多模式健康宣教在晚期肝癌患者中的应用效果

目的探讨多模式健康宣教在晚期肝癌患者中的应用效果。方法根据干预方法的不同将96例晚期肝癌患者分为对照组和观察组,每组48例,对照组患者采取常规干预,观察组患者采取多模式健康宣教。比较两组患者的治疗依从性、疼痛程度[视觉模拟评分法(VAS)]、疲乏程度、心理状况及生活质量。结果观察组患者的治疗依从率明显高于对照组(P﹤0.01)。干预后,两组患者的VAS评分和疲乏程度评分均低于本组干预前,观察组患者的VAS评分和疲乏程度评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。干预后,两组患者敌对、焦虑、敏感、抑郁评分均低于本组干预前,观察组患者敌对、焦虑、敏感、抑郁评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。干预后,两组患者精神健康、生理功能、活力、情感职能评分均高于本组干预前,观察组患者精神健康、生理功能、活力、情感职能评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论多模式健康宣教可提高晚期肝癌患者的治疗依从性,缓解其疼痛和疲乏程度,改善其心理状况和生活质量,值得临床推广使用。

精准肝切除治疗邻近重要管道肝肿瘤的临床疗效

目的：探讨精准肝切除术治疗邻近重要管道肝肿瘤的临床疗效。方法：采用回顾性描述性研究方法。收集2014年12月至2016年6月郑州大学附属肿瘤医院收治的22例邻近重要管道肝肿瘤行精准切除术患者的临床资料。术前精准评估，术中充分暴露肿瘤，适时选择不同血流阻断方法，根据肿瘤部位、大小、与血管的关系以及肝硬化程度等因素综合评估行精准肝切除术。观察患者手术方式、手术时间、肝切除时间、术中出血量、围术期输血例数、术后并发症、术后住院时间及随访情况。采用门诊或电话方式进行随访。肝细胞癌患者前3个月每个月复查AFP，以及肝脏彩色多普勒超声或CT检查监测肿瘤复发情况；胆管细胞癌患者每个月复查肿瘤标志物，以及肝脏彩色多普勒超声或CT检查监测肿瘤复发情况，无复发患者 3个月后每2个月复查1次。肝血管瘤患者出院后每2～3个月随访1次，半年后每6个月随访1次，随访内容包括肝功能、超声等影像学检查，了解患者复发情况。随访时间截至2016年9月。符合正态分布的计量资料以±s表示。结果：22例患者均顺利完成精准肝切除术。22例患者中，20例术中采用彩色多普勒超声探查定位。22例患者血流阻断方法：Pringle法行入肝血流全阻断6例、预先处理相应肝蒂3例、选择性半肝血流阻断8例、全肝血流阻断2例、未行肝门阻断3例。22例患者肝切除方式：右三叶切除1例、左半肝切除 2例、肝Ⅳa段切除2例、肝Ⅳ段切除2例、肝Ⅴ段切除3例、肝Ⅷ段切除3例、肝中叶切除1例、局部肝切除8例。22例患者手术时间为（213±39）min，肝切除时间为（57±19）min，术中出血量为（518±98）mL，围术期输血3例。22例患者中，5例术后发生并发症，其中术区积液2例、右侧胸腔积液2例、胆汁漏1例，均经对症治疗后好转。22例患者术后住院时间为（8.9±1.6）d。术后21例患者获得随访，随访时间为3～20个月，中位随访时间为12个月。随访期间2例患者复发，无术区边缘复发患者。结论：邻近第一和第二肝门部肝肿瘤患者行精准肝切除术安全可行，其具有术中出血量少、术后并发症发生率低等优点。

