脐血间充质干细胞体外定向诱导心肌样细胞超微结构特征研究

目的:研究脐血间充质干细胞(umbilicalcordbloodstemcells)经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导在体外定向分化为心肌样细胞超微结构特征,为心肌样细胞鉴定提供依据。方法:取脐静脉血50mL、分离并培养间充质干细胞,用5-aza定向诱导向心肌样细胞分化。相差显微镜、透射电镜观察心肌样细胞形态学变化及超微结构特征。结果:5-aza诱导后,部分细胞体积增大,呈“棒状”或“珠状”结构,有肌管样结构形成,透射电镜下有肌丝、心房颗粒及线粒体等心肌样细胞超微结构形成。结论:经5-aza诱导脐血间充质干细胞具有心肌样细胞超微结构特征。

5-氮胞苷对培养兔骨髓基质细胞心房利钠肽表达的影响

目的研究5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)对体外培养兔骨髓基质细胞中心肌特异性心房利钠肽(atrialnatriureticpolypeptide,ANP)表达的影响,探讨骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的条件。方法体外分离培养兔骨髓基质细胞用不同浓度5-aza诱导培养,以RT-PCR方法测定诱导前后ANP的表达。结果正常培养兔骨髓基质细胞不表达ANP。经5-aza诱导并继续培养24h后,骨髓基质细胞表达ANP,在一定时间、浓度范围内ANP含量逐渐增加。结论5-aza诱导体外培养兔骨髓基质细胞表达心肌特异性ANP,与诱导时间及浓度呈正相关,提示可诱导兔骨髓基质细胞向心肌样细胞分化。

骨髓间充质干细胞体外定向诱导心肌样细胞的实验研究

目的研究兔骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cell,MSC)经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导在体外定向分化为心肌样细胞形态学及分子生物学特征,为心肌样细胞鉴定提供依据。方法取兔髂骨骨髓,分离并培养骨髓间充质干细胞,用5-氮杂胞苷定向诱导向心肌样细胞分化。相差显微镜、透射电镜观察心肌样细胞形态学变化及超微结构特征,RT-PCR检测心房利钠肽、受磷蛋白、β-肌球蛋白重链表达。结果5-氮杂胞苷诱导后,部分细胞体积增大,呈“棒状”或“珠状”结构,有肌管样结构形成,透射电镜下有肌丝、心房颗粒及线粒体等心肌样细胞超微结构形成,RT-PCR检测显示有心房利钠肽、受磷蛋白、β-肌球蛋白重链表达。结论经5-氮杂胞苷诱导骨髓间充质干细胞体外可分化为心肌样细胞。

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后细胞凋亡的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心肌细胞凋亡的影响,探讨干细胞移植改善心功能机制。方法:实验于2004-09/2005-10在郧阳医学院附属十堰市太和医院生命科学研究所完成。①21只日本大耳白兔采用随机数字法分为正常对照组、心肌梗死组及干细胞移植组,每组7只。②心肌梗死模型制作3周后,心肌梗死组及干细胞移植组分别在梗死周边区域注射100μL细胞培养基或干细胞悬液,对照组不处理。③4周后心脏超声检测心功能、左室收缩末期内径、左室舒张末期内径等评价心室重塑。处死动物后经流式细胞仪检查梗死区域细胞凋亡情况。结果:①各组兔心脏超声检测结果:与心肌梗死组相比,干细胞移植治疗后,左心室射血分数[(56.27±1.73),(69.41±3.19)%,P<0.001]、左室收缩末期内径[(10.25±0.89),(8.13±0.79)mm,P<0.001]、左室舒张末期内径[(13.82±1.02),(11.24±1.21)mm,P<0.001]、室壁运动明显改善。②各组细胞凋亡检查结果:干细胞移植后,细胞凋亡显著降低[(14.00±0.31)%,(4.30±0.57)%,P<0.001]。结论:干细胞移植可抑制细胞凋亡,改善心功能,预防心室重塑,具有改善梗死后心脏功能的作用。

