虫草菌丝对实验性肝纤维化的防治作用及其机制研究

目的 :探讨虫草菌丝对实验性慢性肝炎纤维化形成的抑制作用及其可能的作用机制。方法 :以CCl4 及乙醇诱导大鼠肝纤维化模型 ,自造模 10d后给予虫草菌丝悬浊液灌胃 ,同时设立正常对照组和模型对照组。于造模 9wk后处死全部大鼠 ,取血及肝组织标本。使用HE染色法观察肝组织形态学变化和肝纤维化病理学分级 ,生化及放免法测定血清ALT ,AST ,透明质酸 (HA) ,板层素 (LN)含量 ,使用免疫组化法及原位杂交法观察α 平滑肌动蛋白(α SMA) ,转化生长因子 β1(TGFβ1) ,血小板衍生生长因子 (PDGF) ,Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白或mRNA表达情况。结果 :与模型组相比 ,虫草组大鼠血清HA ,LN ,AST ,ALT含量均显著下降 (2 0 2±s 79vs316± 94 ;5 0± 3vs 6 0± 10 ;86± 34vs 2 2 4± 179;14 7± 6 0vs 2 73± 130 ;P <0 .0 5 )。肝组织表达α SMA ,TGFβ1,TGFβ1mRNA ,Ⅰ型胶原mRNA ,PDGF均显著减少 (0 .2± 0 .14vs 1.7± 1.4 ;1.7±0 .5vs 3.2± 1.2 ;1.1± 0 .8vs 2 .6± 1.4 ;0 .9±0 .4vs 1.9± 0 .7,P <0 .0 5 )。Ⅲ型胶原mRNA表达呈下调趋势 (0 .4± 0 .3vs 1.0± 0 .7,P =0 .0 6 95 )。而PDGFmRNA的表达下调则不明显 (0 .4± 0 .3vs 0 .7± 0 .5 ,P >0 .0 5 )。结论 :虫草菌丝能够抑制慢性肝炎纤维化的形成 。

人幽门螺杆菌VacA与HspA双价疫苗载体的构建

目的 :构建含人幽门螺杆菌 (Hp)热休克蛋白A(HsPA)和空泡毒素 (VacA)编码基因的重组载体 ,进行核甘酸序列分析 ,为在E .coliBL2 1中表达 ,及其抗原性的研究奠定基础。方法 :利用分子克隆技术 ,扩增HpHspA、VacA编码基因 ,分别将其与载体 pET32a(+)进行酶切、连接 ,同时将筛选的pET32a(+) /HspA和 pET32a(+) /VacA重组载体分别经XhoⅠ、BamHⅠ双酶切 ,通过凝胶电泳回收 pET32a(+) /HspA和VacA片段 ,经T4连接酶将pET32a(+) /HspA和VacA编码基因连接 ,而后转化并筛选含有两种目的基因的重组载体。结果 :经酶切、测序分析表明 ,插入的基因片段为HpHspA和VacA编码基因 ,由10 80bp组成 ,与GenBank报道的相比较 ,有 3.4 %的碱基发生变异 ,1.10 %的氨基酸残基改变 ;但编码的蛋白质特性无本质性改变。结论 :成功地克隆了HpHspA和VacA编码基因 ,并构建了能够同时表达HapA和VacA蛋白的双价疫苗重组载体 ,为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制奠定了良好的基础。

胃粘膜一氧化氮合成酶与血清胃泌素在十二指肠溃疡的变化

为探讨一氧化氮合成酶(NOS)在十二指肠溃疡(DU)的变化及其意义,我们观察了29例幽门螺杆菌(Hp)阳性的活动期DU患者,在抗Hp治疗前后的胃粘膜NOS活性及空腹血清胃泌素浓度的变化,并与12例非溃疡性消化不良患者进行比较。

胃癌、食管癌患者血浆及粘膜组织中ET-1浓度的测定

目的 探讨内皮素在上消化道肿瘤中的作用。方法 本文测定了 19例胃癌及 10例食管癌患者血浆及组织内ET 1的浓度。结果 胃癌及食管癌组织中ET 1的含量显著增高 (57 4 1± 2 9 94 )。与对照组 (8 57± 3 32 )比较P <0 0 1。血浆ET 1的浓度亦增高 ,分别为 2 7 0 1± 5 95及2 7 4 5± 6 2 4 ,与对照组比较P <0 0 1。但各细胞学类型之间血浆ET 1的含量无差异。结论 ET 1可能参与了肿瘤的发生及发展 ,这为进一步研究内皮素对消化道肿瘤的作用提供了一线索。

CagA^+ Hp培养滤液对人胃上皮细胞的恶性转化作用

目的研究CagA Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)的恶性转化用。方法制备Hp培养滤液,PCR鉴定CagA基因,采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验及流式细胞仪等,观察Hp(CagA^+)培养滤液对GES-1细胞的作用。结果经Hp(CagA^+)培养滤液处理的GES-1细胞细胞核增大、畸形、核染色质变粗,核仁肥大,核分裂,生长曲线可见细胞增生活跃,存活率195％.克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强,存活率达到338％,流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组。结论 Hp(CagA)培养滤液可以导致GES-1细胞的生长特性改变,呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征。

5-氟脲嘧啶及丝裂霉素C对人胃癌细胞株SGC-7901及BGC-823的相互作用的体外观察

目的 :体外观察 5 -氟脲嘧啶及丝裂霉素C对人胃癌细胞株 (SGC - 790 1及BGC - 82 3)的相互作用。方法 :采用MTT法利用中效原理判定两药合用的效果。结果 :两种药单独应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加 ;两药大剂量 (大于中效剂量 )合用时是协同作用 (CI<1 ) ,小剂量 (小于中效剂量 )合用时是拮抗作用 (CI >1 ) ;两药给药时间次序不同不会影响效应大小。结论 :上述两种药合用大剂量是协同 ,而小剂量则拮抗 。

cagA基因阳性幽门螺杆菌培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系GES-1生长的影响

目的 研究cagA+ 幽门螺杆菌 (Hp)培养滤液对人胃粘膜上皮细胞 (GES 1)的作用及机制。方法 制备Hp培养滤液 ,PCR鉴定cagA基因。采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验、单细胞微凝胶电泳及流式细胞仪等 ,观察Hp(cagA+ )培养滤液对GES 1细胞的作用。结果 经Hp(cagA+ )培养滤液处理的GES 1细胞 ,细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂。生长曲线可见细胞增生活跃 ,增殖率 195 %。克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强 ,增殖率达到 337.5 %。流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组。Hp(cagA+ )培养滤液可使GES 1细胞形成彗星现象。结论 Hp(cagA+ )培养滤液可以导致GES 1细胞的生长特性改变 ,呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征。DNA损伤可能是cagA诱导GES 1细胞生长特性改变的机制之一。