肝癌SMMC-7721细胞中侧群细胞分选及其生物学特性的研究

目的:分选肝癌SMMC-7721细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性。方法:采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将SMMC-7721细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2个亚群。细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力;Transwell法检测SP细胞和NSP细胞的迁移及侵袭能力;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率;裸鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性。结果:SMMC-7721细胞中分选出的SP细胞比例为(9.2±0.2)%。SP细胞中G0/G1期细胞比例高于NSP细胞,凋亡率低于NSP细胞(P<0.05);SP细胞的增殖速度、克隆形成能力、体外迁移和侵袭能力均明显高于NSP细胞(P<0.05);裸鼠成瘤实验显示SP细胞的致瘤能力明显高于NSP细胞。结论:肝癌SMMC-7721细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞。

miR-1228-5p在原发性肝细胞癌组织和血清中的表达及意义

目的:探讨mi R-1228-5p在原发性肝细胞癌组织和血清中的表达及意义。方法:采用mi RNA快速提取试剂盒分别抽取患者和健康体检者血清中的总mi RNA及患者肝癌组织和癌旁正常肝组织中的总mi RNA,采用实时荧光定量PCR检测总mi RNA中mi R-1228-5p的相对表达量;分析mi R-1228-5p的相对表达量与患者年龄、性别、家族史、肿瘤最大径和临床分期的相关性;此外,用ROC曲线下面积分析mi R-1228-5p在原发性肝细胞癌和健康人群中的诊断价值。结果:原发性肝细胞癌患者血清中mi R-1228-5P的表达量明显高于健康体检者(P<0.05),并且mi R-1228-5P在原发性肝细胞癌组织中的表达量明显高于其癌旁正常肝组织(P<0.05);mi R-1228-5p表达水平与患者的年龄、性别及家族史无关(P>0.05),而与患者的肿瘤最大径和临床分期有关(P<0.05);mi R-1228-5p鉴别原发性肝细胞癌与健康人群中的敏感度和特异度分别为71%和93%。结论:mi R-1228-5p在肝癌患者中的表达水平高于健康人群,且其在肝癌组织中的表达水平高于癌旁正常肝组织。mi R-1228-5p的表达水平与患者的肿瘤最大径和临床分期相关。此外,mi R-1228-5p具有诊断原发性肝细胞癌的潜在价值。

思维导图下疼痛护理路径在老年胆囊切除术患者中的应用

目的研究思维导图下疼痛护理路径对老年胆囊切除术患者术后疼痛感知、心理状态及睡眠质量的影响。方法选取2020年3月至2021年1月期间郑州大学附属肿瘤医院肝胆胰外科收治的89例老年患者为研究对象,均接受胆囊切除术治疗,采用随机数字表法分为对照组44例和观察组45例。对照组给予常规护理,其中男23例、女21例,年龄(70.83±3.65)岁;观察组在此基础上给予思维导图下疼痛护理路径干预,其中男23例、女22例,年龄(71.34±3.21)岁。比较术后3 d两组患者疼痛感知[疼痛信念与感知量表(PBPI)]、心理状态[世界卫生组织(WHO)情绪状态问卷(POMS)]、睡眠质量[匹茨堡睡眠质量指数量表(PSQI)]差异。计量资料组间比较采用独立样本t检验,组内采用配对t检验;计数资料采用χ^(2)检验。结果术后3 d,观察组PBPI、POMS、PSQI评分分别为(32.77±5.18)分、(56.63±6.47)分、(23.87±4.39)分,均明显低于对照组的(37.64±6.12)分、(64.16±6.81)分、(27.44±4.78)分,差异均有统计学意义(t=4.055、5.349、3.671,均P<0.001)。结论思维导图下疼痛护理路径干预可有效缓解老年胆囊切除术患者术后疼痛感知,提高心理状态,改善睡眠质量。

