妊娠合并泌尿系结石诊断治疗中国专家共识

妊娠合并泌尿系结石是妊娠期妇女一种常见疾病,由于需要兼顾患者及胎儿的安全、且缺乏大规模临床研究,其诊断及治疗方法目前还存在较多争议。为进一步规范妊娠合并泌尿系结石的诊治,本文以中国泌尿外科疾病诊断治疗指南为基础,结合最新国内外相关文献,由中华医学会泌尿外科学分会结石学组、中国尿石症联盟牵头多次组织专家进行深入讨论,结合孕妇特点和我国基本国情,制定该共识,为临床医师对妊娠合并泌尿系结石的诊治提供参考意见。

盐酸坦洛新并输尿管镜碎石术对输尿管结石的效果

目的观察盐酸坦洛新联合输尿管镜碎石术对输尿管下段结石的临床治疗效果。方法选取输尿管结石病人134例,随机分为输尿管镜碎石术组(对照组)和盐酸坦洛新联合输尿管镜碎石术组(观察组),每组67例。应用视觉模拟量表(VAS)评定两组术后疼痛程度,比较两组手术时间、住院时间、术后并发症发生率以及临床疗效。结果观察组VAS评分显著低于对照组(t=2.553,P<0.05),两组手术时间和住院时间比较差异无显著性(P>0.05)。观察组结石排除有效率为92.5%(62/67),显著高于对照组80.6%(54/67)(χ2=2.462,P<0.05)。观察组血尿、腰痛和发热发生率分别为77.6%、20.9%和16.4%,显著低于对照组的95.5%、38.8%和35.8%(χ2=2.512～2.564,P<0.05);观察组恶心呕吐不良反应发生率为6.0%,与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论盐酸坦洛新联合输尿管镜碎石术可显著提高单纯手术治疗的临床疗效,有利于减少病人术后并发症。

舒适护理对前列腺增生经尿道等离子切除术患者术后并发症及心理状况的影响

分析舒适护理对前列腺增生经尿道等离子切除术后,患者并发症和心里情况。方法:将2014年 11月~2017年1月在我院进行尿道等离子切除手术的前列腺增生患者52例作为分析对象,分成不同护理方式的两组分别是:观察组和对照组,之后观察两组患者护理后心里和并发症情况。结果:两组患者经过护理,并发症的发生率观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而且观察组患者的护理满意度明显优于对照组(P<0.05)。结论:对经尿道等离子切除手术的前列腺增生患者进行舒适护理,可以有效改善患者的心里问题,同时减少临床并发症的发生率,具有临床使用价值。

采用整形美容技术及理念治疗成人包茎的疗效观察

目的:探究整形美容技术及理念在治疗成人包茎上的临床治疗效果。方法:选取本院收治的109例因包茎需要进行包皮切除的成年患者作为研究对象,按照患者主动选择手术方式的不同将上述所有患者分为美容组(68例)和传统组(41例),其中传统组患者给予传统包皮环切术进行手术治疗,美容组则应用美容整形技术对包茎患者进行包皮环切手术治疗。对两组患者的术中情况、术后恢复情况、术后外观满意度及并发症情况进行比较分析。结果:美容组患者的手术时间、术中出血量、术后疼痛持续时间及切口愈合时间均显著低于传统组,差异有统计学意义(P<0.05);在术后恢复期间,美容组患者术后并发症发生率明显低于传统组,差异有统计学意义(P<0.05);美容组患者对阴茎外观的总满意度为94.12%,明显高于传统组(78.05%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:应用美容整形技术对成人包茎进行包皮环切治疗,具有创伤小、术后恢复快等优点,降低了术后并发症的发生,同时可有效避免传统包皮环切术后所产生的形态不良、瘢痕明显等情况,患者对阴茎外观的满意度明显提高。