曲尼司特对心肌梗死后心肌间质纤维化的影响

目的探讨曲尼司特对兔心肌梗死后心肌间质纤维化干预作用。方法结扎左前降支制作兔心肌梗死模型,分实验组和对照组。3周后经胃管分别给予曲尼司特及安慰剂1月,心脏彩超评价心功能并检测血清转化生长因子(transform ing growth factor,TGF-β1),I、III型胶原浓度及组织羟脯胺酸含量。结果实验组治疗前后心功能、心腔内径、室壁厚度明显改善,血清TGF-β1,I、III型胶原浓度及羟脯胺酸含量较对照组明显下降。结论曲尼司特可有效拮抗心肌梗死后心肌间质纤维化,预防心室重构。

心血管疾病与心肌微血管病变关系研究现状

心血管疾病与心肌微血管病变关系密切,现对心肌微血管病变原因、机制及防治进展进行探讨,以提高对心肌微血管病变的认识水平。

骨髓间(充)质干细胞体外定向诱导心肌样细胞超微结构特征研究

目的:研究兔骨髓间(充)质干细胞(mesenehymal stem cell．MSC)经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5- aza)诱导在体外定向分化的心肌样细胞超微结构特征。方法:取兔髂骨骨髓,分离并培养骨髓MSC,用5-aza定向 诱导向心肌样细胞分化。以相差显微镜、透射电镜观察心肌样细胞形态学变化及超微结构特征。结果:5-aza诱导 后,部分细胞体积增大,呈“捧状”或“珠状”结构,有肌管样结构形成,透射电镜下见有肌丝、心房颗粒及线粒体 等心肌样细胞超微等结构。结论:经5-氮杂胞苷诱导分化的骨髓间(充)质干细胞具有心肌样细胞超微结构特征。

骨髓间充质干细胞体外定向诱导内皮祖细胞的实验研究

目的:研究兔骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cell,MSC)在体外定向诱导分化为内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的状况。方法:取兔髂骨骨髓,经密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞,实验组细胞在内皮细胞生长添加剂、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子等诱导条件下定向分化为内皮祖细胞。对照组不干预,继续培养。结果:实验组细胞集落接近融合时形态呈现“鹅卵石”样或“铺路石”样外观,流式细胞仪检测发现实验组细胞较对照组高度表达CD133、CD34(P<0．05)。结论:体外诱导可使骨髓间充质干细胞分化为内皮祖细胞,并有效扩增。

单克隆抗体CD_(133)在内皮祖细胞表达的实验研究

目的研究CD133在内皮祖细胞(endothelialprogenitorcell,EPC)表面表达,为内皮祖细胞的鉴定提供依据。方法取兔髂骨骨髓,经密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞(mensenchymalstemcell,MSC),在血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子等诱导条件下定向向内皮祖细胞分化,流式细胞仪检测不同时间内皮祖细胞CD133表达。结果定向诱导分化细胞形态学呈现“鹅卵石”样或“铺路石”样外观,流式细胞仪检测发现细胞表达CD133,并随时间推移表达逐渐下降。结论内皮祖细胞高表达CD133,与培养时间密切相关。