不同TNM分期肝癌患者血清miR-218、miR-92水平变化及临床意义

目的探讨不同肿瘤分期(TNM分期)肝癌患者血清微小RNA-218(miR-218)、微小RNA-92(miR-92)水平变化及临床意义。方法回顾性选取2020年3月至2023年3月郑州大学附属肿瘤医院收治的246例肝脏疾病患者为研究对象,其中肝癌患者(肝癌组)112例,良性肝脏疾病患者(良性肝病组)134例,另选取我院同期246例健康体检者为对照组。比较3组血清miR-218、miR-92水平,并分析其与肝癌发生及TNM分期相关性,比较不同TNM分期肝癌患者血清两指标水平,偏回归分析肝癌发生的危险因素,ROC分析两指标联合检测对肝癌的诊断价值,分析两指标不同水平患者发生肝癌的危险度。结果入院时3组血清miR-218水平比较:肝癌组<良性肝病组<对照组,且其水平与肝癌发生及肝癌TNM分期均呈负相关,血清miR-92水平比较:肝癌组>良性肝病组>对照组,且其水平与肝癌发生及肝癌TNM分期均呈正相关(P<0.05);不同TNM分期肝癌患者miR-218水平比较:Ⅳ期<Ⅲ期<Ⅱ期<Ⅰ期,miR-92水平比较:Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期(P<0.05);血清miR-218水平(>3.00)为发生肝癌危险因素,miR-92水平(>0.68)为其保护因素(P<0.05);血清miR-218、miR-92水平联合诊断肝癌的AUC为0.817,且高水平患者发生肝癌险度是低水平的0.389、3.004倍(P<0.05)。结论肝癌患者血清miR-218表达下调、miR-92表达上调,二者表达量与肝脏疾病进展、肝癌发生及肝癌TNM分期密切相关,其联合检测对肝癌具有较高诊断效能,可为临床诊断肝癌、评估肝癌严重程度提供参考依据。

晚期原发性肝癌转化治疗1例

患者男性,49岁,主因“右上腹间断隐痛2个月余”于2020年2月28日收入我院。2个月前患者无明显诱因出现右上腹间断隐痛,无放射痛。自行口服“消炎利胆片”,其间症状加重,至当地医院行上腹增强CT检查,结果提示肝实性占位,考虑肝癌;实验室检查诊断乙肝,予口服恩替卡韦片(0.5 mg/d)抗病毒治疗。为进一步治疗就诊于我院。既往史无特殊。母亲曾患肝硬化,因“肝病”去世。入院后体检未见明显阳性体征。实验室检查:甲胎蛋白>1210.00μg/L,癌胚抗原及CA19‑9均在正常范围,乙肝表面抗原、表面e抗体、核心抗体阳性,乙肝病毒DNA定量检测549 IU/ml。肝功能Child‑Pugh分级为A级。

苏氨酰tRNA合成酶在肝细胞癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨苏氨酰tRNA合成酶(TARS)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与患者预后、肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的关系。方法收集93例HCC患者的临床病理资料,用免疫组织化学检测肝癌组织和癌旁组织中TARS的表达差异,分析其与患者临床病理特征及预后的关系;使用小干扰RNA(siRNA)技术下调肝癌细胞内TARS的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的迁移、侵袭能力,组间比较采用单因素和多因素方差分析及t检验。结果肝癌组织中TARS的表达明显高于癌旁组织(60.2%比25.8,P<0.01);TARS高表达组的整体生存期明显低于TARS低表达组(P<0.01),TARS高表达是影响HCC患者整体生存独立风险因素(P<0.01)。siRNA组细胞中TARS mRNA表达(0.04±0.01比0.99±0.03,P<0.01)及蛋白(0.18±0.02比1.11±0.07,P<0.01)表达低于对照组。CCK-8实验结果表明,与对照组比较,TARS降表达组细胞吸光度值在第3天(3.08±0.03比3.65±0.14,P<0.01)、第4天(3.94±0.06比5.42±0.15,P<0.01)、第5天(5.41±0.31比8.20±0.60,P<0.01)明显低于对照组,细胞增殖速度明显减慢;Transwell试验结果显示TARS降表达组细胞迁移能力明显低于对照组(66.8±4.7比77.8±7.2,P<0.01),TARS降表达组细胞侵袭数量低于对照组(37.0±4.9比49.2±5.0,P<0.01)。结论TARS在肝癌组织中异常高表达,为HCC患者预后的独立预测因素;敲低肝癌细胞中TARS的表达水平能够抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

