卡介菌多糖核酸和特异性免疫治疗对哮喘儿童免疫功能的影响

目的 研究卡介菌多糖核酸 (BCG PNA)和特异性免疫治疗 (SIT)对哮喘儿童IgE和细胞因子IL 4、IFN γ、IL 13、IL 12水平的影响。方法 用BCG PNA、SIT和两者联合治疗 36例哮喘儿童 ,治疗前后用酶联免疫吸附试验检测血清IgE和外周血单个核细胞产生细胞因子IL 4、IFN γ、IL 13、IL 12水平并分析其相互关系。结果 BCG PNA和SIT能明显改善哮喘儿童失衡的细胞因子网络 ,抑制IL 4、IL 13分泌 ,促进IFN γ、IL 12产生 ,降低血清IgE水平。 2种联合治疗对于降低IL 13、增高IFN γ有协同作用。结论 BCG PNA和SIT能增强Th1反应 ,降低Th2应答 ,调节Th1

地塞米松和甲基泼尼松龙对哮喘儿童外周血Th1/Th2类细胞因子平衡的影响

目的 观察支气管哮喘儿童外周血单个核细胞 (PBMC)中CD4 +T细胞中两个功能性亚群 (Th1/Th2 )的功能状态及地塞米松和甲基泼尼松龙对其的影响。方法 15例哮喘及 14名健康儿童 ,取静脉血 ,密度梯度离心法分离PBMC ,分别用 10 -8mol/L地塞米松和甲基泼尼松龙体外干预培养 4 8h后 ,用ELISA法测定培养上清中的干扰素 γ(IFN γ)、白细胞介素 4 (IL 4 )和IL 10的浓度。结果 地塞米松和甲基泼尼松龙均可明显抑制哮喘儿童PBMC分泌IFN γ(P值分别为 0 .0 0 4和 0 .0 0 2 )和IL 4(P值分别为 0 .0 0 2和 0 .0 0 1) ;若以IFN γ/IL 4表示Th1/Th2间的平衡 ,则甲基泼尼松龙 (P <0 .0 5 )可恢复Th1/Th2平衡 ;地塞米松和甲基泼尼松龙都不影响IL 10的分泌。结论 地塞米松和甲基泼尼松龙均可抑制IFN γ和IL 4的产生 ,但甲基泼尼松龙抑制作用更强 。

哮喘发作患儿CD_(30)分子表达及与Th2源细胞因子和血浆免疫球蛋白E水平的相关性研究

目的 探讨CD3 0 在哮喘发病中的作用。方法 随机选择哮喘急性发作期患儿 2 7例 ,急性上呼吸道感染 (上感 )患儿 16例 ,对照组 19例。采用直接免疫荧光流式细胞术检测外周血单核细胞 (PBMC)中CD4+ 细胞表达CD3 0 百分率 ,采用ELISA法检测培养上清IL 4、IL 13及血浆IgE水平。 结果 1.哮喘患儿PBMC中CD4+细胞表达CD3 0 百分率较对照组和上感组明显增高 ,差异有显著性 (P均 <0 .0 5) ;2 .哮喘患儿PBMC培养上清IL 4、IL 13和血浆总IgE水平均较对照组和上感组增高 ,上感组血浆IgE水平亦较对照组增高 ,差异均有显著性 ;3 .哮喘组CD4+ 细胞表达CD3 0 百分率与培养上清IL 4、IL 13和血浆IgE水平呈显著正相关。 结论 分泌IL 4和IL 13的Th2类细胞活化、增殖的克隆可能主要是由CD3 0 阳性细胞克隆组成 ,Th2细胞表面CD3 0 与CD3 0 L结合后导致Th2细胞分化成熟及释放Th2源细胞因子 ,IL 4和IL 13增加可诱导B细胞分泌较多的IgE。说明CD3 0

先天性心脏病患儿的免疫功能状态

目的先天性心脏疾病(CHD)患儿易发生感染,有作者认为CHD可能是DiGeorge综合征(DGS)的一部分,CHD患儿对感染的易感性与其存在不同程度的免疫缺陷有关。本文探讨CHD患儿有无免疫功能缺陷,结合文献讨论CHD与DGS的关系。方法通过胸部X片回顾性观察因患肺炎而住院的72例单纯性和34例复杂性CHD新生儿胸腺影的大小,50例同日龄肺炎新生儿作为对照。检测28例学龄前期CHD患儿外周血淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖功能及外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)mRNA表达情况及培养上清中IL-4和IFN-γ水平,血浆IgG、IgA、IgM及C3水平。20例同年龄健康儿童作为对照。结果所有新生儿胸片均可见到胸腺影,单纯性和复杂性CHD新生儿胸腺影大小与肺炎新生儿比较差异均无显著性(P>0.05);学龄前期CHD患儿外周血CD3+,CD4+,CD8+,CD19+及CD16+CD56+T细胞和CD4+/CD8+与对照组差异无显著性(P>0.05);血浆免疫球蛋白及C3水平与对照组比,差异也无显著性(P>0.05);PBMC加植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)刺激后的每分钟脉冲数、PBMC培养上清中IL-4,IFN-γ水平和mRNA表达与对照组比较差异无显著性(P均>0.05)。结论并非所有CHD患儿均伴有胸腺发育不全或免疫功能缺陷,CHD患儿易感染不一定是先天性免疫功能低下的表现。

