抗PD-1抗体治疗患者发生免疫相关不良反应前后白细胞、中性粒细胞变化的分析

目的:通过对比免疫相关不良反应(irAE)发生前后血常规中主要指标的变化,为鉴别诊断irAE及感染性炎症提供新依据。方法:回顾性分析201例2018年8月至2022年6月在河南省肿瘤医院接受抗PD-1抗体治疗后出现irAE的肿瘤患者的临床资料,包括抗PD-1抗体治疗前、发生irAE前及irAE后血常规的主要指标,采用配对t检验分析治疗前后血常规指标值的统计学差异。采用定性变量的配对χ^(2)检验分析治疗前后血常规指标值的阳性率(高于正常值的比例)的统计学差异。结果:从201例患者中观察到了258次irAE,其中27例(13.4%)患者发生了2种及以上类型的irAE,214次(82.94%)irAE未引起发热;irAE发生后与抗PD-1抗体治疗前相比,白细胞计数(t=1.087,P=0.278)、中性粒细胞计数(t=0.959,P=0.338)及中性粒细胞百分比(t=0.817,P=0.414)未见明显升高,且三指标高于正常值的病例数分别为28 vs 38(χ^(2)=1.737,P=0.187)、32 vs 44(χ^(2)=2.222,P=0.136)、45 vs 55(χ^(2)=1.240,P=0.265),差异均无统计学意义。结论:irAE发生后患者外周血白细胞计数、中性粒细胞计数及中性粒细胞百分比无明显变化,这对鉴别诊断感染性炎症可能具有参考意义。

抗PD-1/PD-L1治疗恶性黑色素瘤的免疫相关不良反应的研究进展

免疫治疗的发展使恶性黑色素瘤的患者总体存活率显著改善,特别是免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICIs)的出现推动了黑色素瘤免疫治疗的发展。ICIs主要针对细胞程序性死亡受体-1(programmed cell death receptor-1,PD-1)、程序性死亡配体-1(programmed death-ligand 1,PD-L1)以及细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic T-lymphocyte antigen-4,CTLA-4)。随着ICIs在临床上的大规模应用,越来越多的不良反应也逐渐显现,本篇主要概述PD-1单抗或PD-L1单抗在治疗中出现的不良反应类型及特点。

胃癌患者外周及肿瘤组织中CD4^+T淋巴细胞上Tim-3的表达及其临床意义

目的:探讨Tim-3和PD-1在胃癌(GC)患者外周血和组织中CD4^+T淋巴细胞上的表达及其临床意义。方法:收集2013年1月至2014年1月间首次入住郑州大学附属肿瘤医院普外科54例GC患者的全血标本及其中8例Ⅲ期GC患者的肿瘤组织和癌旁组织标本,采用流式法检测Tim-3和PD-1在CD4^+T淋巴细胞上的表达。结果:Tim-3、PD-1和Tim-3^+PD-1^+在GC患者外周血CD4^+T淋巴细胞上的表达水平明显高于其在25例健康对照组的表达[2.8%vs.2.1%,P=0.041 8(Tim-3);19.1%vs.12.3%,P<0.000 1(PD-1);1.44%vs.0.85%,P=0.006 0(Tim-3^+PD-1^+)]。Tim-3、PD-1和Tim-3^+PD-1^+在肿瘤组织中CD4^+细胞上的表达高于其在癌旁组织及外周血中的表达。Tim-3^+PD-1^+在Ⅲ/Ⅳ期GC患者外周血CD4^+T细胞上的表达明显高于Ⅰ/Ⅱ期GC患者及对照组。结论:GC患者外周血及肿瘤组织中CD4^+T细胞上抑制性受体Tim-3和PD-1的表达升高,可能与CD4^+T细胞功能耗竭,肿瘤细胞免疫逃逸,促进GC病情进展有关。