肝癌SMMC-7721细胞中侧群细胞干细胞标记的表达

目的分选肝癌细胞株SMMC-7721中的侧群（SP）细胞，并分析其干细胞标记的表达。方法采用流式细胞荧光激活分选（FACS）技术将SMMC-7721细胞分为SP细胞和非侧群（NSP）细胞两个亚群，以实时荧光定量聚合酶链反应（real—timePCR）技术和流式细胞术对两个亚群细胞干细胞标记mRNA和蛋广1表达进行分析。结果SMMC-7721细胞株中分选出的SP细胞比例为（9．2±．2）％。SP细胞ABCG2、CD133、Oct4、Sox2和NANOG等干细胞标记mRNA的表达水平分别是NSP细胞的7．132倍、4．985倍、8．642倍、5．095倍和5．164倍，差异均有统计学意义（P〈0．01）；ABCG2、CD133、Oct4、Sox2和NANOG蛋白在肝癌sP细胞中的含量分别为（92．65±3．92）％、（12．75±1．62）％、（17．35±2．31）％、（9．57±1．71）％和（28．39±5．28）％，在NSP细胞中的含量分别为（0．26±0．06）％、（2．51±0．17）％、（1．74±0．38）％、（1．52±0．41）％和（3．37±1．02）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论肝癌SMMC-7721细胞中的sP细胞可能富集了肝癌干细胞，联合应用多种干细胞标记筛选肝癌SP细胞可能会获得纯化的肝癌干细胞。

肝癌SMMC-7721细胞中侧群细胞侵袭性与上皮-间充质转化的关系

目的 分选肝癌细胞株SMMC-7721中的侧群（SP）细胞,探讨其体外侵袭性与上皮-间充质转化（EMT）的关系.方法 采用流式细胞荧光激活分选（FACS）技术将SMMC-7721细胞分为SP细胞和非侧群（NSP）细胞两个亚群,以Transwell法检测SP细胞和NSP细胞侵袭能力,实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot技术对两个亚群细胞波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和Snail的表达进行分析.结果 Transwell侵袭实验中SP细胞穿膜细胞数（66.3±7.4）个明显高于NSP细胞穿膜细胞数（27.5±6.5）个（P＜0.01）；SP细胞Vimentin、N-cadherin和Snail mRNA的表达水平分别是NSP细胞的9.527、6.834、8.173倍,NSP细胞E-cadherin mRNA的表达水平是SP细胞的5.353倍,差异均有统计学意义（P＜0.01）；E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Snail蛋白SP细胞和NSP细胞中的表达差异有统计学意义（0.174±0.014和0.935±0.012、1.117±0.012和0.314±0.011、0.975±0.017和0.179±0.013、0.917±0.014和0.202±0.013,P＜0.01）.结论 肝癌SMMC-7721细胞中SP细胞的体外高侵袭性可能与EMT有关.

超声造影对胰腺囊实性病变良恶性鉴别诊断价值

目的探讨超声造影对胰腺囊实性病变良恶性的鉴别诊断价值。方法 63例胰腺囊实性病变患者均行常规超声及超声造影检查,观察其影像学特点;并以组织病理学结果为金标准,比较常规超声和超声造影检查诊断良、恶性胰腺肿瘤的符合率。结果 63例中恶性32例,其中导管腺癌20例,实性假乳头状肿瘤12例;良性31例,其中浆液性囊腺瘤18例,黏液性囊腺瘤13例;常规超声显示胰腺导管腺癌和实性假乳头状肿瘤主要表现为病灶边缘光整、形态规则、实性区域回声不均匀、血流信号有或无、有钙化等,浆液性囊腺瘤和黏液性囊腺瘤主要表现为边界清晰、形态规则、无钙化、无血流信号等;超声造影显示胰腺导管腺癌在增强期和减退期为低回声,实性假乳头状肿瘤在增强期为高回声,减退期为低回声,浆液性囊腺瘤和黏液性囊腺瘤在增强期为等回声或高回声,减退期为等回声或低回声;超声造影诊断良、恶性胰腺肿瘤的符合率(83.87%、84.37%)高于常规超声检查(61.29%、46.87%)(P<0.05)。结论超声造影在胰腺囊实性病变良恶性的鉴别诊断中有一定价值。