闭孔神经鞘瘤1例并文献复习

目的探讨闭孔神经鞘瘤的临床表现、诊断、治疗。方法回顾性分析1例闭孔神经鞘瘤的临床资料,结合相关文献进行分析。结果病人早期无明显临床症状,因体检时超声检查发现膀胱右后方一肿块就诊。腹腔镜下行肿瘤全切术,术中发现右侧闭孔神经一分支穿越肿瘤。术后病理诊断为神经鞘瘤。术后随访2年未见复发。结论闭孔神经鞘瘤临床罕见,缺乏特异性临床表现,确诊靠病理组织学,腹腔镜手术是有效治疗方法,良性神经鞘瘤预后好。

大车前苷通过调控miR-711/S100A16信号通路表达抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移

目的探讨大车前苷对膀胱癌MGH-U3细胞增殖和迁移的作用及分子机制。方法分别采用0,5,10,20,40,80μg/ml的大车前苷处理膀胱癌MGH-U3细胞,通过CCK-8法分析大车前苷对MGH-U3细胞增殖能力的影响。将MGH-U3细胞分为对照组(0μg/ml大车前苷)和大车前苷组(40μg/ml大车前苷)。通过细胞划痕实验分析大车前苷对MGH-U3细胞迁移能力的影响。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测大车前苷处理后MGH-U3细胞中miR-711的表达。通过miRGator数据库和双荧光素酶基因报告实验分析miR-711的靶基因。qRT-PCR和Western blot分别检测大车前苷处理后MGH-U3细胞中miR-711靶基因的表达。结果与0μg/ml比较,随着大车前苷处理浓度的升高,MGH-U3细胞活力显著降低(F=29.16,P<0.05)。与对照组相比,大车前苷组MGH-U3细胞迁移能力显著降低(t=7.10,P<0.05)。与对照组相比,大车前苷组MGH-U3细胞中miR-711表达显著增多(t=27.03,P<0.01)。双荧光素酶基因报告实验证实miR-711的靶基因是S100钙调蛋白A16(S100A16)。与对照组相比,大车前苷组MGH-U3细胞中S100A16基因表达显著降低(t=8.68,P<0.01)。结论大车前苷通过上调miR-711表达降低S100A16基因表达,抑制膀胱癌MGH-U3细胞增殖和迁移。

低分子肝素钠用于治疗复发性流产的效果观察

目的探讨低分子肝素钠治疗复发性流产的临床效果。方法选取2016年12月至2017年12月鄂东医疗集团黄石市妇幼保健院、鄂东医疗集团黄石市中心医院和湖北省妇幼保健院接受治疗的90例复发性流产患者作为研究对象。采用随机数字表法实施分组,对照组45例,给予常规治疗;观察组45例,在对照组基础上加用低分子肝素钠治疗。对两组患者治疗前后的各项临床指标、妊娠并发症发生情况以及不良反应发生情况进行综合评价。结果观察组患者治疗后的凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)等水平均有所改善,显著优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后的妊娠并发症率为6.67%,与对照组对比差异具有统计学意义(P<0.05);且观察组治疗后有4例患者存在不良反应,占8.89%,显著低于对照组的26.67%,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论低分子肝素钠治疗复发性流产,能够提升妊娠结局,促进患者各项指标改善,不良反应少,值得临床推广应用。

miR-545-3p抑制VEGFA/VEGFR2信号通路对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-545-3p(miR-545-3p)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对血管内皮生长因子A(VEGFA)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路的调控作用。方法qRT-PCR检测miR-545-3p在不同前列腺癌细胞中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-545-3p与VEGFA的相互作用;MTT实验与流式细胞术检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞增殖能力及凋亡行为的变化;Western blot检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞CDK1、Bcl2、Bax及VEGFA/VEGFR2信号通路蛋白的表达水平变化。结果miR-545-3p在前列腺癌细胞中的表达水平降低,与其他前列腺癌细胞相比,DU145细胞中miR-545-3p的表达水平较低;双荧光素酶实验证实miR-545-3p可调控VEGFA的表达及活性;miR-545-3p过表达可减弱前列腺癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡;miR-545-3p过表达可下调VEGFA、p-VEGFR2、CDK1、Bcl2的表达,同时过表达VEGFA后可逆转miR-545-3p对前列腺癌细胞增殖及凋亡的作用。结论miR-545-3p过表达可通过抑制VEGFA/VEGFR2信号通路而抑制前列腺癌细胞增殖及诱导癌细胞凋亡。