CIK细胞联合化疗治疗晚期胰腺癌临床疗效的回顾性分析

目的:回顾性分析细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞联合化疗治疗晚期胰腺癌患者的疗效及安全性。方法:搜集2010年9月至2016年2月就诊于郑州大学附属肿瘤医院生物免疫治疗科的28例晚期胰腺癌患者,这些患者接受吉西他滨和/或替吉奥化学药物治疗,在化疗结束1~3 d内回输体外培养的CIK细胞。观察指标为疾病进展(PD)率,疾病稳定(SD)率,部分缓解(PR)率,完全缓解(CR)率,中位生存期(mOS),6个月、12个月、18个月和24个月的生存率,疾病控制率(disease control rate,DCR)和不良反应。DCR包括CR、PR和SD。结果:28例患者中5例PR(17.86%),15例SD(53.57%),8例PD(28.57%),DCR为71.43%,mOS 15.41,6、12、18和24个月的生存率分别为85.71%、50.00%、39.28%和10.71%;主要不良反应为骨髓抑制、恶心、呕吐,给予对症处理后好转。结论:CIK细胞联合化疗是晚期胰腺癌患者安全、有效的治疗方法,患者不良反应小,耐受性良好,可显著延长患者生存时间。

抗PD-1抗体对小鼠结直肠癌移植瘤组织中免疫细胞的影响

目的:探讨抗PD-1抗体对小鼠结直肠癌移植瘤组织中免疫细胞的影响。方法:构建BALB/c小鼠CT26结直肠癌模型,随机分为抗PD-1抗体治疗组(PD-1组)和对照组(PBS组)。PD-1组在荷瘤后第6天和第9天分别腹腔注射抗PD-1抗体(0.2 mg/只),对照组给予相同体积的PBS。荷瘤后第7天开始采用游标卡尺每隔1 d对肿瘤进行测量、记录,计算肿瘤体积。末次给药后2周根据治疗效果和肿瘤体积大小将PD-1组小鼠分为有效组(n=3)和无效组(n=5),取其脾脏和肿瘤组织,流式法检测脾脏与肿瘤微环境中T细胞(CD3、CD4、CD8)、髓源性抑制细胞(MDSC)、调节T细胞(Tregs)等细胞比例及肿瘤细胞中PD-L1的表达。结果:治疗有效组小鼠肿瘤体积小于治疗无效组;治疗有效组小鼠脾脏和肿瘤组织中CD3^+、CD4^+和CD8^+T细胞占总细胞的比例均高于无效组,MDSC细胞的比例均低于无效组(P<0.05)。治疗有效组小鼠肿瘤组织中PD-L1的表达高于无效组(P<0.05)。抗PD-1抗体治疗后肿瘤组织中PD-L1的表达与肿瘤组织中浸润的CD3^+、CD4^+和CD8^+T细胞的比例均呈正相关(P<0.05)。结论:小鼠CT26结直肠癌模型中抗PD-1抗体的治疗效果与肿瘤组织中浸润T细胞和MDSC比例的改变密切相关,其可能成为预测和改善抗PD-1抗体治疗效果的检测指标。

PD-1单抗所致免疫相关性肺炎诊治经验

2015年5月1日至2018年8月31日郑州大学附属肿瘤医院免疫治疗科接受程序性细胞死亡蛋白受体-1(PD-1)单抗治疗的128例晚期肿瘤患者中,共4例(3.1%)临床诊断为免疫相关性肺炎,其中男3例,女1例,年龄27~79岁;原发疾病肾透明细胞癌2例,肺鳞癌1例,霍奇金淋巴瘤1例.免疫相关性肺炎发生时间为PD-1单抗首次用药后14d至3个月,中位发病时间1.9个月;分级为1~2级;临床表现多样化,早诊困难.