核因子-κB介导危重新生儿免疫功能研究

目的观察危重新生儿危重状态下免疫功能改变及核因子-κB(NF-κB)在其中的作用。方法选择50例危重新生儿作为观察对象,25例健康新生儿作为健康对照组。抽取二组静脉血,分别检测其血IL-4、IFN-γ、TNF-α及NF-κB等免疫指标。结果与健康对照组比较,危重新生儿存在NF-κB活性增高及Th1及Th2平衡紊乱,IL-4及TNF-α显著升高,IFN-γ降低。结论危重新生儿存在免疫功能紊乱;NF-κB信号转导通路参与危重新生儿发病。

卡介菌多糖核酸注射液和特异性免疫治疗对哮喘的疗效

目的研究卡介菌多糖核酸(BCG-PNA)和特异性免疫治疗(SIT)对哮喘患儿肺功能、血清IgE和分泌细胞因子的影响。方法用BCG-PNA和SIT治疗哮喘患儿45例,治疗前后检测肺功能,酶联免疫吸附试验检测血清IgE和外周血单个核细胞分泌细胞因子IL-4、IFN-γ、IL-13、IL-12水平。结果BCG-PNA和SIT明显改善哮喘患儿的用力肺活量、第1秒用力呼气容量、25%最大呼气流量等指标,降低血清IgE,抑制IL-4、IL-13分泌,促进IFN-γ、IL-12产生,两者联合治疗对于降低IL-13、增加IFN-γ产生有协同作用。结论BCG-PNA和SIT能改善哮喘患儿肺功能,增强Th1反应,降低Th2应答,调节Th1/Th2平衡。两者联合治疗对改善哮喘患儿失衡的细胞因子网络有一定协同作用。

儿童原发性肾病综合征瘦素及受体水平变化

目的检测儿童原发性肾病综合征(PNS)血清瘦素(leptin)、可溶性瘦素受体(sOBR)滴度,探讨外周组织瘦素受体(OBR)mRNA表达强弱对血清sOBR、leptin状态的影响。方法分别采用ELISA、RT-PCR法检测 23例未经激素治疗的PNS患儿空腹血清、尿液leptin和sOBR水平、以及外周血单个核细胞(PBMC)上OBR基因表达水平,并与在年龄、性别、体重指数(BMI)均匹配的15例门诊正常体检儿童比较。结果空腹血清总leptin水平肾病组与对照组相当,尿leptin肾病组高于对照组;肾病组血清sOBR水平明显低于对照组,尿sOBR检测值两者差异无显著性;血清中代表游离leptin水平的游离leptin指数(FLI)肾病组高于对照组;PBMC上OBR基因表达强度肾病组低于对照组。结论 PNS患儿血清leptin总水平正常,sOBR水平降低,致使机体实际发挥生物学作用的游离leptin增多;其中血清sOBR减少与PNS患儿外周组织OBR基因表达减少有关。

过敏性紫癜体液免疫状态分析

目的对比研究过敏性紫癜(HSP)体液免疫状态,探寻其发病机理。方法随机收集HSP患儿及正常对照儿童,用免疫散射比浊法检测血清IgG、IgA、IgM、C3及C4水平,IgE用ELISA方法检测。结果过敏性紫癜患儿IgG、IgA、JgE及C4水平均明显高于正常对照组,而IgM、明显低于正常对照组,C3在两组间无显著差异;其中,紫癜性肾炎患儿IgG、IgE、C3明显低于HSP肾未受损者。结论过敏性紫癜及紫癜性肾炎患儿存在严重的免疫功能紊乱,补体激活可能在其紫癜性肾炎的发病小扮演一定角色。

