ANA、抗ENA抗体联合检测对自身免疫病诊断的意义

目的探讨抗核抗体(ANA)和抗可提取性核抗原(ENA)多肽抗体谱检测对自身免疫病诊断的意义。方法对285例各种自身免疫病患者和30例健康人血清采用间接免疫荧光法检测ANA,免疫印迹法检测ENA多肽抗体。结果ANA在SLE患者中最高,阳性率为97.1%;抗SSA、抗SSB抗Sm、抗dsDNA、抗NUC和抗ulRNP抗体在SLE中检出率分别为85.6%,75.3%,37.4%,90.8%,83.3%和77.6%;抗SSA、抗SSB和抗ulRNP在SS中检出率分别为84.8%,78.8%和69.7%;抗Jo-1抗体在PM/DM中检出率为52.6%;抗ulRNP抗体在MCTD中检出率为90.5%;抗Scl-70抗体在PSS中检出率为46.7%。结论ANA和ENA抗体谱阳性分布有明显的倾向性,不同的自身免疫病患者血清所含自身抗体有差异,因此ANA和ENA抗体联合检测对自身免疫病具有诊断意义。

肝抗原自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断价值探讨

目的探讨肝抗原自身抗体检测对自身免疫性肝病(ALD)的诊断价值。方法分别采用间接免疫荧光法和免疫印迹法检测51例ALD患者、85例各类病毒性肝炎和其他肝病患者血清中的抗核抗体(ANA)和肝抗原自身抗体。结果 51例ALD患者中,自身免疫性肝炎(AIH)组患者血清中检出的ANA、抗LKM-1抗体、抗SLA抗体阳性率分别为87.4%、27.8%和29.4%;原发性胆汁性肝硬化(PBC)组中ANA、抗线粒体抗体(AMA-M2)、抗Sp100抗体和抗gp210抗体阳性率分别为85.2%、92.6%、33.3%和25.9%;原发性硬化性胆管炎(PSC)组中ANA阳性率为18.6%,其他各项检测指标均为阴性;对照组ANA阳性率为11.6%,其他检测指标均为阴性。结论肝抗原自身抗体检测对ALD的明确诊断和分类有重要的临床意义。

抗幽门螺杆菌HP1188蛋黄抗体的研究

目的制备抗幽门螺杆菌(H.pylori)HP1188蛋黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY),即HP1188-IgY,了解其理化特性和生物学活性,为研制H.pylori HP1188-IgY型抗体口服制剂提供实验依据。方法用纯化的重组HP1188蛋白免疫产蛋鸡,以水稀释法结合氯仿有机沉淀法提取蛋黄抗体(HP1188-IgY),采用SDS-PAGE电泳检测其纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot分析抗原特异性。间接ELISA评价HP1188-IgY对热、酸及胃蛋白酶消化作用的耐受情况。分别检测不同浓度HP1188-IgY及不同pH相同浓度HP1188-IgY对H.pylori的生长抑制试验。用MTT法检测不同浓度HP1188-IgY对H.pylori细胞毒活性的中和作用。结果 HP1188-IgY纯度约为68%,蛋白浓度为7.79mg/mL,Western blot结果显示在相对分子质量30000附近出现反应条带。HP1188-IgY具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶消化的能力。HP1188-IgY在体外可抑制H.pylori生长,并具有浓度依赖性和pH依赖性。HP1188-IgY能阻断H.pylori菌体蛋白对Hela细胞的毒性作用,且该作用具有浓度依赖性。结论成功制备了HP1188-IgY,其具有良好的理化性质和生物学特性,为进一步制备预防幽门螺杆菌感染的口服制剂奠定了基础。

幽门螺杆菌重组1188蛋白的表达

目的表达幽门螺杆菌(H.pylori)重组1188蛋白,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从H.pylori标准株NCTC 11637的基因组DNA中扩增hp1188基因片段,插入原核表达载体pQE-30,构建重组载体pQE30-hp1188,经DNA测序分析确认后,转化大肠杆菌DH5α,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Ni2+-NTA树脂纯化表达蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达形式和表达量。结果重组表达质粒pQE30-hp1188构建成功,所得序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为30.6 kD,与预期一致,蛋白表达量占全菌总蛋白的47%,上清液和沉淀中均有表达,重组蛋白纯化后纯度达90%以上。结论成功克隆hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。

HP1188-IgY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究

目的研究抗幽门螺杆菌(H.pylori)HP1188蛋黄抗体(HP1188-IgY)在小鼠体内抗感染作用。方法用Western blot法分析HP1188-IgY抗原特异性。建立H.pylori感染Balb/c小鼠的动物模型,预防组在小鼠灌喂H.pylori菌液前灌喂不同剂量(1、3、5mg/mL)的HP1188-IgY,同时设PBS对照组、阴性对照组、阳性对照组。通过小鼠胃组织H.pylori培养、快速尿素酶实验和组织学检查观察H.pylori定植情况。结果 Western blot结果显示在相对分子质量30 000附近出现反应条带。阳性对照组8周后H.pylori的感染率为100%。HP1188-IgY剂量为3mg/mL和5mg/mL时,小鼠胃黏膜的H.pylori定植量减少,炎性反应减轻(P<0.05)。随HP1188-IgY剂量的增加,感染率降低。结论该实验成功制备了HP1188-IgY,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植,为进一步制备预防H.pylori感染的口服制剂奠定了基础。