脐血间充质干细胞体外定向诱导心肌样细胞超微结构特征研究

目的:研究脐血间充质干细胞(umbilicalcordbloodstemcells)经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导在体外定向分化为心肌样细胞超微结构特征,为心肌样细胞鉴定提供依据。方法:取脐静脉血50mL、分离并培养间充质干细胞,用5-aza定向诱导向心肌样细胞分化。相差显微镜、透射电镜观察心肌样细胞形态学变化及超微结构特征。结果:5-aza诱导后,部分细胞体积增大,呈“棒状”或“珠状”结构,有肌管样结构形成,透射电镜下有肌丝、心房颗粒及线粒体等心肌样细胞超微结构形成。结论:经5-aza诱导脐血间充质干细胞具有心肌样细胞超微结构特征。

单克隆抗体CD_(133)在内皮祖细胞表达的实验研究

目的研究CD133在内皮祖细胞(endothelialprogenitorcell,EPC)表面表达,为内皮祖细胞的鉴定提供依据。方法取兔髂骨骨髓,经密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞(mensenchymalstemcell,MSC),在血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子等诱导条件下定向向内皮祖细胞分化,流式细胞仪检测不同时间内皮祖细胞CD133表达。结果定向诱导分化细胞形态学呈现“鹅卵石”样或“铺路石”样外观,流式细胞仪检测发现细胞表达CD133,并随时间推移表达逐渐下降。结论内皮祖细胞高表达CD133,与培养时间密切相关。

骨髓间充质干细胞体外定向诱导心肌样细胞的实验研究

目的研究兔骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cell,MSC)经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导在体外定向分化为心肌样细胞形态学及分子生物学特征,为心肌样细胞鉴定提供依据。方法取兔髂骨骨髓,分离并培养骨髓间充质干细胞,用5-氮杂胞苷定向诱导向心肌样细胞分化。相差显微镜、透射电镜观察心肌样细胞形态学变化及超微结构特征,RT-PCR检测心房利钠肽、受磷蛋白、β-肌球蛋白重链表达。结果5-氮杂胞苷诱导后,部分细胞体积增大,呈“棒状”或“珠状”结构,有肌管样结构形成,透射电镜下有肌丝、心房颗粒及线粒体等心肌样细胞超微结构形成,RT-PCR检测显示有心房利钠肽、受磷蛋白、β-肌球蛋白重链表达。结论经5-氮杂胞苷诱导骨髓间充质干细胞体外可分化为心肌样细胞。

骨髓间(充)质干细胞体外定向诱导心肌样细胞超微结构特征研究

目的:研究兔骨髓间(充)质干细胞(mesenehymal stem cell．MSC)经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5- aza)诱导在体外定向分化的心肌样细胞超微结构特征。方法:取兔髂骨骨髓,分离并培养骨髓MSC,用5-aza定向 诱导向心肌样细胞分化。以相差显微镜、透射电镜观察心肌样细胞形态学变化及超微结构特征。结果:5-aza诱导 后,部分细胞体积增大,呈“捧状”或“珠状”结构,有肌管样结构形成,透射电镜下见有肌丝、心房颗粒及线粒体 等心肌样细胞超微等结构。结论:经5-氮杂胞苷诱导分化的骨髓间(充)质干细胞具有心肌样细胞超微结构特征。

p27kip1腺病毒重组体对人食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

背景:p27kip1是新近发现的一种抑癌基因,研究表明p27kip1基因转移能显著抑制食管癌和胃癌细胞生长,该基因疗法在体内实验中是否同样有效值得进一步研究。目的:研究p27kip1腺病毒重组体对人食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:将携带人p27kip1基因的重组腺病毒载体导入人食管癌裸鼠移植瘤中,测定肿瘤生长抑制率,免疫组化方法检测移植瘤中p27kip1和生存素(survivin)的表达。结果:经p27kip1基因治疗的裸鼠,肿瘤生长抑制率达64.1%,移植瘤中p27kip1呈高表达,生存素呈低表达。结论:p27kip1腺病毒重组体能显著抑制人食管癌裸鼠移植瘤的生长,上调p27kip1和下调生存素的表达可能是其重要作用机制。

