环境清洁消毒方式的转变对ICU医院感染率的影响

目的探讨环境清洁消毒方式的改变对重症监护病房(ICU)医院感染率的影响,为探索预防和降低ICU医院感染发生率的方式提供参考。方法2016年1月1日-2016年10月31日和2017年1月1日-2017年10月31日入住黄石市中心医院ICU的患者分别做为原消毒方式组(含氯消毒剂擦拭)和新消毒方式组(一次性消毒纸擦拭),对比两组ICU卫生学采样合格率、感染率等相关指标。结果原消毒方式组与新消毒方式组之间ICU卫生学采样合格率为83.33%vs 98.61%(P<0.05),ICU感染率10.19%vs 3.38%(P<0.05)。呼吸机相关肺炎(VAP)感染发生率8.39‰vs 3.80‰(P<0.05),中央导管相关血流感染(CLABSI)发生率0.86‰vs 0‰,导尿管相关泌尿道感染(CAUTI)发生率1.24‰vs 1.26‰;多药耐药菌检出菌株中导致医院感染菌株构成比19.48%vs 7.95%。结论改进ICU清洁消毒的方式可提高清洁消毒的质量,并对预防和降低ICU整体的医院感染、呼吸机相关肺炎发生率及多药耐药菌检出菌株中导致医院感染菌株构成比有重要作用。

丹红注射液辅助治疗对急性脑梗死患者神经损伤、血小板活化标志物的影响

目的:探讨丹红注射液辅助治疗对急性脑梗死患者神经损伤、血小板活化标志物的影响。方法:选择在本院接受治疗的急性脑梗死患者102例,回顾治疗方案并分为接受常规治疗的常规组54例、接受丹红注射液辅助治疗的丹红注射液组48例。对比两组患者治疗前、治疗3d后、治疗7d后血清神经损伤指标及外周血血小板活化标志物含量的差异。结果:治疗前,两组血清中神经损伤指标及外周血血小板活化标志物含量的差异无统计学意义。治疗3d后、治疗7d后,丹红注射液组患者血清中copeptin、H-FABP、NSE的含量低于常规组,BDNF、bFGF的含量高于常规组;外周血中CD62p、CD42b、PAC-1、PMA的含量低于常规组。结论:急性脑梗死患者在常规治疗基础上加入丹红注射液辅助治疗,可有效减轻患者神经损伤程度并抑制血小板激活。

Foxp3 mRNA和SCCA联合检测对宫颈癌的诊断价值

目的:回顾分析宫颈癌患者外周血叉状头螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA、鳞状细胞癌抗原(SCCA)等的水平变化,相关性及联合检测对诊断宫颈癌的价值。方法:92例宫颈癌患者(宫颈癌组)和87例体检健康女性(对照组)分别采用RT-PCR和化学发光法检测两组外周血Foxp3 mRNA和SCCA以及糖类抗原CA50、CA125水平;Pearson法分析Foxp3 mRNA与SCCA和CA50、CA125水平的相关性;绘制ROC曲线,分析Foxp3 mRNA联合SCCA检测对诊断宫颈癌的价值。结果:宫颈癌组Foxp3 mRNA、SCCA、CA50和CA125水平明显高于对照组(13.71±5.27 vs 2.09±1.51、13.07±1.82 vs 2.85±0.08ng/ml、49.2±13.29 vs 15.61±6.94IU/ml、51.72±15.26 vs 11.57±7.64U/ml,均P<0.01)。宫颈癌患者Foxp3mRNA相对表达水平与SCCA含量呈正相关(r=0.577,P<0.05),但与CA50和CA125无明显相关性(r=0.013和0.085,均P>0.05)。ROC曲线分析显示,Foxp3 mRNA联合SCCA诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)为0.911(95%CI:0.760—0.995),灵敏度为93.10%,特异度为84.70%,明显高于单检Foxp3mRNA或SCCA(均P<0.05)。结论:Foxp3 mRNA与SCCA联合检测可提高对宫颈癌的诊断效能。

