重庆医科大学儿童医院1996～2001年抗生素使用情况分析

目的 了解 1996～ 2 0 0 1年重庆医科大学儿童医院抗生素使用情况。方法 收集 3～ 5年间药品收入占全院业务收入比例、抗生素收入占药品收入比例、前 13位畅销药等数据 ;另抽 1d调查门诊抗生素使用数量及途径、细菌学检查比例等情况。结果 药品收入在全院总收入中所占份额持续维持在高水平 ,2 0 0 1年有所下降 ;抗生素仍为医院使用最多的药物 :门诊处方中约 6 2 3%含有抗生素 ,诊断为普通感冒的患儿 6 2 0 %左右接受抗生素治疗 ,几乎所有使用抗生素者均未进行细菌学检查。结论 医院药品使用总体上虽有下降趋势 ,但抗生素滥用现象仍十分严重 ,从管理、宣传。

重庆医科大学儿童医院急性呼吸道感染住院患儿病毒病原学分析

目的分析住院急性呼吸道感染(ARI)患儿病毒病原检测结果,为临床儿童急性呼吸道感染提供病毒病原学诊断依据。方法选择2003年4月至2005年3月重庆医科大学儿童医院呼吸内科住院治疗的急性呼吸道感染患儿,取其鼻咽分泌物做免疫荧光检测筛查7种常见呼吸道病毒抗原,包括呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒、流感病毒A及B型、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,对检测标本阳性的病例进行统计分析。结果1052份标本中,阳性标本409份,占38.88%。其中RSV阳性标本360份,占总阳性标本例数的88.02%,副流感病毒Ⅲ37份占9.05%;RSV发病高峰时期在12月至次年2月和7、8月两个时期;RSV感染多见于3岁以下,发病高峰年龄为2～6个月,男女发病比例为2.24∶1。结论2003～2005年重庆地区急性呼吸道感染的病毒病原体仍以RSV为主。

Mina和IL-4基因交互作用与儿童哮喘相关性研究

目的研究Mina基因rs4857304（G/T）位点、IL-4基因位点rs2243248（T/G）和rs2070874（T/C）单核苷酸多态性与中国汉族儿童过敏性哮喘发病相关性,同时对3个基因位点之间交互作用进行分析。方法采用病例对照研究,MALDI-TOF技术进行IL-4和Mina位点基因分型。观察不同基因型和等位基因频率在哮喘和对照组中的分布差异,用MDR软件分析各位点之间交互作用。结果共纳入哮喘患儿202例年龄在6.97±2.85岁之间,对照组191例年龄在8.14±3.13岁之间。Mina的rs4857304位点,在哮喘组和对照组等位基因频率比较差异具有统计学意义（P=0.0199,OR=1.477,95%CI=1.062~2.052）,哮喘组rs4857304位点等位基因T频率高于对照组,而两组之间该位点基因型分布比较差异无统计学意义（P〈0.05）。IL-4基因位点rs2243248和rs2070874基因型和等位基因频率在两组比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。MDR交互作用分析显示,IL-4基因位点rs2243248和Mina基因位点rs4857304构成的2个位点最佳模型;IL-4基因位点rs2243248、rs2070874和Mina位点rs4857304构成的3个位点最佳模型两组比较均有统计学差异（P〈0.05）。结论 Mina基因位点rs4857304与过敏性哮喘具有相关性,同时IL-4位点rs2243248,rs2070874与Mina rs4857304均具有明显交互作用。

儿童肾病综合征体液免疫指标与疗效观察

目的 探讨儿童肾病综合征(肾病)免疫球蛋白 IgG、IgA、IgM、IgE及补体C3 水平与肾上腺皮质激素敏感性的关系,以了解肾病的发病机理及指导临床治疗。方法 分别采用散射比浊法检测血清IgG、IgA、IgM、C3 及ELISA法检测血清IgE。结果 原发性肾病患儿与正常对照组比较,血清 IgA、C3 无显著差异,肾病患儿血清 IgG水平明显低于正常儿童,IgM、IgE明显高于正常儿童,单纯性肾病与肾炎性肾病结果一致。而在激素应用方面,单纯性肾病与肾炎性肾病对激素治疗的敏感性有非常显著性差异χ2=18.48(P<0.005);原发性肾病患儿血清 IgG降低组与 IgG正常组对激素治疗的敏感性无显著性差异χ2=1.26(P>0.05),IgE升高组与 IgE正常组对激素治疗的敏感性有非常显著性差异χ2=12.46(P<0.005)。结论 原发性肾病综合征患儿存在免疫球蛋白合成异常,可能与患儿体液免疫紊乱有关。激素治疗的敏感性与 IgG水平高低无关,而与肾病综合征临床分型(单纯性肾病、肾炎性肾病)及 IgE水平高低有关:单纯性肾病对激素治疗敏感;而肾炎性肾病对激素耐药和依赖;IgE升高的肾病患儿对激素治疗敏感,IgE正常的肾病患儿却对激素有耐药和依赖。

