肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中表达状况的研究

目的 探讨肝癌消减片段P0 2在消化系恶性肿瘤如肝癌、食管癌、胃癌、结肠癌中的表达情况。方法 从肝癌组织中抽取RNA ,进行RT PCR ,然后对PCR产物进行探针标记 ,用此标记的探针对肝癌、食管癌、胃癌、结肠癌及其相应的正常组织进行检测。结果 肝癌消减片段P0 2不仅在肝癌及肝硬化组织中存在着差异表达 ,而且在食管癌、胃癌、结肠癌及其相应的正常组织中也存在着差异表达。结论 肝癌消减片段P0 2在消化系恶性肿瘤如肝癌、食管癌、胃癌、结肠癌中均呈差异表达 ,提示肝癌消减片段P0 2与消化系恶性肿瘤的发生密切相关 。

体外诱导人脐血间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的研究

目的 探讨人脐血间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝细胞样细胞,并探索其定向诱导分化为肝细胞样细胞的分化机制。方法 无菌条件下采集正常产妇脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血MNC,进而采用贴壁培养法获得MSC,流式细胞仪检测其表面际志。分别用HGF、FGF4、俩者联合、无生长因子四种处理因素,及含2％FBS的DMEM,1×ITS讲行诱导培养,并于诱导前及诱导后的第7、14、21、28天留取细胞,RT～PCR法检测AFP、白蛋白及C-met FGFR2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测AFP、白蛋白、抗肝细胞抗体和CK18的表达,PAS法进行糖原染色,分析是否诱导出肝细胞样细胞。结果 MSC强表达CD29、CD44,不表达CD34。诱导后7,21天分别检测出AFP,白蛋白mRNA及蛋白的表达,28天检测出CK18、抗肝细胞抗体的表达,21天、28天均可检测到糖原染色阳性细胞,随诱导时间的延长C-met,FGFR2 mRNA表达增高,HGF+FGF4诱导组肝系细胞标志阳性率均高于单独生长因子诱导组(P<0.05);单独生长因子诱导组间无明显差异(P>0.05)。无生长因子诱导组在以上时间点均未检测到上述指标。结论HGF、FGF4均能诱导人脐血MSC分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞,且二者在一定程度上有联合作用。生长因子与其相幢受体之间,可能存在正反馈调节机制。

大鼠移植骨髓细胞向肝细胞转化的实验研究

目的 探讨体内骨髓细胞向肝细胞转化的可行性。方法 将雌性 SD大鼠随机分为3组,每组15只。①R+BMT(全身照射+骨髓移植);②2-AAF+R+BMT:③2-AAF+PH(部分肝切)+BMT。进行交叉性别骨髓细胞移植,雄性骨髓植入雌性受体,分别于第5、10、20天处死雌鼠。以雄性性别决定基因sry作为细胞标记,用原位杂交和FISH作为检测方法对骨髓细胞的肝细胞转化进行分析。结果 PCR移植效果初步分析可见,R+ BMT组11例中有10例PCR阳性;2AAF+PH+BMT组11例中有7例阳性,2AAM+R+BMT组10例中有6例阳性。sry原位杂交染色发现,第5天各组雌性受体肝索中均未见sry阳性的肝细胞。第10天R+BMT组可见1例sry阳性的细胞位于肝细胞索,FISH染色可见这一细胞白蛋白mRNA阳性。第20天各组PCR阳性各例均可在肝索中检测到sry阳性的细胞。FICH染色可见白蛋白mRNA阳性。经统计学分析第20天各组sry阳性细胞数无明显差异。结论 在R+BMT、2-AAF+PH+BMT和2-AAF+R+BMT模型中移植的骨髓细胞均可以植入肝脏,并存在于肝细胞索。植入肝索的骨髓细胞最早可见于移植后第10天,并发生转分化,表达白蛋白mRNA。不经过全身照射的2-AAF+PH+BMT组,移植的骨髓细胞也可以进入肝脏发生转分化,因此全身照射并不一定是移植骨髓细胞活化、植入和转化的必须条件。