心肌样细胞和内皮祖细胞联合移植对兔心肌梗死面积的影响

目的:评价心肌样细胞和内皮祖细胞联合移植对心肌梗死面积影响是否优于单项细胞移植。方法:骨髓穿刺提取、分离、培养骨髓间充质干细胞(mensenchymal stemcell,MSC),向心肌样细胞和内皮祖细胞定向诱导分化。心肌梗死模型制作成功2周后沿梗死周边区域注射100μl培养基或心肌样细胞、内皮祖细胞及二者混合悬液各3×108/100μl。实验前、后4周行心脏超声检查心功能,TTC染色评价梗死面积。结果:①诱导后MSC呈现心肌样细胞超微结构特征,PCR检查表达心肌收缩、舒张特异性蛋白肌球蛋白重链、受磷蛋白以及心房颗粒;内皮祖细胞呈"铺路石"外观,高表达CD133并随时间推移表达逐步下降。②与对照组[(35.17±1.76)%]相比,细胞移植能降低梗死面积(均P<0.05);心肌样细胞组[(28.61±1.24)%]、内皮祖细胞组[(29.73±2.11)%]与联合细胞移植组[(22.82±3.12)%]比较,均P<0.05。结论:MSC可定向分化心肌样细胞和内皮祖细胞,两者联合细胞移植在改善心肌缺血及心肌细胞坏死,降低梗死面积方面效果优于单项细胞移植。

心肌内注射腺病毒介导血管内皮生长因子基因的血管生成实验研究

目的 探讨血管内皮生长因子 16 5 (VEGF165)基因的血管生成作用。 方法 在猪冠状动脉回旋支起始处放置Ameroid闭合器 ,制备慢性心肌缺血模型 ,2 8d时行选择性冠状动脉造影 ,观察回旋支狭窄程度。开胸 ,治疗组 ( 6只 )在缺血区心肌内多点注射含人VEGF165基因的重组腺病毒载体 (Ad VEGF165) ;对照组 ( 6只 )在缺血区心肌内多点注射含细菌半乳糖苷酶基因的重组腺病毒载体 (Ad β gal)。转染重组腺病毒载体 2 8d时重复行冠状动脉造影后 ,处死猪 ,取缺血区心肌 ,做组织学检查 ;应用酶标法检测血浆中VEGF浓度 ,采用Rentrop分级、缺血区心肌侧支血管积分和心肌碱性磷酸酶染色法评价血管生成作用。 结果 与对照组比较 ,基因转染 3d时治疗组血浆VEGF增高〔( 114 6± 5 4 ) pg/ml对 ( 6 0 3± 1 8) pg/ml,P <0 0 0 1〕 ,7d时血浆VEGF为 ( 12 8 4± 3 0 ) pg/ml对 ( 70 9± 5 3) pg/ml,P <0 0 0 1,14d后恢复到基线水平。与对照组比较 ,基因转染 2 8d时治疗组Rentrop分级增高 ( 2 8± 0 4对 1 3± 0 8,P <0 0 0 1) ,侧支血管积分增高 ( 4 8± 0 8对 1 7± 0 8,P<0 0 0 1) ,缺血区毛细血管密度增高 ( 2 10± 19对 6 2± 6 ,P <0 0 0 1)。 结论 心肌转染Ad VEGF165后 ,缺血心肌表达VEGF ,产生?

细胞联合移植干预兔心肌梗死的实验研究

冠心病心肌梗死存在心肌细胞缺血坏死，心肌自身有少量心肌祖细胞，可分化心肌细胞替代坏死心肌，但其数量极少且随年龄增长，增殖功能日益下降，不足以改善心功能。静脉溶栓、冠脉介入治疗存在诸多不足，研究显示骨髓间充质干细胞在心肌微环境中可分化为心肌细胞和内皮细胞，参与心肌再生、血管新生。移植细胞以心肌样细胞或内皮祖细胞移植较多，针对心肌缺血和坏死某一方面，难以同时改善心肌缺血和坏死，对心功能改善作用有限。体外将MSC定向分化心肌样和内皮祖细胞并扩增，然后联合移植以期同时改善心肌细胞缺血及坏死，观察其对心肌梗死疗效是否优于单一细胞移植。

HSP60口服耐受对小鼠脾细胞中调节性T细胞的影响

HSP60特异性免疫反应在许多炎症反应中起重要作用。近来口服耐受（oral tolerance）已成功用于许多自身免疫性疾病的实验研究和临床治疗。但能否通过口服诱导特异性调节性T细胞（Tr），目前国内外研究甚少。本研究通过HSP60口服耐受，观察其对小鼠脾细胞中Tr细胞的影响。