新生期小鼠卡介苗接种和呼吸道合胞病毒感染对肺部炎症和免疫状态的影响

目的研究小鼠新生期卡介苗(BCG)接种对呼吸道合胞病毒(RSV)感染后肺部炎症和免疫状态的影响。方法新生BALB/c小鼠分4组:A组为对照组、B组为BCG接种组、C组为RSV感染组、D组为BCG接种后RSV感染组。RSV感染后1周观察肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数及分类,ELISA法检测BALF中IFN_γ、IL_4、IL_10含量,RT_PCR检测肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达,HE染色进行肺组织炎症病理评分。结果C、D两组BALF中白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、IFN_γ含量以及肺组织TLR4mRNA表达量和炎症病理评分显著高于A、B组(P<0.01或0.05),BALF中IL_4、IL_10含量4组间差异无显著性,C、D两组之间在各项指标上差异无显著性。结论小鼠新生期BCG接种对RSV感染诱发的肺组织炎症和免疫状态无影响。

小鼠呼吸道合胞病毒感染模型的建立

目的 建立呼吸道合胞病毒 (RSV)感染小鼠模型 ,了解病程规律及病理变化 ,为研制抗RSV药物打下基础。方法 给小鼠感染不同负荷量RSV(10 3、10 4 、10 5、10 6 PFU) ,并于小鼠感染 10 6 PFURSV后不同时间 (1、2、3、4、5、6、7d)取右肺组织作空斑形成实验检测肺组织RSV滴度 ,左肺组织行HE染色、电镜检查及原位杂交检测RSV定位表达。结果 病毒感染量为 10 3PFU时肺组织无空斑形成 ,随着感染病毒量增大 ,肺组织病毒增多。鼠感染 10 6 PFU后 ,随着时间推移 ,肺内病毒量降低 ,感染第 6天的肺组织已无空斑形成。病理显示RSV感染第 3天肺组织炎症性变化最明显 ,感染第 7天肺部炎症细胞减少 ,但出现了部分肺泡壁断裂融合 ,肺泡腔扩大。原位杂交证实RSV主要侵袭支气管、细支气管上皮细胞及肺泡上皮细胞。结论 经鼻内滴入RSV可建立小鼠感染模型 。

CD40L、可溶性黏附分子及MMP9在川崎病中的表达及意义

目的:研究T细胞CD40配体(CD40L)、血浆中可溶性E选择素(sE-selectin)、可溶性细胞间黏附分子1(sI-CAM-1)和基质金属蛋白酶9(MMP9)在川崎病中的表达及意义。方法:用流式细胞双色荧光标记技术检测20例川崎病急性期及静脉注射免疫球蛋白(IVIG)治疗后的患儿,19例正常对照,外周血T细胞表达CD40L阳性细胞率及平均荧光强度;用ELISA方法检测上述3组血浆中sE-selectin、sICAM-1和MMP9水平。结果:急性期川崎病组T细胞CD40L表达明显高于IVIG治疗后组(P<0.05),川崎病患儿T细胞CD40L表达较正常对照持久;2例伴冠状动脉损害(CAL)的川崎病患儿急性期T细胞CD40L表达高于无CAL者。急性期川崎病组血浆sICAM-1、MMP9明显高于IVIG治疗后组,急性期川崎病患儿血浆sE-se-lectin、sICAM-1明显高于正常对照(P<0.05)。川崎病急性期T细胞表达CD40L与血浆sE-selectin、sICAM-1、MMP9水平无明确相关性(P>0.05)。结论:T细胞表达CD40L升高在川崎病血管炎及冠状动脉病变中可能起一定作用。血浆sE-selectin、sI-CAM-1和MMP9水平可作为反映川崎病血管炎的指标。

一种改良型小鼠哮喘模型方法的建立及评价

目的:改良建立小鼠哮喘模型的方法并评价其效果.方法:清洁级BALB/c小鼠20只,随机分为模型组和对照组,模型组于第0和14d注射OVA(卵清蛋白)致敏,第21～25天雾化吸入5%OVA激发,对照组用生理盐水替代.结果:模型组在激发过程中出现明显头面部瘙痒,呼吸加深加快,安静少动,弓背,前肢缩抬等哮喘急性发作表现.BALF(支气管肺泡灌洗液)中白细胞总数及嗜酸性粒细胞分类明显增多.血清及BALF中IL-4明显增高,INF-γ下降,OVA特异性IgE增高.肺组织病理切片见小支气管及伴行血管周围有较多炎症细胞浸润,可见大量嗜酸性粒细胞,杯状细胞增生,平滑肌增厚,部分肺泡间隔融合形成肺气肿.结论:通过对小鼠哮喘模型建立方法的改良,成功复制出小鼠哮喘发作的动物模型.