树突状细胞诱导的杀伤细胞联合化疗治疗老年结直肠癌的临床研究

目的观察树突状细胞诱导的杀伤细胞(DC-CIK)联合化疗对老年结直肠癌患者外周血T细胞亚群及细胞因子的影响,探讨DC-CIK联合化疗对老年结直肠癌的临床疗效及作用机制。方法 68例老年结直肠癌患者随机分为对照组和试验组,每组34例。对照组第1天静脉滴注奥沙利铂100 mg·m^(-2),静脉滴注2 h,第2~6天静脉滴注亚叶酸钙200 mg·m^(-2),静脉滴注5-氟尿嘧啶500 mg·m^(-2)。试验组于化疗前2 d单采外周血单个核细胞,培养树突状细胞诱导的杀伤细胞,于第14~16天连续回输3 d,每天1次,每次1.5 h内回输完毕。2组均21 d为1个疗程,根据患者情况术后辅助化疗4~6个疗程,试验组接受2个疗程树突状细胞诱导的杀伤细胞治疗。比较2组患者治疗前后外周血T细胞亚群及血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素-γ(IFN-γ)水平,比较2组患者的临床疗效及治疗过程中出现的药物不良反应情况。结果治疗后,试验组CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+,CD4^+CD25^+分别为(59.61±5.95)%,(38.97±6.58)%,(1.28±0.07),(4.31±1.07)%;对照组CD3^+为(53.64±5.25)%,CD4^+为(34.64±6.36)%,CD4^+/CD8^+为1.10±0.06,CD4^+CD25^+为(8.17±1.19)%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,对照组和试验组的VEGF分别为(216.51±26.82),(136.73±27.56)ng·L^(-1),TNF-α分别为(3.12±0.81),(4.57±0.79)μg·L^(-1),差异有统计学意义(P<0.05)。试验组治疗前IFN-γ为(23.41±2.29)ng·L^(-1),治疗后为(32.63±2.58)ng·L^(-1)(P<0.05)。对照组的客观缓解率为41.18%(14/34例),疾病控制率为73.53%(25/34例);试验组客观缓解率为55.88%(19/34例),疾病控制率为94.12%(32/34例),2组疾病控制率差异有统计学意义(P<0.05)。2组患者的胃肠道反应和周围神经毒性的发生率差异无统计学意义(P>0.05),试验组的骨髓抑制发生率低于对照组(P<0.05)。结论 DC-CIK联合化疗可改善老年结直肠癌患者的免疫功能,提高患者的临床疗效,且安全性较高。

胃癌合并肝脏原发性恶性黑色素瘤1例

一、病例资料 患者男，55岁。因“间断腹痛1年余”，于2011年10月就诊于外院行胃镜检查提示胃癌。外院病理检查结果提示（胃窦大弯前壁）恶性肿瘤，倾向低分化腺癌。河南省抗癌协会肿瘤病理专家会诊结果示胃溃疡型恶性肿瘤。免疫组织化学检测结果示：CD117（-），CD34（-），α-平滑肌肌动蛋白抗体（-），巢蛋白（Nestin）（＋／-），