儿童斑秃与Th1/Th2型细胞因子关系的临床研究

目的:探讨Th1/Th2细胞因子平衡失调在斑秃发病中的作用,以及Th1型细胞功能与斑秃发病的关系。方法:对45例斑秃患儿按其严重程度分为局限性斑秃(Localizef alopecia areat apatients,LAA)活动期组35例,全秃(Alopecia totalis patients,AT)及普秃(Alopecia universalis patients,AU)为一组10例,并以25例健康儿童为正常对照组作为研究对象。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测在卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)治疗前后3个月血清中IFN-γ、IL-12及IL-4、IL-10水平。结果:①斑秃患儿存在Th1/Th2细胞因子平衡紊乱,表现为血清中IFN-γ均明显高于正常组儿童,且AT/AU组明显高于LAA组;IL-12水平在LAA组与正常组儿童无显著差别,但AT/AU组明显高于正常对照组;而IL-4、IL-10水平在LAA组及AT/AU组与正常对照组相比均无显著性差异。②BCG-PSN治疗后可使斑秃患儿血清中IFN-γ水平较治疗前明显下降,同时IL-12水平在LAA组较治疗前也明显下降,但AT/AU组治疗前后无显著差别。而IL-4、IL-10水平治疗前后均无显著性差异。③血清中IFN-γ与IL-12水平成显著正相关。结论:①斑秃的发病与Th1/Th2细胞因子平衡失调有关,表现为Th1型细胞反应亢进,其中可能主要与IFN-γ、IL-12水平有关。②血清IFN-γ、IL-12水平高低可以作为提示斑秃病情严重性的指标。

741例儿童急性呼吸道感染病毒病原学研究

目的了解2003—2004年重庆地区儿童急性呼吸道感染病毒病原在季节、呼吸道疾病、年龄、性别方面的差异，为临床提供相应的治疗和预防措施。方法对741例住院确诊急性呼吸道感染的患儿抽取其鼻咽分泌物，采用直接免疫荧光法检测7种病毒即呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、流感病毒A、B。结果儿童急性呼吸道感染病毒病原的总阳性率与季节、呼吸道疾病、年龄有关，与性别无关。冬季、毛细支气管炎、29d至6个月婴幼儿病毒检出率最高，春季、上感、3岁以上儿童病毒检出率最低。在7种感染病毒中，以RSV占首位，阳性率为87．3％，其次递减为副流感病毒Ⅲ、腺病毒、流感病毒A。其中RSV在0—6个月、毛细支气管炎患儿中检出率最高，3岁以上、上感儿童检出率最低；腺病毒常见于夏季、上感、3岁以上、女性儿童；流感病毒A则多见于夏季、上感儿童。结论通过检测儿童呼吸道感染疾病的病毒病原，不仅可对临床提供快速、准确的诊断依据，防止滥用抗生素。对临床表现无特异性者，还可通过季节、疾病、年龄等流行病学资料来鉴别病毒病原，必要时应进行病毒抗体或病毒血清学检查，以便治疗和预防，降低病毒感染率。

Mina基因单核苷酸多态性与儿童变应性哮喘关联研究

目的研究Mina基因单核苷酸多态性(SNPs)与重庆地区汉族儿童变应性哮喘的相关性。方法采用病例对照研究。基质辅助激光解吸电离飞行间质谱技术(MALDI-TOF)进行Mina位点基因分型,以观察各位点不同基因型和等位基因频率在哮喘组和对照组中的分布差异。显性和隐性遗传模型用来比较哮喘组和正常组rs4857304位点基因型之间的差异。结果共纳入支气管哮喘患儿202例,对照组191例。Mina的rs4857304位点在哮喘组和对照组等位基因频率比较,差异有统计学意义(P=0.019 9),哮喘组rs4857304位点等位基因T频率高于对照组。通过隐性遗传模型分析发现,rs4857304位点主要等位基因T纯合型,即TT型和GG+GT型相比,在两组比较差异有统计学意义(P=0.028 2,OR=1.568,95%CI=1.048～2.346)。结论Mina基因rs4857304位点与儿童变应性哮喘相关。