人骨髓多能成体祖细胞的分离培养及向肝细胞样细胞分化的研究

目的 培养人骨髓多能成体祖细胞(multipotent adult progenitor cells,MAPCs)并研究其向肝细胞样细胞的分化。方法应用体外细胞培养技术将人骨髓中的单个核细胞从无血液疾病患者的髂嵴骨髓中分离出来后,用磁式细胞分离仪分离富集骨髓单个核细胞中的CD45^-HLA-DR^-细胞,把其接种于DMEM培养基中进行培养,到达对数生长期时,加入成纤维细胞生长因子-4(fibrob-last growth factor-4,FGF-4)并改用维持液来诱导其向肝细胞样细胞分化,最后用免疫细胞化学方法检测其分化情况。结果 成功地进行了人骨髓MAPCs的原代和传代培养,并在体外成功地把其诱导分化为具有肝细胞表型特征的细胞。结论 FGF-4可诱导人MAPCs向具有肝细胞表型特征的细胞发生分化。

无痛胃镜在上消化道异物取出治疗中的应用

目的探讨无痛胃镜在上消化道异物取出治疗中的应用价值和安全性。方法应用丙泊酚与芬太尼联合静脉麻醉后经电子纤维胃镜为31例上消化道异物患者行异物取出治疗。结果 31例患者中食管异物17例,胃内异物14例,均成功取出异物,未出现严重并发症。结论应用无痛胃镜取出上消化道异物安全、有效,术前需注意排除麻醉的禁忌证,术中密切观察,确保安全。

HGF和FGF4体外诱导人骨髓CD45^-CD117^-细胞向肝细胞分化的研究

目的:探讨在HGF、FGF4诱导下人骨髓CD45-CD117-细胞能否向肝细胞分化,并探讨两种生长因子在诱导分化中可能的作用机制. 方法:骨髓来自4名4-40岁健康志愿者的胸骨或髂骨.用两步磁式分离法分离出CD45-CD117-细胞,分别用含有FGF4,HGF,HGF+FGF4或不加生长因子的DMEM培养基进行培养,相应地分为A,B,C,D四组.分别于新分离时和培养7 d,14 d,21 d,28 d时留细胞.备作免疫细胞化学检测AFP,CK18,白蛋白,PAS染色检测糖原等肝系细胞的特征型标志,RT-PCR检测C、D组细胞c-met(HGF受体)和FGFR2(FGF4R)mRNA表达情况. 结果:A,B,C三组加生长因子诱导培养后的细胞均可检测到肝系细胞的标志,D组细胞不加生长因子培养后没有检测到肝系细胞的标志.c-met和FGFR2mRNA在新分离的和D组培养7 d,14 d时的细胞均有较弱的表达,而在C组细胞诱导培养7 d,14 d时表达升高. 结论:HGF和FGF4可诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞样细胞分化.生长因子诱导分化的作用可能通过与其受体之间的正反馈调节.

质子泵抑制剂发生小肠细菌过生长的临床研究

目的探讨长期口服质子泵抑制剂(proton pump inhibitors,PPI)引发小肠细菌过生长(small intestinal bacterial overgrowth,SIBO)的风险及干预措施。方法选取77例服用PPI为观察组,41例健康志愿者作为对照组,采用前瞻性对照性研究,采用乳果糖氢呼气试验(lactulose hydrogen breath test,LHBT)检测SIBO。SIBO阳性者给予停用PPI或不停用PPI加服左氧氟沙星口服(0.2 g,tid,1周),两种干预均在4周时再次复查SIBO。结果研究开始前和8周后PPI组和对照组SIBO阳性率差异无统计学意义(P>0.05),24周后PPI组SIBO阳性率明显高于对照组(P<0.05)。PPI组随着用药时间的延迟,SIBO发生率升高,0、8、24周间差异有统计学意义(P<0.05)。停药和服用抗菌药物SIBO转阴率差异无统计学意义(P>0.05)。结论服用PPI可增加小肠细菌过生长的风险,且这种风险随服药时间延长而升高,停药或加用抗菌药物可以使SIBO消失。

肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸抑瘤作用的体外实验研究

目的 :通过全硫代修饰的肝细胞癌差异表达基因P 0 2反义寡核苷酸对人肝癌细胞系SMMC 772 1增殖活性的影响 ,探讨P 0 2基因的功能。方法 :以脂质体为载体 ,采用MTT法、RT PCR、流式细胞术检测P 0 2AS ODN(antisenseoligonucleotide)对SMMC 772 1细胞生长、增殖、细胞周期的作用。结果 :脂质体介导的P 0 2基因反义寡核苷酸可抑制SMMC 772 1增殖 ,RT PCR结果显示P 0 2基因的扩增条带明显减弱 ,流式细胞术显示G1期细胞增多 ,M期及S期细胞数减少。结论 :脂质体介导的AS ODN可抑制SMMC 772 1的恶性表型 ,证实P 0

骨髓间充质干细胞多能性的研究进展

Digestive Institute, Zhengzhou University, No. 2, Jingha road, Zhengzhou

脂质体瘤苗抗小鼠H_(22)腹水型肝癌作用研究

目的观察脂质体瘤苗的抗癌作用,寻找有效的抗肿瘤疫苗。方法制备H22肝癌细胞的脂质体瘤苗,将该瘤苗通过腹腔接种,免疫荷瘤的BalB/c小鼠(LAg组),同时设单用抗原免疫组(Ag组)和DHanks组作为对照,比较各组小鼠的生存期,并用MTT法检测外周血和脾淋巴细胞对H22肝癌细胞的体外杀伤作用。结果LAg免疫的BalB/c鼠的平均生存期及脾和外周血淋巴细胞毒活性均高于Ag组及DHanks组(P<0.05),Ag组及DHanks组两者之间差异无显著性(P>0.05)。结论单用H22抗原不能诱导有效的抗肝癌免疫反应,用脂质体包裹后,其抗肝癌作用可明显增强,脂质体瘤苗有潜在的临床应用前景。

肝脏干细胞研究及其应用前景

一、干细胞的一般概念 干细胞(stem cell,SC)被认为是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞,能产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞,同时还能分化为祖细胞.

临床医学研究生教育现状分析及神经科实习改革实践

临床医学研究生教育为我国医学发展输送了大量高层次专门人才,但现阶段研究生的培养存在着重临床轻科研、发表论文重数量轻质量、研究生扩招和质量下降的问题,需要我们进一步分析现状,找出更为科学的管理办法,在神经科实习教学中进行有针对性的改革实践,进一步推进我国临床研究生的培养制度建设。

稳定表达HBx基因的HepG2细胞对顺铂敏感性的变化及其机制研究

目的 探讨乙肝病毒x基因(HBx)对肝癌细胞株HepG2化疗敏感性的影响及其机制。方法 1.构建HBx的真核表达载体;2.脂质体法转染HepG2,G418筛选得到稳定表达HBx-ORF的阳性细胞克隆;3.Western blot法检测转染前后磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的表达变化;4.MTT法检测转染前后HepG2对顺铂的反应,以及用PD98059特异性阻断ERK1/2激活通路后HBx+HepG2对顺铂敏感性的变化。结果 1.稳定表达HBx-ORF的HepG2中p-ERK1/2的表达明显强于阴性细胞;2.稳定表达HBx-ORF的HepG2在2μg/ml顺铂作用24小时后,顺铂对其抑制率为19.45％±2.50,明显低于阴性组的33.15％±2.85和转染空质粒组的30.79％±2.66(P<0.05);用PD98059阻断阳性细胞中ERK1/2的激活之后,相同剂量,时间作用下,对HBx+HepG2的抑制率上升至32.28％±4.22,明显高于阻断前(P<0.05)。结论 HBx通过ERK通路介导肝癌细胞的抗化疗反应,ERK通路有可能成为乙肝后肝癌辅助治疗的靶点。

肝脏干细胞研究和应用展望

慢性乙型肝炎是我国的一种常见疾病,而且随着社会经济的发展和生活水平的提高,脂肪肝、酒精性肝炎等患者也越来越多.这些疾病不断发展,逐渐演变为肝纤维化和肝硬化,最终导致肝功能衰竭,给人们的生命带来严重的威胁.