Forskolin对小鼠CD8^(+)记忆T细胞富集的影响

目的探讨Forskolin对体外培养小鼠不同T细胞亚群的影响及对CD8^(+)记忆T细胞的富集作用。方法25只C57BL/6小鼠,采用密度梯度离心法分离脾脏淋巴细胞,应用CD3^(+)T细胞分离试剂盒分选CD3^(+)T细胞,经体外培养后分为对照组和5、10、20μmol/L Forskolin组,5、10、20μmol/L Forskolin组分别加入5、10、20μmol/L Forskolin,对照组加入等体积DMSO。采用台盼蓝染色法对4组总T细胞数进行计数,应用流式细胞仪检测4组CD8^(+)记忆T细胞比率,选择与对照组差异最大的Forskolin浓度进行后续实验。采用液相色谱-质谱联用法分析对照组和20μmol/L Forskolin组非靶向代谢组学,应用流式细胞仪检测对照组和20μmol/L Forskolin组CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞比率及增殖活跃(低CFSE荧光强度)的CD8^(+)记忆、非记忆T细胞比率,计算增殖活跃的CD8^(+)记忆与非记忆T细胞比值(CD8^(+)记忆/非记忆T细胞)。结果对照组和5、10、20μmol/L Forskolin组总T细胞数[(102.91±2.91)%、(69.84±6.88)%、(31.61±2.52)%、(14.02±2.12)%]依次降低(P<0.05);5、10、20μmol/L Forskolin组CD8^(+)记忆T细胞比率[(23.03±12.06)%、(31.58±10.39)%、(44.35±9.10)%]依次升高(P<0.05),对照组[(22.58±6.33)%]与5μmol/L Forskolin组比较差异无统计学意义(P>0.05);选择与对照组差异最大的20μmol/L Forskolin组进行后续实验。对照组与20μmol/L Forskolin组差异代谢物有123种,主成分分析显示2组细胞代谢特征存在差异,20μmol/L Forskolin组三羧酸循环代谢物焦磷酸硫胺素、琥珀酸酯水平均低于对照组(P<0.05),脂肪酸代谢物十六烯酸、鞘磷脂、1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油、二十碳二烯酸水平均高于对照组(P<0.05),糖酵解代谢物α-D-葡萄糖1-磷酸、2-脱氧-D-葡萄糖6-磷酸水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。20μmol/L Forskolin组CD8^(+)T细胞比率[(91.24±3.71)%]高于对照组[(81.14±9.22)%](t=9.297,P=0.008),CD4^(+)T细胞比率[(0.57±0.45)%]低于对照组[(8.33±6.58)%](t=12.449,P=0.003)。20μmol/L Forskolin组增殖活跃的CD8^(+)记忆T细胞比率[(37.50±1.15)%]高于CD8^(+)非记忆T细胞[(6.46±0.75)%](t=72.779,P<0.001),对照组增殖活跃的CD8^(+)记忆T细胞比率[(49.73±2.40)%]低于CD8^(+)非记忆T细胞[(70.90±1.39)%](t=19.289,P<0.001);20μmol/L Forskolin组增殖活跃的CD8^(+)记忆、非记忆T细胞比率均低于对照组(t=7.956,P=0.001;t=70.692,P<0.001),CD8^(+)记忆/非记忆T细胞(5.84±0.50)高于对照组(0.70±0.22)(t=17.624,P<0.001)。结论体外培养过程中Forskolin对小鼠不同T细胞亚群的增殖抑制存在差异,对CD4^(+)T细胞的抑制强于CD8^(+)T细胞,对CD8^(+)非记忆T细胞的抑制强于CD8^(+)记忆T细胞,添加Forskolin有助于CD8^(+)记忆T细胞富集。

微小RNA-520e通过调控锌指蛋白367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-520e（miR-520e）对肺癌细胞株A549细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺癌细胞A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520e的表达差异，转染miR-520e模拟物（miR-520e mimics）获得miR-520e过表达细胞株，迁移实验及Transwell实验检测miR-520e对A549细胞迁移和侵袭的影响。生物信息学预测miR-520e靶向锌指蛋白367（ZNF367）基因，通过双荧光素酶报告体系进行验证。Western blot检测miR-520e过表达对ZNF367蛋白表达的影响，采用小干扰RNA（siRNA）研究ZNF367对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果RT-PCR结果显示，相对于BEAS-2B细胞（1.000±0.135），A549细胞中miR-520e表达量为0.342±0.214（P=0.000）。转染miR-520e mimic后，相对空白对照（NC）组（1.000±0.273），mimic组miR-520e过表达（2.617±0.124，P=0.000）。划痕培养24 h后，与NC组[（100.000±12.347）%]相比，mimic组细胞迁移率为[（43.727±16.746）%]，scramble组细胞迁移率为[（91.722±7.631）%]，过表达miR-520e抑制肺癌细胞迁移（P=0.000）。侵袭实验结果显示，mimic组发生侵袭的细胞数[（36.458±21.301）%]与miR-520e scramble组[（93.783±9.125）%]和NC组[（100.000±15.114）%]比较减少（P=0.000）。荧光素酶报告基因结果显示，转染miR-520e mimics抑制荧光素酶的活性（0.374±0.241，P=0.000）。RT-PCR和Western blot发现miR-520e mimics下调ZNF367的表达（0.426±0.153, P=0.000；0.368 ±0.127，P=0.000）。进一步实验发现，miR-520e靶向ZNF367基因调控肺癌细胞的迁移和侵袭。结论miR-520e通过调控ZNF367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭。

