人骨髓间充质干细胞外泌体对胰腺癌细胞的影响及作用机制

目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体调控胰腺癌细胞的分子机制。方法提取BMSCs分泌的外泌体并对其加以鉴定。随后将人胰腺癌细胞株(PANC-1和AsPC-1)各自分为3组:对照组、外泌体组和抑制剂组,抑制剂组加入磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路靶向抑制剂LY294002和外泌体。采用蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT及其磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT的表达,ELISA法检测胰腺癌细胞标志物B7-H4、糖类抗原19-9的表达水平。细胞计数实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果成功提取BMSCs分泌的外泌体。与对照组相比,外泌体组PANC-1和AsPC-1的细胞标志物B7-H4、糖类抗原19-9表达、细胞增殖率、细胞侵袭力及迁移能力均下降,而凋亡率增加,差异均有统计学意义(均P<0.001),抑制剂组上述指标与对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05);对照组PANC-1细胞p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平分别为(5.81±1.87)、(5.30±1.21),加入外泌体后分别上调为(12.74±3.28)、(11.22±2.35)(均P<0.001),而AsPC-1细胞p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平分别为(4.75±0.87)、(4.15±1.32),加入外泌体后分别上调为(10.83±3.19)、(9.28±2.33)(均P<0.001),差异均有统计学意义。抑制剂组p-PI3K以及p-AKT水平与对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05)。结论BMSCs分泌的外泌体可通过激活PI3K/AKT信号通路抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,起到抑癌的作用。

高通量测序分析乳腺癌微生物群落特征

目的分析乳腺癌患者肿瘤组织与癌旁组织微生物菌群多样性,筛选乳腺癌患者肿瘤组织中的特异性细菌。方法分析2021年2月至9月河南省肿瘤医院行乳腺癌根治术切除的20例乳腺癌患者的肿瘤组织(TT组)与配对瘤旁组织(TN组),采用Illumina HiSeq高通量测序技术对乳腺癌患者组织样本进行细菌V3-V4区的16S rDNA测序及生物信息学分析,采用t检验进行计数资料比较。结果在门水平上,TT组与TN组的微生物菌群主要由变形菌门、放线菌门、厚壁菌门和拟杆菌门组成,累计含量>60%。微生物多样性分析显示,Chao1指数TN组比TT组为10167.59±2929.38比9044.89±2735.11(t=1.09,P>0.05),Ace指数TN组比TT组为12571.96±2859.65比11704.53±2855.75(t=0.81,P>0.05)。Beta多样性显示两组菌群结构差异有统计学意义(R=0.27,P<0.001)。门水平差异分析显示,变形菌门(TN组比TT组为42.63±16.76比52.08±9.53,t=-0.65)、放线菌门(TN组比TT组为6.13±2.55比9.02±1.77,t=-1.03)等在癌组织中明显增加(P<0.05),厚壁菌门(TN组比TT组为10.62±9.40比4.40±0.95,t=3.41)等明显减少(P<0.05)。线性判别分析(LDA)显示TT组中α变形菌纲、根瘤菌目、和变形菌门等为显著性差异菌,而TN组中链球菌属和假单胞菌属等为显著性差异菌。结论乳腺癌患者癌组织与癌旁组织的微生物群落结构存在明显差异,其中假单胞菌属、链球菌属等为差异微生物有助于筛选标志物。

多形拟杆菌对肺癌细胞生物学行为及转录组基因表达的影响

目的探讨多形拟杆菌对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及转录组基因表达的影响。方法选用肺癌细胞系H1975和SK-MES-1,以细菌培养基为对照组,多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)上清液为处理组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞的增殖能力,采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞迁移及侵袭能力,通过转录组筛选两组细胞差异表达的基因,通过基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,探究差异基因集中的具体通路。组间比较采用t检验进行统计分析。结果与细菌培养基组比较,H1975细胞系和SK-MES-1细胞系中,细菌处理组细胞的增殖率显著下降(0.767±0.063比1.000±0.047、0.707±0.049比1.000±0.124),差异有统计学意义(t=7.827、5.838,P均<0.001),迁移水平(0.066±0.030比0.567±0.107,t=6.350,P<0.05;0.066±0.030比0.475±0.056,t=9.042,P<0.01)和侵袭水平(0.271±0.033比1.454±0.221,t=7.475,P<0.05;0.349±0.029比1.664±0.107,t=16.806,P<0.01)也显著下降,差异有统计学意义。通过GO和KEGG富集分析,发现丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PIK3)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等在H1975和SK-MES-1细胞系的细菌处理组和培养基对照组之间差异有统计学意义。Venn分析发现转录延长因子1(TCEA1)和人内皮素2(EDN2)等在两个细胞系中均受到调控。结论多形拟杆菌可能通过TCEA1和EDN2基因调控肺癌H1975和SK-MES-1细胞系的生物学行为,发挥抑癌作用。