定3个肿瘤转移相关基因[基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）]表达.结果 腺病毒转染后12、24、36、48 h时rAd-OPN组细胞中OPN的mRNA含量为1.93±0.25、2.58±0.30、3.61 ±0.57、3.88±0.63,rAd-OPN组各时间段细胞迁移率分别为（18.20±2.76）％、（43.76±7.17）％、（62.48±9.25）％、（77.33 ±10.24）％,穿膜细胞数目分别为（25.24 ±4.26）、（32.13 ±4.97）、（40.27±6.24）、（47.95±7.25）个,明显高于rAd-NC组（P＜0.05）;腺病毒转染后48 h时,rAd-OPN组中MMP-2、MMP-9、uPA的mRNA含量分别为2.32±0.49、1.78±0.28、3.14 ±0.51,均明显高于对照组rAd-NC组,P＜0.05.结论 OPN基因高表达的重组腺病毒能够促进肝细胞癌的迁移、侵袭,上调转移相关基因（MMP-2、MMP-9、uPA）的表达.

微小RNA-597靶向Rab23对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-597靶向Rab23对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法选取南阳市中心医院2017年5月到2019年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常肝细胞LO2、肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721和Huh7中miR-597表达水平;采用慢病毒在肝癌细胞系HepG2构建对照miRNA和miR-597过表达细胞系, 分别为对照组和观察组, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和异体移植瘤实验分析肿瘤细胞的增殖能力;采用流式细胞术分析细胞周期和凋亡水平;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-597的靶基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测靶蛋白表达水平。组间计量资料比较采用t检验。结果肝细胞LO2中miR-597表达水平(1.09±0.15)明显高于肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和Huh7 (0.37±0.14、0.45±0.16、0.58±0.14), 差异有统计学意义(t=4.011、3.714、3.281, P<0.05)。对照组细胞吸光度值(2.87±0.26)明显高于观察组(1.53±0.22), 差异有统计学意义(t=3.091, P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(71.23±8.29)%]明显高于观察组[(38.54±4.98)%], 差异有统计学意义(t=5.220, P<0.05)。对照组小鼠体内肿瘤体积[(1 284.59±209.32) mm^(3)]明显高于观察组[(799.58±109.43) mm^(3)], 差异有统计学意义(t=5.530, P<0.05)。对照组小鼠肿瘤重量[(3.98±0.29) g]明显高于观察组[(1.42±0.19) g], 差异有统计学意义(t=3.218, P<0.05)。对照组细胞S期比例[(34.21±4.58)%]明显高于观察组[(44.58±5.87)%], 差异有统计学意义(t=4.719, P<0.05)。对照组细胞G2期比例[(32.14±4.28)%]低于观察组[(20.37±4.29)%], 差异有统计学意义(t=3.612, P<0.05)。对照组细胞凋亡率[(3.76±1.09)%]明显低于观察组[(24.54±3.68)%], 差异有统计学意义(t=4.006, P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因结果显示, Rab23是miR-597的靶基因。对照组细胞Rab23蛋白表达水平(1.48±0.18)明显高于观察组(0.79±0.15), 差异有统计学意义(t=2.976, P<0.05)。结论 miR-597通过Rab23调控肝癌细胞的增殖、周期和凋亡。

