孕激素受体A型原核表达及单克隆抗体制备

目的:制备孕激素受体A型单克隆抗体,为后期应用到免疫组化实验提供支持。方法:选择无缝克隆的方法将目的基因与载体连接到一起,通过诱导表达收集蛋白,经过免疫后细胞融合获得单克隆抗体。将该单克隆抗体经免疫组化验证。结果:将融合后筛选的阳性细胞制备获得的单克隆抗体7C7经免疫组化验证,发现其在乳腺癌、子宫肌瘤组织中呈现阳性,在直肠癌组织、平滑肌组织中呈现阴性,符合目的抗体的要求。结论:该方法获得的孕激素受体A型单克隆抗体较常规方法周期短,获得的抗体在不同组织间结果符合预判,对后期研究区别PR-A、PR-B,临床推广具有重要意义。

细胞代谢扰动表征技术的研究进展

细胞物质代谢、能量生成和信息传递构成了整体生命运行的基本密码。因此生命代谢的掌控也就体现为对胞内代谢物差异性的实时监控、原位分析和定向干扰。以过往研究者在胞内代谢物分析过程中所采用的技术方法为出发点,简要回顾了传统‘固化’技术方法在胞内代谢扰动分析中所取得的研究进展,重点阐述了基于遗传编码的生物传感器原件在胞内代谢物扰动所取得的最新研究进展和应用中的技术优势。概述了不同类型胞内代谢物检测技术在细胞代谢水平差异性分析方面所存在的限制因素和技术缺陷。展望了不同检测手段在未来医学诊断、药物开发和活细胞原位分析中的应用潜力以及这些检测技术对未来生命健康大数据库建立和智能医疗发展中的应用价值。

细胞角蛋白19单克隆抗体的制备及组织芯片法评价

目的利用组织芯片法对自制细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)单克隆抗体进行临床评价。方法通过CK19抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合及筛选,免疫组化初筛获得CK19单克隆抗体细胞株。进一步制备腹水并纯化CK19抗体,对该抗体及商品化对照抗体进行组织芯片法评价。结果经过细胞融合共筛出1株较好的杂交瘤细胞株2H5,纯化后的抗体纯度达95%,SDS-PAGE分析可见相对分子质量约55 000和25 000的重链和轻链条带,该抗体与对照抗体经组织芯片法评价,两者相关系数r=0. 994 7。结论经组织芯片法评价,自制CK19单克隆抗体与对照抗体相比无明显差异,为后续开展大量临床组织研究提供了依据。