miRNA-4469靶向PDIA4基因调控肾癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨miRNA-4469(miR-4469)体外调控肾癌细胞增殖和侵袭的机制。方法基于OncomiR数据库分析miR-4469不同表达水平患者生存差异。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-4469在肾癌细胞株ACHN、OS-RC-2、SK-RC-20、769-P、A498和正常肾小管上皮细胞株HK-2中的表达,将miR-4469表达水平最低的肾癌细胞分为miR-4469组和对照组,分别转染miR-4469模拟物和阴性对照序列。采用CCK-8法检测两组细胞增殖能力(以吸光度值表示),采用Transwell实验分析两组侵袭细胞数。应用TargetScan Release 8.0软件预测miR-4469与蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4)mRNA的结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-4469与PDIA4 mRNA的靶向关系。采用qRT-PCR法检测各组细胞PDIA4 mRNA的表达量,采用蛋白质印迹法检测各组细胞PDIA4蛋白和PI3K-AKT-m-TOR通路蛋白表达水平。结果分析OncomiR数据库相关数据显示,miR-4469高表达肾癌患者的总生存优于miR-4469低表达患者(P<0.001)。各肾癌细胞株中miR-4469的相对表达量均低于HK-2细胞(均P<0.05),其中769-P细胞miR-4469表达量最低,选取769-P细胞进行后续实验。miR-4469组769-P细胞增殖能力低于对照组(P<0.01)。miR-4469组769-P细胞侵袭数少于对照组[(19±3)个比(64±7)个,t=5.44,P=0.002]。与共同转染野生型PDIA4和miR-4469阴性序列组相比,共同转染野生型PDIA4和miR-4469模拟序列组细胞相对荧光素酶活性低(0.42±0.07比1.01±0.08,t=5.74,P=0.001);共同转染突变型PDIA4和miR-4469阴性序列组与共同转染突变型PDIA4和miR-4469模拟序列组间细胞相对荧光素酶活性差异无统计学意义(0.99±0.11比1.02±0.11,t=0.19,P=0.001)。miR-4469组769-P细胞PDIA4 mRNA相对表达量低于对照组[0.98±0.23比7.19±2.23,t=2.77,P=0.032]。与对照组相比,miR-4469组769-P细胞PDIA4蛋白和PI3K-AKT-m-TOR通路相关的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-SGK1蛋白表达量均低(均P<0.05)。结论miR-4469与肾癌患者生存可能有相关性,其在各肾癌细胞株中表达均下调。miR-4469可能通过PDIA4调节PI3K-AKT-m-TOR通路,从而抑制肾癌769-P细胞增殖和侵袭。

红景天苷通过LINC01207-miRNA-1182信号通路对前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨红景天苷对前列腺癌PC-3M细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子机制。方法分别采用不同浓度(0、50、100、150、200 nmol/L)的红景天苷处理PC-3M细胞48 h。采用MTS法检测红景天苷对PC-3M细胞增殖的影响。选择抑制作用最显著的红景天苷浓度处理的PC-3M细胞为红景天苷组,采用以0.9%NaCl注射液处理的PC-3M细胞为对照组。采用Transwell实验检测红景天苷对PC-3M细胞侵袭的作用。通过GEPIA数据库在线分析LINC01207在前列腺癌组织和癌旁组织中的表达差异。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测红景天苷作用后PC-3M细胞中LINC01207和miRNA-1182的表达情况。采用蛋白质印迹法检测红景天苷作用后PC-3M细胞中增殖和侵袭相关蛋白的表达。结果采用0、50、100、150、200 nmol/L红景天苷处理后,前列腺癌PC-3M细胞吸光度(A)值分别为0.98±0.17、0.72±0.08、0.47±0.10、0.12±0.03、0.42±0.05,差异有统计学意义(F=42.02,P<0.05),150 nmol/L的红景天苷抑制作用最明显,选择150 nmol/L红景天苷(红景天苷组)用于后续实验。对照组和红景天苷组PC-3M细胞侵袭数分别为(80±11)个和(36±13)个(t=5.15,P<0.05)。通过GEPIA数据库在线分析显示,LINC01207在前列腺癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,对照组和红景天苷组PC-3M细胞中LINC01207的相对表达量分别为6.2±1.1和1.2±0.7,红景天苷组PC-3M细胞中LINC01207表达低于对照组(t=7.88,P<0.01);miRNA-1182的相对表达量分别为1.00±0.20和7.02±0.35,红景天苷组PC-3M细胞中miRNA-1182表达高于对照组(t=30.07,P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,红景天苷处理PC-3M细胞后,细胞增殖蛋白CDK2、cyclin E表达均降低,细胞侵袭蛋白CD147、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达亦均降低。结论红景天苷通过下调LINC01207表达激活miRNA-1182表达,从而抑制前列腺癌PC-3M细胞增殖和侵袭。

