目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对骨肉瘤细胞株UMR106成瘤及转移能力的影响。方法为获得较好的干扰效果,针对大鼠Villin2基因(Ezrin编码基因)设计2个发夹式RNA(shRNA)。合成后克隆入载体pGenSil-1,扩增并中量提取质粒,应用脂质体Lipo...目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对骨肉瘤细胞株UMR106成瘤及转移能力的影响。方法为获得较好的干扰效果,针对大鼠Villin2基因(Ezrin编码基因)设计2个发夹式RNA(shRNA)。合成后克隆入载体pGenSil-1,扩增并中量提取质粒,应用脂质体LipofectamineTM 2000转染进UMR106细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和West-ern印迹检测Ezrin的表达。选取效果最好的shRNA转染UMR106细胞并行G418筛选,传代扩增。扩增后细胞原位接种到SD大鼠胫骨结节,并设立正常细胞组和阴性对照组,观察记录肿瘤形成和大鼠存活时间,计数肺表面转移灶数目,镜检定位增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)在原发灶和肺转移灶内的表达。结果①shRNA1干扰作用最明显,下调达90%。②移植时稳定转染细胞数约50%。③实验组与对照组均100%成瘤,成瘤时间正常细胞组为(10.25±1.07)d,阴性对照组为(10.08±0.88)d,实验组为(10.30±1.08)d,三者间没有明显差别(P>0.05);实验组存活时间(42.30±17.25)d明显长于正常细胞组(20.60±11.70)d(P<0.01)和阴性对照组(22.40±7.42)d(P<0.01);实验组肺转移灶数目明显低于正常细胞组(P<0.01)和阴性对照组(P<0.01),分别为(39.40±51.86)个、(124.60±39.78)个和(117.60±36.48)个;阴性对照组中原发灶和肺转移灶内均有EGFP表达,而实验组肺转移灶内未见EGFP表达。结论Ezrin蛋白是骨肉瘤肺转移中的一个关键因子,干扰Ezrin蛋白表达能抑制其肺转移的发生,可以作为预防肺转移的靶点。展开更多
文摘目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对骨肉瘤细胞株UMR106成瘤及转移能力的影响。方法为获得较好的干扰效果,针对大鼠Villin2基因(Ezrin编码基因)设计2个发夹式RNA(shRNA)。合成后克隆入载体pGenSil-1,扩增并中量提取质粒,应用脂质体LipofectamineTM 2000转染进UMR106细胞。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和West-ern印迹检测Ezrin的表达。选取效果最好的shRNA转染UMR106细胞并行G418筛选,传代扩增。扩增后细胞原位接种到SD大鼠胫骨结节,并设立正常细胞组和阴性对照组,观察记录肿瘤形成和大鼠存活时间,计数肺表面转移灶数目,镜检定位增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)在原发灶和肺转移灶内的表达。结果①shRNA1干扰作用最明显,下调达90%。②移植时稳定转染细胞数约50%。③实验组与对照组均100%成瘤,成瘤时间正常细胞组为(10.25±1.07)d,阴性对照组为(10.08±0.88)d,实验组为(10.30±1.08)d,三者间没有明显差别(P>0.05);实验组存活时间(42.30±17.25)d明显长于正常细胞组(20.60±11.70)d(P<0.01)和阴性对照组(22.40±7.42)d(P<0.01);实验组肺转移灶数目明显低于正常细胞组(P<0.01)和阴性对照组(P<0.01),分别为(39.40±51.86)个、(124.60±39.78)个和(117.60±36.48)个;阴性对照组中原发灶和肺转移灶内均有EGFP表达,而实验组肺转移灶内未见EGFP表达。结论Ezrin蛋白是骨肉瘤肺转移中的一个关键因子,干扰Ezrin蛋白表达能抑制其肺转移的发生,可以作为预防肺转移的靶点。