抗人类表皮生长因子受体2/表皮生长因子受体双特异性抗体对人胰腺癌细胞PANC-1的靶向治疗

目的 通过同时靶向人类表皮生长因子受体-2（Her-2）和表皮生长因子受体（EGFR）分子的双特异性抗体抑制人胰腺癌细胞PANC-1体内外增殖.方法 通过基因合成获得曲妥珠单抗和西妥昔单抗的基因序列,经重叠聚合酶链反应（PCR）融合成目的基因,构建入表达载体,转化进毕赤酵母X-33进行表达,获得同时靶向Her-2和EGFR的双特异性抗体CT-BiAb;流式检测CT-BiAb 对胰腺癌细胞系PANC-1的结合能力;MTT法检测CT-BiAb对PANC-1细胞的增殖抑制;通过流式双染法检测给药后PANC-1细胞的凋亡率;建立PANC-1荷瘤小鼠动物模型,检测CT-BiAb的体内抗肿瘤活性.结果 通过毕赤酵母表达及纯化,获得CT-BiAb,经Western blot鉴定验证了CT-BiAb 表达及装配正确.流式细胞术检测CT-BiAb与PANC-1的结合率为50.9%.细胞增殖抑制实验,与PBS组相比,亲本抗体组与CT-BiAb组对PANC-1均有抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.凋亡实验,CT-BiAb组PANC-1细胞凋亡率[（33.50±7.14）%]高于亲本曲妥珠单抗[（15.86±4.32）%,P=0.022],也高于西妥昔单抗组[（18.64±5.71）%,P=0.048].移植瘤模型实验,CT-BiAb 高剂量组肿瘤抑制率可以达到（73.76±10.21）%,明显优于亲本曲妥珠单抗[（32.55±14.42）%,P=0.001],也明显优于西妥昔单抗组[（52.63±8.47）%,P=0.006].结论 本文构建了CT-BiAb,其具有良好的体内外抗肿瘤活性,有效地抑制PANC-1的体内外增殖,为抗肿瘤治疗提供了新的思路.

抑制α-烯醇化酶的表达联合紫杉醇对肝癌细胞增殖侵袭和凋亡的影响

目的探讨抑制α-烯醇化酶(ENO1)联合紫杉醇对肝癌细胞系SK-HEP-1增殖、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法采用脂质体法将siRNA-ENO1(siRNA-ENO1组)及siRNA-NC(siRNA-NC组)转染至肝癌SK-HEP-1细胞,将未转染的SK-HEP-1细胞作为对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染效果。使用0、2.5、5、10、20和40μg/L紫杉醇处理SK-HEP-1细胞48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率并计算紫杉醇的半抑制浓度。使用10μg/L紫杉醇处理转染siRNA-ENO1(紫杉醇+siRNA-ENO1组)和siRNA-NC(紫杉醇+siRNA-NC组)的SK-HEP-1细胞,采用MTT法、克隆形成实验、Transwell实验和流式细胞术检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭和凋亡能力,Western blot法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平。结果siRNA-ENO1组细胞中ENO1 mRNA和蛋白表达表达水平(分别为0.25±0.03和0.23±0.02)均低于对照组(分别为1.00±0.00和0.69±0.04,均P<0.05)。2.5、5、10、20和40μg/L紫杉醇作用48 h,肝癌SK-HEP-1细胞存活率[分别为(88.65±6.46)%、(72.36±6.08)%、(60.48±4.23)%、(38.52±3.56)%和(20.75±2.32)%]均低于对照(0μg/L)组[(100.00±0.00)%,均P<0.05]。紫杉醇半抑制浓度为13.26μg/L。siRNA-ENO1组细胞存活率和克隆形成率[分别为(68.86±5.12)%和(18.12±2.25)%]均低于siRNA-NC组[分别为(100.00±0.00)%和(29.65±3.06)%,均P<0.05];紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞存活率和克隆形成率[分别为(43.28±2.64)%和(8.72±0.52)%]与紫杉醇+siRNA-NC组[分别为(61.75±5.06)%和(13.48±2.16)%]和siRNA-ENO1组[分别为(68.86±5.12)%和(18.12±2.25)%]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞侵袭数[(23.64±2.12)个]低于siRNA-ENO1组和紫杉醇+siRNA-NC组[分别为(42.16±2.75)个和(37.35±2.42)个,均P<0.05]。紫杉醇+siRNA-NC组和siRNA-ENO1组细胞凋亡率[分别为(17.49±1.35)%和(15.29±1.50)%]高于siRNA-NC组[(7.21±0.70)%,均P<0.05];紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞凋亡率[(24.59±2.40)%]高于紫杉醇+siRNA-NC组和siRNA-ENO1组[分别为(17.49±1.35)%和(15.29±1.50)%,均P<0.05]。siRNA-ENO1组和紫杉醇+siRNA-NC组细胞中ENO1、PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt表达水平及PCNA、MMP-9、Bcl-2表达水平均低于siRNA-NC组(均P<0.05);紫杉醇+siRNA-ENO1组细胞中ENO1、p-PI3K、p-Akt及PCNA、MMP-9、Bcl-2表达水平均低于siRNA-ENO1组和紫杉醇+siRNA-NC组(均P<0.05)。结论抑制ENO1表达可增强紫杉醇对肝癌SK-HEP-1细胞的抑增殖、侵袭和促凋亡作用,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

