人脂肪间充质干细胞来源外泌体联合黄芪多糖对心肌损伤保护机制研究

目的探索人脂肪间充质干细胞来源外泌体(Exosome-HADSCs)联合黄芪多糖(APS)对心肌损伤的保护作用机制。方法体外培养人脂肪间充质干细胞(HADSCs),提取外泌体,并通过电镜、Western blot法对外泌体进行鉴定。实验设置对照组(control组)、Exo组、APS组、Exo+APS组,采用血管形成实验和划痕实验分析Exosome-HADSCs联合APS对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成和细胞迁移的影响。在AC16心肌细胞损伤模型中,实验设置对照组(control组)、氯化钴(CoCl_(2))组、CoCl_(2)+Exo组、CoCl_(2)+APS组、CoCl_(2)+Exo+APS组,比较各组细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达水平。结果与control组相比,Exo+APS组HUVECs形成血管网格的数量显著增多(P<0.05),且Exo+APS组形成血管网格的数量多于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。与control组相比,Exo+APS组细胞迁移率增高,且Exo+APS组细胞迁移率高于Exo组和APS组,差异有统计学意义(P<0.05)。Exosome-HADSCs联合APS能够显著提高CoCl_(2)损伤AC16细胞的存活率,降低细胞凋亡率,且作用效果较单独使用Exosome-HADSCs和APS更显著(P<0.05)。与CoCl_(2)组相比,CoCl_(2)+Exo+APS组凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达水平显著降低(P<0.05),抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达水平显著增高(P<0.05),磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、苏氨酸-丝氨酸蛋白激酶(Akt)蛋白表达水平均显著增高(P<0.05)。结论Exosome-HADSCs联合APS对心肌损伤具有保护作用,其机制可能与促进血管形成和内皮细胞迁移,提高细胞存活率,减少心肌细胞凋亡有关,并通过PI3K/Akt信号通路实现。

A型肉毒毒素对增生性瘢痕JNK信号通路和成纤维细胞相关蛋白表达的影响

目的增生性瘢痕是一种真皮纤维增生性疾病。A型肉毒毒素具有预防增生性瘢痕形成的作用,但其抗皮肤纤维化的作用及其机制尚不清楚。本研究分析A型肉毒毒素(BTXA)对增生性瘢痕(HS)JNK信号通路和成纤维细胞相关蛋白表达的影响。方法本研究采用0、1、2、4U/ml BTXA对人瘢痕成纤维细胞进行干预,通过CCK8划痕法、荧光定量PCR和western印迹法检测不同浓度BTXA对HS成纤维细胞增殖、迁移、细胞凋亡和蛋白表达的变化。并对比BTXA干预前后转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路、磷酸化氨基末端激酶(p-JNK)等成纤维细胞相关蛋白表达的变化。结果与无BTXA干预相比,1、2、4U/ml BTXA干预后HS成纤维细胞增殖能力较低(P<0.05);与无BTXA干预相比,1、2、4U/ml BTXA干预后HS成纤维细胞凋亡率增高(P<0.05);与BTXA干预前相比,BTXA干预后TGF-β1、α-SMA、CTGF等基因水平和蛋白水平均降低(P<0.05);与JNK选择性抑制SP600125干预前相比,JNK选择性抑制SP600125干预后p-JNK表达较高(P<0.05)。结论BTXA可影响HS患者成纤维细胞增殖、迁移和凋亡,并能通过JNK信号通路诱导成纤维细胞凋亡,调控其相关蛋白表达,为临床治疗提供新靶点。