下调lncRNA-H19表达促进人瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡和自噬

目的探讨下调长链非编码RNA-H19(lncRNA-H19)表达对人瘢痕疙瘩成纤维细胞系凋亡和自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法取人类瘢痕成纤维细胞系(KFs)及健康人皮肤成纤维细胞系(HDFs),将KF细胞感染lncRNA-H19F低表达腺病毒(si-lncRNA-H19)及不含si-lncRNA-H19的空病毒载体(si-eGFP)。分为HDFs组、KF组、si-lncRNA-H19+KFs组、si-eGFP+KFs组;KFs细胞共感染si-lncRNA与mTOR过表达腺病毒(Ad-mTOR)及空载体(Ad-eGFP-m),分为KFs组、si-lncRNA-H19+Ad-mTOR组、si-eGFP+Ad-mTOR组、si-lncRNA-H19+Ad-eGFP组、si-eGFP+Ad-eGFP组。RT-qPCR检测lncRNA-H19表达;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;透射电镜及吖啶橙(Ao)荧光染色观察自噬形成情况;免疫组化法检测自噬通路-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)阳性表达;Western blot检测凋亡及自噬相关蛋白表达。结果与HDFs组比较,KFs组细胞lncRNA-H19表达及mTOR活性升高,自噬泡数目、凋亡与自噬相关蛋白表达降低(P<0.05);下调KFs细胞中的lncRNA-H19后,KFs细胞mTOR活性降低,凋亡及自噬活性升高(P<0.05)。下调lncRNA-H19的同时,上调mTOR,KFs细胞的自噬及凋亡活性较单独下调lncRNA-H19时升高(P<0.05)。结论下调lncRNA-H19表达,可能通过抑制mTOR途径活化,促进KFs细胞自噬及凋亡。