姜黄素抑制人肾癌细胞769-P增殖及促凋亡的实验研究

目的 分析不同浓度姜黄素（curcumin,分子式C21H20O6）对人肾癌细胞769-P的生物学作用及其调控机制.方法 体外培养人肾癌细胞769-P,用不同浓度姜黄素处理24 h后,采用MTT比色法测定姜黄素对细胞的增殖抑制作用,利用倒置显微镜观察细胞的显微形态结构,采用细胞划痕法观察细胞的迁移情况;Western Blot法检测细胞内Caspase-3、AIF蛋白质的表达情况;用反转录PCR法检测AIF、Bax mRNA的表达水平.结果 MTT法检测显示姜黄素能显著抑制人肾癌细胞系769-P的增殖,呈现浓度和时间效应关系;倒置显微镜结果显示姜黄素能够使肾癌细胞系的形态学发生改变,呈现出典型凋亡特征如核皱缩、核破裂、核肿胀等形态;细胞划痕实验显示,姜黄素抑制了肾癌细胞系的迁移;RT-PCR实验显示,姜黄素促进了BAX mRNA和AIF mRNA的表达;蛋白杂交实验显示,姜黄素促进了Caspase-3和AIF蛋白的活化,从而促进了凋亡.结论 姜黄素能显著抑制人肾癌细胞的增殖并促进其凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax和AIF表达,活化Caspase-3的信号通路有关.

中药熏洗坐浴治疗混合痔术后肛周疼痛30例临床研究

目的对中药熏洗坐浴治疗混合痔术后肛周疼痛进行临床研究。方法混合痔术后患者60例,随机分为治疗组及对照组各30例。治疗组应用中药熏洗坐浴,早、晚各一次;对照组应用1∶5 000高锰酸钾溶液熏洗坐浴,早、晚各一次。7天为一疗程,治疗期间均给予左氧氟沙星100ml、奥硝唑注射液250ml静脉滴注,连续5日,生肌玉红膏纱条换药,每日1次,至痊愈,进行疗效评价。结果治疗组有效25例,无效5例,有效率83. 33%;对照组有效17例,无效13例,有效率56. 67%。治疗组术后第3、6天疼痛积分(VAS评分)比较,治疗组术后第3天(5. 12±1. 24),术后第6天(2. 03±0. 51),对照组术后第3天(7. 32±1. 26),术后第6天(3. 98±0. 87),分别对组内及组间进行比较,经χ2检验,均P <0. 05,治疗组疼痛消失时间(146. 5±23. 8) h,比对照组(164. 8±22. 4) h短(P <0. 01)。结论中药熏洗治疗混合痔术后肛周疼痛疗效显著,优于高锰酸钾。

FK866对小鼠肠缺血再灌注致急性肾损伤的保护作用

目的探讨内脏脂肪素（visfatin）抑制剂FK866对小鼠肠缺血再灌注（I／R）致急性肾损伤的作用及机制。方法将24只成年雄性C57BL／6J小鼠随机分为3组（n=8）：假手术组、I／R组和FK866±I／R组。FK866±I／R组小鼠于缺血前30min腹腔给予10mg／kgFK866。以血管夹夹闭肠系膜上动脉90min、再灌注4h制备肠I／R损伤模型。观察小肠黏膜及肾组织病理学变化，应用血生化测定血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清visfatin、肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-6含量，实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）法检测肾脏组织TNF-α和IL-6mRNA表达水平，Westernblot检测肾脏组织visfatin、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（cleavedCaspase）-3、核因子（NF）-KB蛋白、NF—KB抑制因子（IKB）仅蛋白表达水平，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果I／R组肾脏和血清visfatin蛋白水平均高于假手术组（0．79±0．23比0．41±0．12；120．79±37．45比82．61±18．17，P〈0．01）。与假手术组比较，I／R组小肠和肾组织病理学评分显著升高[（4．35±0．74）分比（0．12±0．35）分；（154．61±42．74）分比（13．46±2．53）分，P〈0．01]，血清BUN和CT水平显著升高[（20．62±5．14）mmol／L比（8．67±2．75）mmol／L；（40．25±8．91）μmol／L比（24．62±5．14）μmol／L，P〈0．01]，血清TNF—α、IL-6含量[（214．94±42．72）pg／L比（32．62±8．51）pg／L；（3．45±0．91）ng／L比（0．21±0．12）ng／L]及肾组织TNF—α、IL-6mRNA表达水平（12．75±4．87比1．00±0．16；51．28±7．68比1．00±0．21）明显上调（P〈0．01），胞质IKBa蛋白表达明显下调（0．79±0．13比0．23±0．03，P〈0．01），NF—κB蛋白表达显著上调（0．12±0．03比1．22±0．23，P〈0．01），凋亡指数和cleavedCaspase-3蛋白表达水平显著增加（13．26±3．74比3．35±1．13；0．69±0．12比0．25±0．01，P〈0．01）。经FK866预处理后，上述指标均明显改善（P〈0．01）。结论visfatin抑制剂FK866通过抑制炎性反应和细胞凋亡，从而减轻肠I／R所致肾损伤。