不同饲养环境、种属、佐剂及激发方法对小鼠哮喘炎症的影响

目的研究不同饲养环境、种属、佐剂及激发方法对小鼠哮喘样炎症的影响。方法应用普通级或清洁级的BALB/c和C57BL小鼠,以鸡卵白蛋白作过敏原,采用氢氧化铝和明矾佐剂及滴鼻和雾化的激发方式制备小鼠哮喘模型,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞分类记数和观察细支气管周围的嗜酸性粒细胞(Eos)炎症。结果BALB/c和C57BL小鼠嗜酸性粒细胞炎症无差异,清洁级比普通级、明矾佐剂比氢氧化铝佐剂、多次的雾化比一次滴鼻的激发方式能更明显地诱导小鼠哮喘炎症。结论小鼠哮喘炎症程度受饲养环境、种属、佐剂及激发方法的影响,实验设计时应予充分的注意。

静脉注射丙种球蛋白对川崎病外周血单个核细胞CD40L表达的影响

目的 观察川崎病 (kawasakidisease,KD)急性期患儿外周血单个核细胞 (PBMC)表面CD4 0配体 (CD4 0L)表达水平 ,及静脉注射丙种球蛋白 (IVIG)治疗后CD4 0L的变化 ,以期探讨IVIG治疗机制及冠状动脉病变 (CAL)发生的可能机制。方法 用流式细胞技术法检测 11例川崎病急性期患儿及 1g/kgIVIG治疗后其PBMC表达CD4 0L阳性细胞率及平均荧光强度 (MFI)。结果 川崎病患者PBMC表面CD4 0L表达较正常对照持久 ;对 1g/kgIVIG敏感者治疗后患者PBMC上表达CD4 0L下降 ,与治疗前比较有显著性差异 ;对 1g/kgIVIG不敏感者治疗后PBMC中高表达CD4 0L的细胞数增多 ,与正常对照比较有显著性差异 ;2例急性期已发生冠状动脉扩张的患儿其PBMC上的CD4 0L表达的阳性细胞率及平均荧光强度均明显高于无冠状动脉病变者。结论 CD4 0L升高在川崎病发病及冠状动脉病变中起一定作用 ,IVIG可能通过下调川崎病PBMC上CD4

RNA干扰技术与利巴韦林体外抗呼吸道合胞病毒的效应

目的比较RNA干扰(RNAi)技术与利巴韦林抗呼吸道合胞病毒(RSV)效应,探讨RNAi技术体外抑制RSV的有效性。方法用成功构建的表达载体pshRNA7816及利巴韦林处理HEp-2细胞,利用四甲基偶氮唑蓝比色实验检测pshRNA7816、利巴韦林的细胞毒性和对RSV感染后细胞的保护作用;通过显微镜观察pshRNA7816及利巴韦林对RSV感染细胞病变的抑制效率。结果pshRNA7816对HEp-2细胞的正常生长无明显细胞毒性作用,而利巴韦林在1.0mmol/L以上作用浓度即会对细胞产生细胞毒性作用;pshRNA7816和利巴韦林均能抑制RSV所致的细胞病变,但pshRNA7816对细胞病变抑制作用较利巴韦林强,经过pshRNA7816处理过的RSV感染细胞的细胞存活率明显高于利巴韦林对RSV的最大抑制率(P<0.05)。结论根据RNAi技术所设计的重组质粒pshRNA7816在体外细胞培养系统中较利巴韦林抗RSV活性强。

Anti-CD86mAb干预哮喘患儿PBMC后对其产生Th源细胞因子影响的研究

目的 :探讨Th源细胞因子和CD86在哮喘发病中的作用及CD86mAb治疗哮喘的临床潜在价值。方法 :随机选择哮喘急性发作期患儿 2 8例 ,男 18例 ,女 10例 ,年龄 1岁～ 8 0 8岁 ,平均年龄 (4 83± 1 99)岁 ;对照组 15例 ,男 7例 ,女 8例 ,年龄 3 2 5岁～ 10岁 ,平均年龄 (6 6 3± 1 91)岁。ELISA检测PHA刺激并用小鼠抗人CD86mAb干预PBMC(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)后其培养上清IL 4、IL 13、IFN γ水平。结果 :小鼠抗人CD86mAb(5× 10 - 3μg ml)干预PBMC后 ,正常组和哮喘组IL 4、IL 13和IFN γ水平均降低 ,与相应小鼠IgG对照组相比差异有显著性 ,而哮喘组IL 4和IL 13降低更明显。结论 :CD86mAb的阻断是非特异性的 ,即对Th1和Th2细胞均有一定的抑制作用 ,但对Th2细胞的抑制作用尤甚 ,说明CD86信号传导在哮喘的发生和发展过程中起重要作用。