外周血血小板淋巴细胞比值及体质指数与黑色素瘤患者预后的关系

目的探讨外周血血小板与淋巴细胞比值（PLR）、体质指数（BMI）与黑色素瘤患者预后的关系。方法回顾分析郑州大学附属肿瘤医院2010年1月1日至2015年12月31日收治的140例黑色素瘤患者的临床资料。采用受试者工作特征曲线（ROC）确定PLR最佳cut-off值，根据cut-off值分别分为高PLR组、低PLR组。根据《中国成人超重和肥胖症预防控制指南》分为高BMI组、低BMI组。分析PLR、BMI与患者总生存期（OS）、无进展生存时间（PFS）、无病生存期（DFS）的相关性，单因素生存分析采用Kaplan．Meier法和logrank检验，多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果ROC曲线确定的PLR最佳cut—off值为PLR=120．15，BMI临界值为24kg／m^2。单因素生存分析表明，PLR、BMI、临床分期均为影响患者OS的因素（P〈0．05），全组患者中位生存期（MST）为21个月，高、低PLR组MST分别为17、34个月；高、低BMI组MST分别为29、13个月，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。而PLR、BMI对患者PFS、DFS的影响均无统计学意义。Cox多因素分析表明，PLR、BMI、临床分期为影响患者OS的独立因素（P〈0．05）。而且BMI是一个保护性因素，BMI每增加1个单位患者死亡风险下降0．611倍。临床分期亚组分析表明，PLR对Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者预后均为危险因素（P〈0．05）。结论PLR为影响黑色素瘤患者OS的独立危险因素，BMI为影响患者OS的独立保护性因素，高PLR提示预后相对较差、高BMI提示预后相对好，二者对黑色瘤患者生存期判断具有重要价值。

肺原发性恶性黑色素瘤一例

患者，男，66岁。因“间断咳嗽、咳痰1个月余，胸闷、气短1周”，于2016年3月28Et就诊于外院行CT检查提示：肺占位，肺癌？于2016年4月5日就诊于我院，患者间断咳嗽、咳痰，痰中带血，伴胸闷、气短，无发热、头疼、恶心、腹胀、腹泻等不适症状，病情间断发作。查体：体温：36．2℃，脉搏：88次／min，呼吸：

特异性靶向PD-1分子的PD-15融合蛋白联合G15Ra-K562滋养细胞快速扩增NK/T细胞

目的探讨anti-PD-1(scFv)/hIL-15(简称PD-15)融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力及联合GF-hIL-15Ra-K562(简称G15Ra-K562)滋养细胞对自然杀伤细胞(NK)/T细胞增殖能力的影响。方法Overlap PCR构建G15Ra表达载体,电穿孔仪转染K562,极限稀释法获取G15Ra-K562滋养细胞单克隆株。酶切连接构建PD-15表达载体,Lipofectamine^(TM)2000瞬时转染HEK293T细胞并获取包含PD-15融合蛋白的条件培养液。密度梯度离心获取人外周血单个核细胞,CFSE染色标记活跃增殖细胞。流式细胞术检测PD-15特异性结合PD-1的能力和对人外周血单个核细胞的增殖及不同淋巴亚群比例的影响。结果成功构建高表达融合蛋白G15Ra的滋养细胞单克隆株G15Ra-K562。添加hIL-15能够将G15Ra-K562滋养细胞扩增人外周血淋巴细胞能力提升5倍以上(P<0.05)。PD-15融合蛋白具有PD-1特异性结合能力(P<0.001),联合G15Ra-K562滋养细胞能够在体外高效扩增人外周血来源的NK/T细胞(P<0.05),扩增得到的细胞产品中以NK、CD8^(+)T和CD4^(+)T细胞为主。结论PD-15融合蛋白能够特异性靶向PD-1分子且在联合G15Ra-K562滋养细胞后具有强的人外周血来源的NK/T细胞扩增能力,建立了分步、靶向递送IL-15/IL-15Ra复合物至PD-1+细胞的细胞培养方案,为后续选择性扩增PD-1+细胞提供实验资料。

PD-1/PD-L1抑制剂疗效预测的生物标志物

随着肿瘤精准免疫治疗的发展,寻找预测程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)响应能力的生物标志物成为该领域研究的一大热点。迄今已有多项预测指标如肿瘤组织PD-L1的表达、肿瘤浸润淋巴细胞、肿瘤突变负荷、血清学标记甚至放射学指标在抗PD-1/PD-L1免疫治疗过程中显现了它们的价值,但每个预测指标都有其局限性。