过表达miR-487a-3p对肾癌细胞增殖和侵袭的影响及机制研究

目的探讨微小RNA-487a-3p(miR-487a-3p)是否通过抑制其靶基因TM4SF1的表达影响肾癌细胞的增殖和侵袭。方法采用LipofectamineTM2000转染miR-487a-3p模拟物或miR-NC至肾癌细胞ACHN,分为实验组和对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测转染后miR-487a-3p的表达量,流式细胞术检测细胞周期进展情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖活性,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。构建TM4SF1野生型(WT)和突变型(Mut)的3’非编码区(3’UTR)-荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶报告基因系统检测miR-487a-3p对TM4SF1基因野生型和突变型3’UTR荧光素酶活性的影响,并通过qPCR和Westernblot检测转染两组细胞中TM4SF1基因mRNA及蛋白表达量的变化。结果实验组和对照组ACHN细胞中miR-487a-3p的表达量分别为(33.12±3.35)和(1.04±0.18),差异有统计学意义(t=9.553,P<0.001)。实验组ACHN细胞周期在G0-G1期的细胞比例(58.42±2.15)较对照组(42.07±1.62)明显升高,差异有统计学意义(t=6.087,P=0.001)。实验组ACHN细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05)。实验组ACHN细胞侵袭数(114.70±20.38)较对照组(269.30±18.12)明显降低,差异有统计学意义(t=5.670,P=0.001)。生物信息学软件和双荧光素酶报告基因检测实验结果表明TM4SF1是miR-487a-3p的靶基因(P<0.01),实验组ACHN细胞中TM4SF1mRNA的表达量(0.47±0.08)较对照组(1.02±0.10)明显降低,差异有统计学意义(t=4.122,P=0.006),实验组ACHN细胞中TM4SF1蛋白表达较对照组明显降低。结论miR-487a-3p可通过抑制其靶基因TM4SF1的表达,抑制肾癌细胞ACHN的增殖和侵袭,有望未来成为肾癌治疗的重要靶点。

