STAT 5诱杀寡脱氧核苷酸对K 562细胞裸鼠致瘤能力的影响

目的:通过动物实验,研究裸鼠信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription5,STAT5)诱杀寡脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotide,Decoy ODN)的抑瘤作用。方法:采用皮下注射的方法建立K562细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体内注射脂质体-ODN混合物,观察裸鼠生长状况、瘤体大小等。分别采用反转录-聚合酶链反应(reverse tran-scription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹法检测瘤组织中bcl-xL、cyclin D1和c-myc的mRNA和蛋白表达水平的改变情况。结果:经Decoy ODN处理抑制了K562细胞对裸鼠的致瘤能力,瘤体积和质量明显小于突变ODN组[MutantODN组瘤重(0.93±0.22)gvsDecoy ODN组瘤重(0.485±0.178)g,P<0.05],肿瘤生长抑制率达47.7%。RT-PCR、Western印迹检测结果显示bcl-xL、cyclin D1和c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调。结论:转录因子诱杀策略可以有效地在移植瘤裸鼠模型体内阻断STAT5靶基因的表达。

HA-2FKBP-ABD融合蛋白的原核表达及与BCR-ABL的相互作用

目的构建经原核表达和纯化的HA-2FKBP-ABD(HF2A)融合蛋白,探讨HF2A对BCR-ABL的靶向作用。方法用PCR扩增HF2A片段,将HF2A克隆入pET32a(+)原核表达载体,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化HF2A蛋白,SDS-PAGE分析诱导和纯化的条件,western blot鉴定HF2A蛋白的表达,pull down实验检测HF2A与BCR-ABL的相互作用。结果重组原核表达载体经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;0.1 mmol/L IPTG 25℃诱导4 h获得HF2A蛋白的高表达,其分子量(Mr)约为74 000,纯化后可获得高纯度的HF2A蛋白;HF2A与BCR-ABL能相互作用。结论成功表达并纯化了HF2A融合蛋白,HF2A能够靶向作用BCR-ABL。

FKBP-RAP-FRB系统转运BCR-ABL入核对K562细胞的增殖抑制效应

BCR-ABL融合蛋白是慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病的基础。其中,BCR-ABL只能定位于细胞浆、不能易位至细胞核是其致病的关键因素。因此,转运BCRABL入核可能是治疗CML的潜在方法。该研究利用基因重组技术,构建HA-2FKBP-ABD(HF2A)和FLAG-3NLS-FRB*(FN3R)重组腺病毒,与雷帕霉素类似物(Rapamycin analog)一同组成FKBP-RAPFRB系统,转运K562细胞胞浆中的BCR-ABL癌蛋白至细胞核,并探究其对K562细胞增殖的影响。结果显示,成功构建了高滴度的重组腺病毒,Western blot证实目的蛋白在K562细胞内成功表达。FKBP-RAP-FRB系统可通过转运BCR-ABL入核,抑制K562细胞生长和克隆形成的能力。结果揭示,FKBP-RAP-FRB系统转运BCR-ABL入核有望为CML提供新的治疗手段。