肝门部胆管癌患者术前不同胆道引流方式的Meta分析

目的探讨肝门部胆管癌患者术前胆道引流(PBD)的最佳方式。方法通过PubMed、EMBASE、webofScience、CNKI和万方数据库系统搜索肝门部胆管癌患者PBD的前瞻性或回顾性研究,对引流相关性胆管炎、胰腺炎、出血以及胆汁淤积缓解成功率进行Meta分析。结果纳入12篇相关文献,共1567例患者。分析结果显示,与内镜胆道引流(EBD)相比,经皮经肝胆道引流(PTBD)并发胆管炎风险低(RR=0.60,95%CI:0.39~0.95,P<O.05),胰腺炎发生风险低(RR=0.30,95%CI:0.15~0.59,P<0.05),缓解胆汁淤积成功率高(RR=2.77,95%CI:1.79—4.28,P<0.05)。但PTBD出血风险(RR=2.38,95%CI:1.12~5.05,P<0.05),术中输血风险(RR=1.59,95%CI:1.05~2.42,P<0.05)及腹腔转移风险较高(RR:3.24,95%CI:1.15—9.12,P<0.05)。且PTBD腹腔转移发生率高达4.2%。PTBD与EBD在胆漏、腹腔内脓肿、R0切除、术后住院时间、术后并发症、患者院内病死率等方面差异无统计学意义(P>0.05)。ENBD与EBS相比,胆管炎、胰腺炎、肝脓肿发生率无明显差异。结论肝门部胆管癌患者需要进行PBD时,应首选内镜下鼻胆管引流(ENBD)。PTBD可以作为ENBD引流失败后的补救措施。