糖皮质激素瘤内注射治疗婴儿血管瘤对免疫功能影响的研究

目的研究局部注射糖皮质激素治疗婴儿血管瘤对患儿免疫功能的影响。方法选择1岁以内血管瘤患儿30例，采用曲安奈德40mg／次及倍他米松磷酸钠5mg／次瘤内注射进行治疗。分别于治疗前及治疗后2周、4周、6周、8周、3个月、6个月测定血清IgA、IgG、IgM及C3含量。治疗前后2～4周测定淋巴细胞转化率。结果治疗后血清免疫球蛋白及补体C3含量无明显减少，治疗后血清IgA、IgG、IgM及C3平均值低于治疗前，经配对t检验，差异无统计学意义（P〉0．05）；治疗前后淋巴细胞转化率无明显变化，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论按本研究所用剂量瘤内注射糖皮质激素治疗婴儿血管瘤，患儿血清免疫球蛋白、补体C3及淋巴细胞转化率无明显变化，说明对患儿体液免疫及细胞免疫功能无明显影响。

特异性反义寡核苷酸抗小鼠呼吸道合胞病毒感染的研究

目的比较研究特异性抑制呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)的反义核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,AS-ODN)和利巴韦林对RSV感染小鼠的治疗作用,寻求安全有效的抗RSV药物。方法特异性AS-ODN和利巴韦林滴鼻治疗RSV感染BALB/c鼠,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度,RT-PCR和免疫组织化学分析RSVmRNA和蛋白表达水平,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞计数、肺组织病理学检查了解气道炎症和治疗副作用。结果0.2、0·4mgAS-ODN和0.8mg利巴韦林能降低RSV感染小鼠肺组织病毒滴度,空斑抑制率分别为34.48%、46.75%和23.02%,与感染对照组比较差异显著(P<0·05)。0.4mgAS-ODN抑制RSVmRNA和蛋白表达,抑制率分别为30.54%和29.41%,0.4mg利巴韦林治疗降低17.65%的RSV蛋白表达。AS-ODN和利巴韦林都降低RSV感染小鼠BALF中白细胞总数,对肺组织病理性改变没有明显改善作用,与感染对照组比较差异不显著(P>0.05)。单独AS-ODN和利巴韦林滴鼻不会引发明显肺炎症病理损害。结论AS-ODN在小鼠体内有比利巴韦林更强的抗RSV作用,经滴鼻治疗没有明显毒副作用,是安全而有效的抗RSV制剂。

脱氧核酶研究进展

运用体外分子进化技术 ,从人工合成的随机序列DNA库中筛选出多种不同结构的脱氧核酶 ,其催化活性已扩展到RNA切割、DNA激酶、DNA连接、DNA切割、DNA过氧化、金属螯合等多种酶活性。主要论述脱氧核酶的体外筛选 ,催化特性和影响因素 。

肾病综合征患儿免疫球蛋白检测与应用激素的探讨

目的检测原发性肾病患儿IgG、IgA、IgM、IgE、C3水平,探讨肾病患儿对肾上腺皮质激素(泼尼松)的敏感性,了解肾病的发病机制,指导临床治疗。方法分别采用散射比浊法检测血清IgG、IgA、IgM、C3及ELISA法检测血清IgE。结果原发性肾病患儿与正常对照组比较,血清IgA、C3无显著差异,肾病患儿血清IgG水平明显低于正常儿童,IgM、IgE明显高于正常儿童,单纯型与肾炎型肾病结果一致。单纯型与肾炎型肾病对激素治疗敏感性比较有非常显著性差异(x2=18.48 P< 0.005);原发性肾病患儿血清IgE升高组与IgE不升高组对激素治疗的敏感性比较有非常显著性差异(x2=12.46 P< 0.005)。结论原发性肾病综合征患儿存在免疫球蛋白合成异常,可能与患儿体液免疫紊乱有关。而激素治疗敏感性与肾病综合征临床分型及IgE水平高低有关。

CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究

目的:探讨CpG寡脱氧核苷酸链(CpG ODN)体外对EB病毒(EBV)复制的抑制作用。方法:CpG ODN体外预处理人外周血单个核细胞(PBMC)后感染EBV,用荧光定量PCR和ELISA分别检测培养后PBMC中EBV拷贝数和培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)的水平,了解不同剂量、不同时间CpG ODN预处理PBMC中EBV复制和PBMC产生IFN-γ之间的关系。结果:(1)不同浓度CpG ODN预处理组的EBV拷贝数均低于未处理组(P<0.05),其中10mg/LCpG ODN预处理组EBV拷贝数最低,为(3.85±0.37)×108基因拷贝/L;(2)CpG ODN预处理48h组的EBV拷贝数(11.32±0.83)×108基因拷贝/L低于其余各预处理时间组的EBV拷贝数(P<0.05);(3)不同浓度CpG ODN预处理组培养上清液中的IFN-γ均高于PBMC组和PBMC+EBV组(P<0.05),其中10mg/LCpG ODN处理组IFN-γ量最高(66.27±6.29)ng/L;(4)CpG ODN预处理48h的PBMC+CpG ODN+EBV组培养上清液中IFN-γ(51.74±4.09)ng/L高于其余各预处理时间组和PBMC组及PBMC+EBV组(P<0.05)。结论:CpGODN作为一种新型的免疫调节剂,在体外能有效抑制EBV复制,其作用机制可能与诱导PBMC产生IFN-γ有关。

婴儿呼吸道合胞病毒感染与儿童哮喘

呼吸道合胞病毒 (RSV)是婴儿喘息性下呼吸道感染最常见的病原 ,婴儿期严重RSV感染是以后发生儿童哮喘的高危因素。动物哮喘模型实验表明致敏前后RSV感染都可加重气道高反应性。RSV感染与哮喘相关性的机制涉及对变应原致敏作用的增强、生后早期RSV感染诱导辅助性T细胞 2反应及与特应性的协同作用。

IL-10与树突状细胞的免疫调控作用

IL 10是一种重要的抗炎性细胞因子 ,近年发现在树突状细胞的免疫调控中具有重要作用。IL 10可抑制树突状细胞的成熟及产生IL 12 ,有助于树突状细胞诱导Th2反应。内源性或外源性IL 10在树突状细胞诱导无能 /调节T细胞中具有重要作用。许多因素影响树突状细胞分泌IL 10 ,从而对疾病的发生发展产生影响。

卡介苗接种预防毛细支气管炎婴儿日后发生喘息的探讨

为观察卡介苗 (BCG)单用或联用干扰素γ(IFN_γ)和维生素A(VitA)对毛细支气管炎 (毛支 )患儿结核菌素纯蛋白衍化物 (PPD)皮肤试验、喘息发作及单核细胞源性细胞因子白细胞介素18(IL_18)水平的变化。给予44例毛支患儿单独BCG或合并IFN_γ/VitA治疗 ,于治疗前和3个月后进行PPD皮试 ,测定外周血单个核细胞体外产生IL_18的水平。随访时间平均1年 ,观察喘息发作情况。未接受BCG接种的19例毛支婴儿作为对照组。结果BCG接种后PPD平均硬结直径大于干预前及毛支对照组恢复期 ,以合并IFN_γ、VitA治疗组更为突出。BCG接种组1年内喘息发作频率低于对照组恢复期。干预后IL_18水平明显升高 ,尤以合并IFN_γ、VitA治疗组为高 ;PPD皮试强度与IL_18水平呈正相关。提示BCG可促进毛支患儿PPD皮试阳转率 ,增强IL_18活性 ,具有预防毛支患儿日后发展为哮喘的作用。IFN_γ。

辛伐他汀对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及白细胞介素-1β表达的影响

目的观察炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)在阿霉素肾病大鼠发生肾小球硬化过程中的表达,探讨辛伐他汀保护阿霉素肾病大鼠肾脏的机制。方法雄性SD大鼠分为正常对照组、阿霉素肾病组(模型组)和阿霉素肾病辛伐他汀治疗组(治疗组),分别灌胃给药11周。免疫组化法观测肾组织中IL-1β的定位表达,半定量RT-PCR技术检测肾组织IL-1β mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测血清和肾组织中IL-1β的水平,光镜观察肾小球硬化的情况。结果模型组肾组织IL-1β的表达明显增强(P<0.01),伴有明显的肾小球硬化及肾功能损害(P<0.01);与模型组比较,治疗组肾组织IL-1β的表达、肾小球硬化及肾功能损害均减轻(分别P<0.05、P<0.01、P<0.05)。结论辛伐他汀可能通过降低肾组织内IL-1β的表达,对肾脏起保护作用。

