基于Wnt/β-catenin信号通路探讨益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑神经元的保护作用

【目的】观察益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑神经元的保护作用及机制。【方法】将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、益气活血组,每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠采用线栓法制备急性期缺血性脑中风模型。尼莫地平组大鼠给予腹腔注射0.5 mg/kg尼莫地平注射液,益气活血组大鼠给予腹腔注射1.8 mL/kg黄芪注射液和7.2 mg/kg川芎嗪注射液,假手术组和模型组大鼠给予腹腔注射等体积生理盐水,每天1次,连续4 d。治疗前和治疗后12、24、48、72、96 h评估Longa神经功能评分。给药结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察脑神经元损伤情况;脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测脑神经元凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测脑组织半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测脑组织白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测脑组织Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白的表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,脑组织神经元凋亡率升高,脑组织IL-6、TNF-α、MDA水平升高,GSH-Px、SOD活性降低,Caspase-3、Bax mRNA表达水平升高,Bcl-2 mRNA表达水平降低、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低,糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化水平升高(均P<0.05),脑组织神经元可见明显损伤。与模型组比较,益气活血组大鼠神经功能缺损评分降低,脑组织神经元凋亡率降低,脑组织IL-6、TNF-α、MDA水平降低,GSHPx、SOD活性升高,Caspase-3、Bax m RNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达水平升高,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高,GSK-3β磷酸化水平降低(均P<0.05),脑组织神经元损伤得到改善。【结论】益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑神经元的保护作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

益气活血法通过抑制细胞焦亡减轻缺血性脑中风急性期大鼠脑组织炎症

【目的】探讨益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑组织炎症的作用及机制。【方法】将47只SD大鼠留取9只作为假手术组,其余大鼠建造缺血性脑中风急性期模型。将造模成功的30只大鼠随机分为中药低、高剂量组及模型组,每组10只。中药低、高剂量组灌胃益气活血方汤药4.4、8.8 g/kg,模型组、假手术组灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续给药15 d。给药第3、5、7天,测定大鼠神经功能变化;给药结束后,以2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠脑梗死情况,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠脑组织匀浆中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-18含量,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学表现,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠脑缺血半暗带组织嘌呤能受体P2X7(P2RX7)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Caspase-11、消皮素D(GSDMD)表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、脑梗死率,脑组织IL-1β、TNF-α、IL-18水平,脑缺血半暗带组织P2RX7、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,中药低、高剂量组大鼠神经功能评分、脑梗死率,脑组织IL-1β、TNF-α、IL-18水平,脑缺血半暗带组织P2RX7、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD蛋白相对表达量降低(P<0.05)。模型组大鼠脑组织大面积炎症渗出,水肿明显,细胞崩解,神经元空泡变性或呈点状坏死,而中药低、高剂量组脑组织炎症渗出、水肿明显减轻,细胞形态、神经元空泡变性改善。【结论】益气活血法可通过抑制细胞焦亡,减轻缺血性脑中风急性期大鼠脑组织炎症。