Notch信号通路通过调控Snail/E-钙黏蛋白参与肝细胞肝癌侵袭迁移的机制

目的 探讨Notch信号通路在肝癌（HCC）细胞侵袭迁移中的作用机制.方法 分别用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测肝癌细胞株HepG2和非肿瘤肝细胞株HL-7702中Snail和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的mRNA和蛋白表达;Westem blot检测NICD蛋白的表达;200 pmol小干扰RNA（siRNA）-Snail和5μmol/L DAPT分别处理HepG2后,RT-PCR和Westem blot 检测Snail和E-cadherin的mRNA和蛋白表达;Transwell小室检测各处理组细胞的侵袭、迁移能力.结果 HepG2中Snail mRNA和蛋白的表达均高于非肿瘤肝细胞株HL-7702（0.11±0.06比0.08±0.02、0.46±0.06比0.21±0.04）,差异有统计学意义（P =0.021、0.032）,E-cadherin mRNA和蛋白的表达低于HL-7702（0.47±0.11比0.83±0.05、0.17 ±0.03比0.25±0.06）,差异有统计学意义（P =0.012、0.004）.与siRNA阴性对照组比较,siRNA-Snail组Snail mRNA（0.76±0.13比0.25±0.06,P=0.031）和蛋白（0.81±0.24比0.27 ±0.08,P=0.024）表达显著降低,E-cadherin mRNA（0.33±0.06比0.85±0.18,P=0.015）和蛋白（0.14 ±0.02比0.52 ±0.07,P=0.031）的表达显著上调,细胞侵袭（93.42±12.33比39.66±8.33,P=0.011）、迁移（375.66±65.21比98.52±12.76,P=0.008）能力均明显下降.HepG2中NICD蛋白的表达明显高于HL-7702（0.26±0.04比0.11±0.02）,差异有统计学意义（P=0.004）.与NT组比较,Notch信号通路特异性γ-分泌酶抑制剂（GSI）抑制剂DAPT能够降低NICD蛋白的表达（0.22±0.05,0.12 ±0.02,P=0.020）,说明DAPT能够有效抑制Notch信号通路的活化.DAPT能有效抑制Snail mRNA（0.56±0.08比0.23±0.05,P=0.004）和蛋白（0.72 ±0.06比0.27±0.04,P=0.030）的表达,上调E-cadherin mRNA（0.21±0.03比0.54±0.06,P=0.011）和蛋白（0.32±0.07比0.77 ±0.08,P =0.021）的表达,同时能够抑制肝癌细胞的侵袭（87.33±9.33比32.21 ±6.63,P=0.008）、迁移（384.23±43.33比78.31±9.33,P=0.012）.结论 Notch信号通路在肝癌侵袭迁移过程中起重要作用,其作用机制是通过调控Snail/E-cadherin来实现的.

微小RNA-1对胃癌细胞中血管生成相关因子表达的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-1在胃癌发生过程中的作用。方法实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测人胃癌细胞株SGC7901和BGC823中miR-1的表达。利用瞬时转染将表达miR-1的质粒转入胃癌细胞中，检测miR-1对胃癌细胞增殖的影响，利用Westernblot检测胃癌细胞中过表达的miR-1对血管生成相关因子血管内皮生长因子（VEGF）-A和EDN-1的表达影响，双报告基因用于分析miR-1与VEGF-A和EDNl3’端非编码区（3’UTR）的相互作用位点。结果与正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较，胃癌细胞中miR-l表达显著下调（P=0．000），miR-1通过与VEGF-A和EDN-13’UTR的特异位点结合，抑制VEGF-A和EDN-1的蛋白表达水平，从而抑制胃癌细胞的增殖。结论miR-1通过抑制人胃癌中的血管生成相关因子的表达从而起到抑制肿瘤的作用。

微小RNA-451对HepG2肝癌细胞迁移及侵袭的影响及其机制

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-451对HepG2肝癌细胞迁移及侵袭的影响及其机制。方法脂质体Lipofeetamine^TM2000将miR451模拟物和miR-451NC转入HepG2细胞中，48h后，实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测miR-451表达，噻唑蓝（M1Tr）法检测细胞活力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，Westernblot法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadhefin）表达及磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（P13K／Akt）信号通路激活情况。结果与miR-451NC组比较，miR-451模拟物组miR4511表达量（1．45±0．14比0．20±0．02）显著提高（P=0．006），转染24、48、72h，细胞活力（0．33±0．03比0．38±0．03，0．32±0．03比0．59±0．04．0．25±0．02比0．784-0．06．P=0．009．P=0．000．P=0．000）、细胞迁移能力[（2．454-0．22）mm比（17．32±1．74）m1]3，P=0．000]及侵袭能力（18．27±1．82比194．58±19．28）降低（P=0．000），MMP-2（0．18±0．01比0．84±0．08），MMP-9（0．20±0．02比1．08±0．10），Vimentin（0．16±0．01比1．98±0．20），P13K（0．34±0．03比1．32±0．13）及p-Akt（0．38±0．03比1．02±0．10）表达量显著下调（P=0．000、P=0．000、P=0．000、P=0．000、P=0．000），E-cadhefin（1．00±0．10比0．15±0．10）表达量显著上调（P=0．000）。结论提高miR-451表达能通过抑制P13K／Akt信号通路进而抑制细胞迁移侵袭。