5-氮胞苷对培养兔骨髓基质细胞心房利钠肽表达的影响

目的研究5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)对体外培养兔骨髓基质细胞中心肌特异性心房利钠肽(atrialnatriureticpolypeptide,ANP)表达的影响,探讨骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的条件。方法体外分离培养兔骨髓基质细胞用不同浓度5-aza诱导培养,以RT-PCR方法测定诱导前后ANP的表达。结果正常培养兔骨髓基质细胞不表达ANP。经5-aza诱导并继续培养24h后,骨髓基质细胞表达ANP,在一定时间、浓度范围内ANP含量逐渐增加。结论5-aza诱导体外培养兔骨髓基质细胞表达心肌特异性ANP,与诱导时间及浓度呈正相关,提示可诱导兔骨髓基质细胞向心肌样细胞分化。

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后细胞凋亡的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心肌细胞凋亡的影响,探讨干细胞移植改善心功能机制。方法:实验于2004-09/2005-10在郧阳医学院附属十堰市太和医院生命科学研究所完成。①21只日本大耳白兔采用随机数字法分为正常对照组、心肌梗死组及干细胞移植组,每组7只。②心肌梗死模型制作3周后,心肌梗死组及干细胞移植组分别在梗死周边区域注射100μL细胞培养基或干细胞悬液,对照组不处理。③4周后心脏超声检测心功能、左室收缩末期内径、左室舒张末期内径等评价心室重塑。处死动物后经流式细胞仪检查梗死区域细胞凋亡情况。结果:①各组兔心脏超声检测结果:与心肌梗死组相比,干细胞移植治疗后,左心室射血分数[(56.27±1.73),(69.41±3.19)%,P<0.001]、左室收缩末期内径[(10.25±0.89),(8.13±0.79)mm,P<0.001]、左室舒张末期内径[(13.82±1.02),(11.24±1.21)mm,P<0.001]、室壁运动明显改善。②各组细胞凋亡检查结果:干细胞移植后,细胞凋亡显著降低[(14.00±0.31)%,(4.30±0.57)%,P<0.001]。结论:干细胞移植可抑制细胞凋亡,改善心功能,预防心室重塑,具有改善梗死后心脏功能的作用。

腺病毒介导反义AT_1R转染对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 观察腺病毒介导反义AT1基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的影响。方法 用定向克隆和同源重组方法构建携带人反义AT1基因的复制 -缺陷型重组腺病毒 (Ad/CMV·ahAT1) ,转染体外培养的VSMCs,用RT PCR半定量法和免疫组化法检测AT1R的表达 ,用3 H TdR掺入实验和流式细胞仪检测VSMCs的DNA合成和增殖指数。结果 与对照组相比 ,转染Ad/CMV·ahAT1后 4 8h的VSMCs,AT1R的mRNA表达低 5 0 % ,蛋白表达也显著低于对照组 (P <0 0 1)。给予AngⅡ刺激的VSMCs的3 H TdR掺入量和增殖指数明显高于空白对照组 (分别为P <0 0 5和P <0 0 1) ;转染Ad/CMV·ahAT1组3 H TdR掺入量和增殖指数则显著降低 (与DMEM组比P <0 0 5 ,与AngⅡ对照组比P <0 0 1)。 结论 腺病毒介导的反义AT1R转染 ,通过抑制AT1R的表达 。

腺病毒介导的p27kip1基因转移对食管癌细胞周期的影响

目的 用腺病毒为载体 ,研究p2 7kip1基因转移对食管癌细胞周期的影响。方法 将携带p2 7kip1基因的重组腺病毒转染食管癌细胞株Eca970 6,用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定细胞生长抑制效应 ,免疫细胞化学法检测p2 7kip1表达 ,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果 p2 7kip1基因转染食管癌细胞株Eca970 6后 ,p2 7kip1表达增强 ,细胞生长显著受抑制 ,GO/G1期细胞比例增加 ,S期、G2 /M期比例降低。结论 腺病毒介导的p2 7kip1基因转移能显著抑制食管癌细胞的生长 ,使细胞产生G1期阻滞。

复发性尿路感染患者病原菌和淋巴细胞Fas表达以及T淋巴细胞亚群的变化分析

复发性尿路感染（RUTI）尤其是不伴有常见易患因素者其发病机制常不明，临床诊治十分困难。我们对15例复发性尿路感染患者的尿培养、情感障碍状况、淋巴细胞Fas表达与凋亡以及T淋巴细胞亚群的变化进行观察，以探讨复发性尿路感染可能的发病机制。