微小RNA-597在肝癌组织中的表达水平变化及其临床意义

目的探讨微小RNA(miR)-597在肝癌组织中的表达及其与临床病理和预后的关系。方法选取南阳市中心医院2016年5月至2018年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量PCR分析癌旁和肝癌组织中miR-597表达水平;分析miR-597表达水平与肝癌患者临床病理特征(年龄、性别、肿瘤直径、乙型肝炎、门静脉癌栓、组织分级、TNM分期、淋巴结转移)的关系,并比较miR-597表达阳性和阴性患者3年生存率和中位生存期。采用单因素卡方和多因素回归分析miR-597表达与临床病理特征和预后的关系。结果癌旁组织miR-597表达水平(1.28±0.28)明显高于肝癌组织miR-597表达水平(0.41±0.11),差异有统计学意义(t=3.991,P<0.05)。中高分化患者肝癌组织中miR-597表达水平(0.82±0.15)明显高于低分化患者肝癌组织(0.31±0.11),差异有统计学意义(t=3.047,P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ期患者肝癌组织miR-597表达水平(0.70±0.12)明显高于Ⅲ~Ⅳ期患者肝癌组织(0.29±0.16),差异有统计学意义(t=3.280,P<0.05)。肝癌伴乙型肝炎患者肝癌组织miR-597表达水平(0.39±0.14)明显低于肝癌无乙型肝炎患者(0.76±0.13),差异有统计学意义(t=3.338,P<0.05)。门静脉癌栓患者组织miR-597水平(0.36±0.17)明显低于无门静脉癌栓患者肝癌组织(0.69±0.15),差异有统计学意义(t=3.874,P<0.05)。淋巴结转移患者肝癌组织miR-597表达水平(0.29±0.17)明显低于无淋巴结转移患者(0.84±0.15),差异有统计学意义(t=4.309,P<0.05)。miR-597高表达患者生存时间(29.5个月)明显高于miR-597低表达患者生存时间(16.4个月),差异有统计学意义(Log-rank=5.905,P<0.05)。miR-597高表达患者术后3年生存率(35/68,51.47%)高于miR-597低表达组患者术后3年生存率(12/58,20.69%),差异有统计学意义(Log-rank=5.046,P<0.05)。单因素方差分析显示,组织分级、TNM分期、门静脉癌栓、乙型肝炎阳性、淋巴结转移是影响肝癌组织miR-597表达的危险因素(P<0.05)。结论miR-597在肝癌组织中表达水平下调,与患者临床病理特征和预后明显相关。

基于miR-208a-3p探究萝卜硫素对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨萝卜硫素对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法用10、20、40μmol/L萝卜硫素处理人正常肝细胞L02、肝癌HepG2细胞48 h,通过CCK-8法筛选合适的萝卜硫素浓度用于后续实验;将HepG2细胞分为对照组和萝卜硫素(20μmol/L)组,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell测定细胞迁移与侵袭。设置对照组、miR-208a-3p模拟物(miR-208a-3p mimic)组及其阴性对照(mimic NC)组、miR-208a-3p抑制物(miR-208a-3p inhibitor)组及其阴性对照(inhibitor NC)组、真核翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E3)过表达物(pcDNA-EIF4E3)组及其阴性对照(pcDNA)组、EIF4E3小干扰RNA(si-EIF4E3)组及其阴性对照(si-NC)组、pcDNA-EIF4E3+mimic NC组和pcDNA-EIF4E3+miR-208a-3p mimic组,利用LipofectamineTM 2000转染试剂盒对HepG2细胞进行转染,转染48 h后,各组分别加入20μmol/L萝卜硫素处理24 h,qRT-PCR检测HepG2细胞中miR-208a-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell测定细胞迁移与侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-208a-3p与EIF4E3靶向关系;Western blotting检测细胞中EIF4E3蛋白表达。结果与对照组比较,萝卜硫素组HepG2细胞在24、48 h的A450值、侵袭及迁移细胞数目显著降低(P<0.05);HepG2细胞中miR-208a-3p呈高表达,EIF4E3蛋白呈低表达;miR-208a-3p靶向负调控EIF4E3的表达;下调miR-208a-3p或过表达EIF4E3可增强萝卜硫素对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用,而过表达miR-208a-3p或沉默EIF4E3则呈相反趋势;同时过表达miR-208a-3p和EIF4E3不会影响萝卜硫素对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用。结论萝卜硫素可能通过下调miR-208a-3p进而上调EIF4E3的表达来抑制HepG2细胞增殖、侵袭及迁移。