lncRNA COX10-AS1在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)COX10-AS1在肾癌组织和细胞系中的表达及其对肾癌细胞增殖和迁移的影响。方法荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测经病理确诊为肾癌组织和癌旁组织的手术标本、肾癌细胞系(786-O、CaKi-1、A498、ACHN)和正常肾小管上皮细胞系(HK-2)中COX10-AS1的表达。以表达最低的ACHN细胞为研究对象,分为对照组和实验组,对照组细胞转染载有无意义序列的阴性对照质粒,实验组细胞转染载有COX10-AS1表达序列的质粒。qRT-PCR检测两组细胞中COX10-AS1的表达水平,MTS法和细胞划痕实验检测ACHN细胞的增殖和迁移能力。qRT-PCR检测两组细胞中MFN2 mRNA的表达水平,免疫印迹法(Western blotting)检测两组细胞中MFN2、Ras-NF-κB信号通路蛋白的表达情况。计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果肾癌组织COX10-AS1表达明显低于癌旁组织(P<0.01),肾癌细胞系COX10-AS1表达明显低于肾小管上皮细胞(P<0.05),ACHN细胞中COX10-AS1的表达最低(P<0.01),上述差异均具有统计学意义。与对照组细胞相比,实验组ACHN细胞中COX10-AS1的表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组细胞相比,实验组ACHN细胞增殖活力明显降低,细胞迁移能力明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与对照组细胞相比,实验组ACHN细胞中MFN2 mRNA的表达明显增加(P<0.01),MFN2蛋白表达明显增加(P<0.01),Ras-NF-κB信号通路蛋白表达明显降低(P<0.05),上述差异均具有统计学意义。结论COX10-AS1在肾癌组织和细胞系中表达降低,COX10-AS1可能通过促进MFN2基因的表达,抑制ACHN细胞的增殖和迁移能力。

87例腹股沟斜疝合并前列腺增生患者同期手术治疗临床研究及术后护理

目的对比老年腹股沟斜疝合并前列腺增生患者同期手术治疗与单一行手术治疗后诱导排尿中两种护理措施的有效性及安全性分析。方法随机选取2012年2月至2014年2月黄石市中心医院泌尿外科收治的腹股沟斜疝合并前列腺增生症患者171例,分为实验组和对照组。对实验组87例并发症患者同期进行手术治疗,对照组84例患者进行腹股沟斜疝修补术治疗,用药物抑制前列腺增生症。术后将87例同期手术治疗的患者,在征求患者及其家属同意的情况下,分为A,B两组,A组药物诱导排尿,B组采用物理方法诱导排尿,分析87例患者的护理资料。结果同期进行治疗的87例患者手术较为成功,术后随访6~12个月,无疝气复发、切口无感染、无术区牵拉不适、无排尿困难、尿失禁等并发症出现;另一组84例行腹股沟斜疝修补术治疗后用药物抑制前列腺增生症的患者术后复发率为10%,差异有统计学意义(P<0.05)。术后排尿护理不当容易感染,排尿困难时,物理诱导较药物诱导易被患者接受,且反应良好。结论同期行手术治疗较单一手术治疗加药物抑制术相比,具有复发率低、并发症少的明显优势。术后应用膀胱热敷、自我按摩等物理方法促进排尿,相比肛门给药更易被患者接受,疗效更佳。