川芎嗪对新生鼠缺血缺氧脑损伤FOS蛋白表达的影响

目的 研究实验性大鼠缺血缺氧脑损伤 (HIBD)时FOS蛋白的表达及川芎嗪对FOS蛋白表达的作用。方法 采用用 7日龄SD新生鼠结扎左侧颈总动脉并进行缺氧 ,制备HIBD模型 ,应用免疫组化方法观察川芎嗪对HIBD新生鼠海马和皮质部位FOS蛋白表达的影响。结果 生理盐水对照组海马、皮质部位FOS表达明显增强 ;经川芎嗪干预后 ,HIBD新生鼠海马、皮质FOS蛋白表达均显著降低 (P <0 .0 5 )。结论 提示川芎嗪可抑制缺血缺氧脑损伤FOS蛋白的表达 。

裸鼠呼吸道合胞病毒感染的动物模型

呼吸道合胞病毒(RSV)是全世界婴幼儿下呼吸道感染的首位病毒病原体,免疫缺陷个体容易发生严重感染,目前尚无理想RSV感染动物模型用于研究。我们用细胞免疫缺陷裸鼠感染RSV,旨在建立理想的动物模型,为RSV感染的防治研究奠定基础。裸鼠滴鼻感染RSV后肺组织分离到病毒,直接免疫荧光检测到支气管肺泡灌洗液RSV抗原阳性,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度在感染后第3天达高峰,并持续到第9天仍能检测到病毒。免疫组化检测RSV抗原主要分布在细支气管、毛细支气管和肺泡上皮细胞胞浆内。肺组织病理学显示RSV感染导致裸鼠淋巴细胞浸润为主的肺间质性炎症,电镜分析超微结构可见到细胞内病毒颗粒和气血屏障的破坏。支气管肺泡灌洗液白细胞计数显示裸鼠RSV感染炎症高峰在感染后第9天。裸鼠RSV感染的病毒复制和病理改变特点与人相似,病毒持续高水平复制,是客观而实用的评价抗RSV制剂效果的小鼠模型。

大鼠发育早期接触变应原对Th1/Th2亚群功能及哮喘发生的影响

目的探讨妊娠期母鼠及其子代接触尘螨点刺液(Derp)对发育后期个体Th1/Th2平衡及哮喘发生的影响。方法Wistar大鼠根据母体妊娠期及新生早期是否接触Derp随机分为对照组、母Derp-仔Derp-组(母鼠和其子代均未接触Derp)、母Derp+仔Derp+组(母鼠和其子代均接触Derp)和母Derp+仔Derp-组(母鼠接触Derp,其子代未接触Derp),分别皮下注射Derp或生理盐水,30d龄时除对照组外,其余3组以卵白蛋白(OVA)为变应原致敏并雾化吸入,诱发哮喘发生。取血浆检测OVA特异性IgE抗体、收集外周血单个核细胞(PBMC)用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-4和IFN-γ水平,行支气管肺泡灌洗记录支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞的计数,留取肺组织行病理学检查。结果母Derp+仔Derp+组在哮喘建模后PBMC培养上清中IFN-γ水平显著低于母Derp-仔Derp-组,IL-4水平显著升高,IL-4/IFN-γ比值升高,OVA特异性IgE、BALF中嗜酸性粒细胞计数显著高于母Derp-仔Derp-组;母Derp+仔Derp-组与母Derp-仔Derp-组IL-4和IFN-γ水平差异均无统计学意义,OVA特异性IgE水平虽有增高,但差异不具统计学意义,BALF中嗜酸性粒细胞计数差异无统计学意义。母Derp+仔Derp+组Th2优势显著高于母Derp+仔Derp-组。结论胎鼠对于Derp跨胎盘的致敏作用可通过母体妊娠期间的免疫来完成,这一过程会根本上导致Th2优势免疫的发生,增加了变态反应性疾病的危险性。