骨髓间充质干细胞和丝素蛋白/壳聚糖支架构建组织工程尿液流出道的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)和丝素蛋白/壳聚糖支架构建组织工程管状移植物在兔体内进行尿流改道的可行性和有效性。方法本研究共选取雄性SPF级新西兰大白兔36只。(1)取新西兰大白兔6只,行耳缘静脉麻醉后,提取BMSC和并进行体外培养,选取第3代BMSC,进行爬片,流式细胞仪检测细胞表面标志物;(2)另取6只新西兰大白兔,耳缘静脉麻醉后,取膀胱组织块,对尿路上皮细胞进行分离、培养及鉴定;(3)采用Transwell法,对BMSC悬液进行培养,采用免疫荧光检测诱导分化后BMSC是否向尿路上皮表型分化,同时采用蛋白质印迹法及聚合酶链式反应检测UPIa、角蛋白(CK)-18的表达情况;(4)制备丝素蛋白/壳聚糖支架,并对制备好的支架的形态、孔隙率进行评估;(5)将诱导分化14 d后的BMSC浓度调至4×106/mL,逐滴加入盖满整个丝素蛋白/壳聚糖支架材料,设为实验组,对照组为同样浓度的细胞悬液置于细胞培养瓶培养,取培养1、3、5、7、9 d复合物,扫描电镜观察、评估丝素蛋白/壳聚糖支架上细胞生长情况,使用噻唑蓝比色法检测细胞在支架上的增殖能力,并进行活细胞/死细胞测试;(6)取剩下的新西兰大白兔24只,随机分为实验组和对照组,每组各12只。麻醉后,分别将接种BMSC和未种BMSC的丝素蛋白/壳聚糖支架埋入实验组和对照组新西兰大白兔大网膜,网膜包裹促血管化2周后行苏木精-伊红染色,检测血管生成情况,行免疫组织化学染色观察细胞在支架表面生长情况;(7)对2组新西兰大白兔行尿流改道术,于术后1、2、4、8周进行取材,并分别行苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色,术后10周利用静脉尿路造影检测流出道通畅情况。结果(1)分离出的BMSC呈圆形,培养3 d后以长梭状细胞形态为主;培养10 d,细胞融合度可达到90%,呈典型的纺锤样形态;获取第3代BMSC,流式细胞仪检测结果显示:约99.9%的细胞表面表达CD44和CD90,约97.0%的细胞表面不表达CD34和CD45。(2)尿路上皮细胞培养3 d,贴壁生长的细胞数目明显增多,细胞形态由类圆形变为扁平梭状,可见少量细胞集落形成;培养12 d,细胞融合度达到90%,细胞呈典型的铺路石样;CK(AE1/AE3)抗体鉴定结果显示,在荧光显微镜下可见大量多边形阳性细胞。(3)将诱导分化后的BMSC爬片行免疫荧光检测、蛋白质印迹法检测及聚合酶链式反应检测均提示:未诱导分化的BMSC不表达或低表达特异性UPIa蛋白,而诱导分化后细胞UPIa和CK-18蛋白表达上调。(4)制备好的冻干丝素蛋白/壳聚糖支架大体观察呈白色,可切成2 mm厚的薄片,扫描电镜下呈鱼网状结构,孔径大小为100~120μm,平均孔隙率为(91.2±4.3)%。(5)培养3 d,扫描电镜可见细胞黏附在丝素蛋白/壳聚糖支架上生长,较多的细胞伪足伸出,可见细胞之间的桥接现象;噻唑蓝比色法测试结果显示:细胞与支架材料共培养1、3、5 d,对照组的细胞增殖速度明显比实验组快,培养7 d,实验组和对照组细胞的增殖速度达到平衡,培养9 d实验组的细胞增殖速度加快,超过对照组;进行活细胞/死细胞测试,可观察到支架材料上90%以上的细胞为活细胞。(6)网膜包裹管状移植物促血管化2周后取材,肉眼可见移植物表面有新生血管生成;苏木精-伊红染色提示管状移植物腔面可见薄层、稀疏尿路上皮细胞覆盖;CD31免疫组织化学染色结果表明实验组可见明显的新生血管形成。(7)实验组12只新西兰兔尿流改道后均成活,未见输尿管扩张、肾积水现象,无尿外渗,流出道未见明显瘢痕形成挛缩。对照组12只新西兰兔在尿流改道术后4周内全部死亡,尸检可见流出道腔面塌陷,流出道内表面不平滑,有较多的结晶物附着。在尿流改道术后1、2、4、8周,苏木精-伊红染色可见上皮细胞逐渐完全覆盖流出道腔面;尿流改道术后1、2、4、8周,流出道表面可见上皮CK(AE1/AE3)和尿路上皮特异性蛋白UPⅢa表达逐渐增强;进一步检测连接蛋白ZO-1的表达情况与UPⅢa类似。术后10周,免疫组织化学染色显示CD31表达阳性;静脉尿路造影提示双肾分泌功能正常,肾盂、输尿管显影好,未见明显扩张现象,造影剂能够顺利通过流出道,流出道显影较好,未见明显狭窄、向外弥散现象。结论诱导分化后BMSC与丝素/壳聚糖支架共同构建组织工程尿液流出道是可行的,具有防止尿外渗、引流尿液的作用,为术后尿流改道提供了一种新思路。