miR-103b通过激活P21蛋白的表达对肾癌细胞生长的影响

目的 探讨miR-103b对肾癌细胞株769-P和ACHN细胞P21蛋白表达的激活作用及对肾癌细胞生长的影响.方法 根据转染RNA不同,将肾癌细胞分为两组,分别转染miR-103b(实验组)和dsControl(对照组).实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法分别检测两组细胞中P21、细胞周期依赖性激酶6、细胞周期蛋白D1 mRNA和蛋白的表达.流式细胞术检测两组细胞周期分布.MTT法检测转染后两组细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力.计量资料以均数±标准差(x-±s)表示,组间比较采用t检验.结果 实时荧光定量聚合酶链式反应结果提示,对照组769-P和ACHN细胞中P21、细胞周期依赖性激酶6、细胞周期蛋白D1 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.10和1.02±0.27、1.00±0.08和1.01±0.17、1.01±0.19和1.00±0.02,实验组分别为2.36±0.51和2.03±0.49、0.33±0.20和0.58±0.22、0.48 ±0.11和0.60 ±0.23,两组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).蛋白质印迹法检测结果与实时荧光定量聚合酶链式反应检测结果一致.流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,实验组769-P和ACHN细胞位于Go/G1期的细胞比例增加(P＜0.05),提示细胞被阻滞于Go/G1期.MTT检测结果显示,与对照组相比,实验组769-P和ACHN细胞活力明显降低.集落形成实验显示,实验组集落形成的数量明显较少,提示细胞增殖能力下降.结论 miR-103b可通过激活肾癌细胞中P21蛋白的表达,阻滞肾癌细胞周期的进展,抑制肾癌细胞的生长,为肾癌的分子靶向治疗研究提供了一定的理论基础.

紫云英苷上调miRNA-513表达对前列腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨紫云英苷上调miRNA-513(miR-513)对前列腺癌细胞株C4-2B细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法:选取前列腺癌细胞株C4-2B,采用125 μg/L紫云英苷作用48 h者为紫云英苷组,未处理者为对照组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两组C4-2B细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期。采用miRNAMap预测软件预测miR-513的靶基因为叉头框蛋白R2(FOXR2),并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组细胞miR-513和FOXR2 mRNA的相对表达水平,蛋白质印迹法检测两组细胞中FOXR2、细胞周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)、β-actin和细胞周期蛋白H(cyclin H)的表达。结果:与对照组比较,培养第2、3、4、5天紫云英苷组C4-2B细胞增殖活力均降低(均 P<0.05)。对照组和紫云英苷组S期细胞比例分别为(48.1±3.2)%和(36.0±2.1)%,紫云英苷组S期细胞比例降低( t=3.12, P=0.021);G 2期细胞比例分别为(24.9±3.3)%和(11.8±2.4)%,紫云英苷组G 2期细胞比例降低( t=3.18, P=0.019)。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平分别为1.01±0.22和6.55±0.61,紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平升高( t=7.70, P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验验证FOXR2为miR-513的靶基因。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中FOXR2 mRNA相对表达水平分别为1.04±0.14和0.19±0.06,差异有统计学意义( t=5.53, P=0.002),提示紫云英苷促进miR-513表达后,FOXR2 mRNA表达降低。紫云英苷组C4-2B细胞FOXR2、CDK7和cyclin H蛋白相对表达水平较对照组均降低。 结论:紫云英苷可能通过上调miR-513的表达,抑制前列腺癌C4-2B细胞增殖,诱导细胞周期停滞。