下调E26转化特异性转录因子的表达水平抑制胃癌细胞生长的研究

目的观察E26转化特异性同源因子（EHF）的表达对胃癌细胞生长的影响。方法通过Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测胃癌细胞BGC823、SGC7901与胃黏膜上皮细胞GES-1中EHF的蛋白和mRNA水平的表达。利用RNA干扰技术，将小干扰RNA（siRNA）si-EHF-979或对照小干扰RNAsi-NC转染到胃癌细胞BGC823和SGC7901中，将si-EHF-979转染组，没为实验组，si-NC转染组设为对照组，利用噻唑蓝（MTT）法检测胃癌细胞增殖。通过Transwell趋化实验检测EHF对胃癌细胞的迁移和侵袭能力的影响。将转染si-EHF-979或si-NC的胃癌细胞BGC823接种于裸鼠的右腋窝皮下，建立下调EHF基因的胃癌细胞株的裸鼠移植瘤模型。结果与胃黏膜上皮细胞GES-1比较，人胃癌细胞株BGC823、SGC7901中EHF mRNA表达水平显著上调，差异有统计学意义（P=0．001）。EHF基因下调后胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著被抑制。裸鼠移植瘤模型显示，下调EHF的表达水平，显著抑制体内肿瘤的生长，差异有统计学意义（P=0．001）。结论EHF在胃癌细胞株中高表达，下调EHF的表达水平能够抑制胃癌细胞的生长。

HOX转录反义RNA在胃癌组织的表达及其机制

目的探讨HOX转录反义RNA (HOTAIR)在胃癌发病中的作用机制.方法选取40例胃癌患者,其中男29例,女21例,平均年龄(51.7±10.8)岁;Ⅰ期20例,Ⅱ期10例,Ⅲ期6例,Ⅳ期4例;高分化9例,中分化12例,低分化19例.收集所有患者的癌变组织和癌旁组织,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测两种组织中长链非编码RNA(lncRNA) HOTAIR的表达水平,并对HOTAIR表达与患者临床特征的相关性进行分析;设计合成lncRNA HOTAIR小干扰RNA(siRNA),在原代SGC-7901胃癌细胞株建立沉默模型.检测原代SGC-7901胃癌细胞中lncRNAHOTAIR的表达,流式细胞周期和细胞凋亡检测研究lncRNA HOTAIR对癌细胞增殖凋亡的影响;结合蛋白质印迹法(Western blot)和RT-qPCR技术研究其分子调控机制.应用SPSS 19.0统计软件分析.根据不同的数据类型,组间差异采用χ2检验或t检验分析,相关性采用皮尔森(Pearson's)相关试验评价.结果癌组织中lncRNA HOTAIR的表达量为4.367±0.352,高于癌旁组织的0.984±0.782(P<0.05),癌组织中lncRNA HOTAIR与肿瘤分化程度以及肿瘤分期呈正相关(r=0.347、0.623,P<0.05).lncRNA HOTAIR siRNA转染组与未转染组比较,G1期细胞数升高(78.64土6.91比58.34±6.13,t=3.806,P<O.05),S期细胞数降低(11.93±2.54比31.54±3.01,t =8.624,P<0.05),G2期细胞数量没有明显的变化(9.43±1.47比10.12士2.11,t =0.645,P>0.05).lncRNA HOTAIR siRNA转染处理细胞48 h后,lncRNA HOTAIR siRNA转染组早期凋亡细胞[(22.69±3.21)%比(10.97±1.52)%]、晚期凋亡细胞[(30.41±3.97)%比(7.40±1.71)%]、坏死细胞[(5.53±0.74)%比(3.44±0.42)%]的比率均明显高于未转染组细胞(=5.715、9.220、4.254,P<0.05).转染处理后细胞中Wnt3a蛋白相对表达量明显低于未转染组水平(0.39±0.07比0.92±0.13,t=6.217,P<0.05).结论 lncRNA HOTAIR在胃癌中表达上调,而抑制HOTAIR表达可以通过下调WntWnt3a蛋白表达阻遏Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的激活进而促进胃癌细胞凋亡.