长链非编码RNA BDNF-AS通过G型酪氨酸磷酸酶受体调控PI3K-AKT信号通路抑制肾癌细胞增殖和迁移的实验研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)BDNF-AS在肾癌组织中的表达,及其对肾癌细胞增殖、迁移能力的影响和分子机制。方法采用实时反转录聚合酶链反应(rRT-PCR)检测2017年5月至2018年7月鄂东医疗集团黄石市中心医院67例肾癌患者癌组织、癌旁组织及正常肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株A498、ACHN、OS-RC-2、Caki-1、786-O中BDNF-AS基因表达水平。以BDNF-AS表达水平最低的肾癌细胞株Caki-1为研究对象,瞬时转染BDNF-AS过表达质粒(实验组)或载有无意义序列的质粒(对照组)。采用rRT-PCR检测转染效率。转染Caki-1细胞24 h后,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况,采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,rRT-PCR检测G型酪氨酸磷酸酶受体(PTPRG)mRNA水平,采用蛋白质印迹法检测PTPRG及PI3K-AKT通路相关蛋白的表达水平。结果肾癌组织中BDNF-AS相对表达量低于癌旁组织(0.96±0.24比4.62±0.84,t=41.76,P<0.01)。各肾癌细胞株中BDNF-AS相对表达量均低于正常肾小管上皮细胞株HK-2(均P<0.05),其中Caki-1细胞中的相对表达量最低(0.10±0.01)。实验组Caki-1细胞BDNF-AS相对表达量高于对照组(P<0.01)。转染第2天起,实验组Caki-1细胞增殖能力低于对照组(均P<0.05)。转染24 h后的Caki-1细胞迁移15 h后,实验组迁移Caki-1细胞数低于对照组[(51±8)个比(192±25)个,t=5.31,P<0.01]。转染48 h后,实验组Caki-1细胞中PTPRG mRNA相对表达量(P<0.01)及蛋白表达水平均高于对照组,实验组Caki-1细胞中PI3K-AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-Tpl2的表达水平均低于对照组。结论BDNF-AS在肾癌组织和细胞株中表达均下调,过表达BDNF-AS可抑制肾癌Caki-1细胞的增殖和迁移能力,其分子机制可能与BDNF-AS促进PTPRG基因表达、干扰PI3K-AKT信号通路的转导有关。

慢病毒体外干扰长链非编码RNA LINC00630表达对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA LINC00630在膀胱癌细胞中的表达,以及体外干扰其表达对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱癌细胞株5637、BIU-87、T24、J82和正常膀胱上皮细胞株SV-HUC-1中LINC00630的表达。选择LINC0063表达量最高的膀胱癌细胞株进行后续实验;采用对照慢病毒感染细胞作为对照组,干扰LINC00630表达的慢病毒感染细胞为实验组。qRT-PCR检测两组细胞中LINC00630的表达,分别采用MTS法和细胞划痕实验检测两组细胞的增殖和迁移能力。qRT-PCR检测两组细胞中神经调节蛋白1(NRG1)mRNA的表达,蛋白质印迹法检测两组细胞中NRG1蛋白、细胞增殖相关蛋白(cyclin D3、CDK2)及细胞转移相关蛋白(Vimentin、N-cadherin)的表达情况。结果与SV-HUC-1细胞比较(1.05±0.17),LINC00630在各膀胱癌细胞株中表达量均增加(均P<0.01),在J82细胞中的表达最高(相对表达量5.83±0.42)。与对照组J82细胞相比,实验组J82细胞中LINC00630表达降低(0.18±0.02比1.00±0.05,t=14.36,P<0.01);转染第2天起,实验组细胞增殖活力均低于对照组(均P<0.05)。实验组细胞划痕闭合率低于对照组[(27.4±7.1)%比(66.0±5.4)%,t=4.31,P<0.01]。实验组NRG1 mRNA的相对表达量较对照组降低(0.34±0.03比1.07±0.24,t=2.99,P<0.05)。与对照组相比,实验组细胞中NRG1蛋白、细胞增殖相关蛋白及细胞转移相关蛋白均降低。结论 LINC00630在膀胱癌细胞株中表达上调;干扰LINC00630可能通过下调NRG1基因的表达,抑制J82细胞增殖和迁移能力。LINC00630可能是膀胱癌治疗新的分子靶标。

MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测63例膀胱癌组织和癌旁组织、膀胱癌细胞系(BIU-87、J82、T24、5637)和正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1中的MTUS2-AS2表达。以MTUS2-AS2表达最低的J82细胞进行研究,分为对照组(转染载有无意义序列的对照质粒)和实验组(转染载有MTUS2-AS2表达序列的质粒)。qRT-PCR检测转染效率。MTS法和Transwell侵袭实验检测J82细胞的增殖和侵袭能力。qRT-PCR检测J82细胞中趋化素样因子超家族成员5(CMTM5)mRNA的表达,Western blot检测两组细胞中CMTM5、PI3K-AKT信号通路蛋白的表达。结果膀胱癌组织MTUS2-AS2的表达低于癌旁组织(P<0.01),膀胱癌细胞系MTUS2-AS2的表达明显低于正常膀胱上皮细胞(P<0.05),J82细胞中MTUS2-AS2的表达最少(P<0.01)。与对照组相比,实验组J82细胞中MTUS2-AS2的表达明显增加(P<0.01)。与对照组相比,实验组J82细胞增殖活力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组相比,实验组J82细胞中CMTM5 mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),PI3K-AKT信号通路蛋白表达降低(P<0.05)。结论 MTUS2-AS2在膀胱癌组织和细胞系中呈低表达,MTUS2-AS2可通过上调CMTM5基因的表达,抑制J82细胞的增殖和侵袭能力。

慢病毒介导的MFN2高表达对肾癌细胞增殖的影响

目的 探讨线粒体融合蛋白2（MFN2）对肾癌细胞增殖的影响,并探讨其分子机制.方法 将含有MFN2编码序列的慢病毒载体（Lenti-MFN2）感染肾癌细胞株ACHN和A498（实验组）,对照组为绿色荧光蛋白基因的慢病毒（Lenti-GFP）.实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blotting检测转染后细胞中MFN2mRNA及蛋白的表达及Ras-Raf1-ERK1/2信号通路蛋白磷酸化水平,流式细胞仪检测转染细胞周期.MTS法和集落形成实验检测细胞活力和增殖能力的变化.结果 对照组与实验组ACHN细胞中MFN2 mRNA的表达分别为1.04±0.29和4.11±0.78 （P＜0.001）,A498细胞中MFN2mRNA的表达分别为1.02±0.24和4.84± 1.49 （P=0.002）.实验组MFN2蛋白表达显著上升,Ras-Raf1-ERK1/2信号通路蛋白磷酸化水平显著降低,细胞周期明显抑制,肾癌细胞活力和增殖能力显著下降.结论 MFN2可能通过抑制肾癌细胞中Ras-Raf1-ERK1/2信号通路蛋白磷酸化水平,抑制细胞周期的进展,导致肾癌细胞活力和增殖能力下降.

线粒体融合蛋白2对前列腺癌细胞增殖的影响

目的 观察线粒体融合蛋白2（MFN2）对前列腺癌细胞生长的影响及其分子作用机制.方法 以含有绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体（Lenti-GFP）作为对照,用含有MFN2编码序列的慢病毒载体（Lenti-MFN2）感染前列腺癌细胞株DU-145和LNCaP.采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot检测感染后细胞中MFN2 mRNA及蛋白的表达情况;四甲基偶氮唑盐（MTT）法和集落形成实验检测细胞活力和增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot检测感染后细胞中Ras、p-Raf、p-Erk1/2蛋白表达水平.结果 Lenti-MFN2组DU-145和LNCaP细胞中MFN2 mRNA表达量分别为2.79±0.91、3.87±1.06,高于Lenti-GFP组的1.02±0.27和1.13±0.59,差异均有统计学意义（t=3.726,P=0.010;t=5.209,P=0.002）.与Lenti-GFP组相比,Lenti-MFN2组MFN2蛋白表达上调.Lenti-MFN2组DU-145和LNCaP细胞形成的集落数分别为（147.42±32.91）个、（130.26±62.47）个,低于Lenti-GFP组的（255.46±50.91）个、（238.10±49.77）个,差异均有统计学意义（t=3.565,P=0.012;t=2.700,P=0.036）.Lenti-MFN2组细胞周期被阻滞在G0/G1期,Ras、p-Raf、p-Erk1/2蛋白表达降低.结论 MFN2可抑制前列腺癌细胞的增殖能力,其机制可能是通过抑制Ras-Raf1-Erk1/2信号通路蛋白的活化.