布地奈德对人气道上皮9HTEo-细胞增殖的影响及机制

探究布地奈德（budesonide,BUD）对人气道上皮9HTEo-细胞增殖的影响及机制,利用CCK-8法检测BUD对9HTEo-细胞增殖的影响,荧光显微镜观察经BUD处理后9HTEo-细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞周期分布变化,Western blot检测p27kip1蛋白表达.CCK-8法结果显示3-10μmol/L BUD对细胞具有显著的抑制作用（P〈0.01）;荧光显微镜下,1-10μmol/L BUD处理后细胞可见明显的增殖受抑、凋亡形态;流式细胞术检测G0/G1期细胞随着BUD浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Western blot检测结果提示BUD能使p27kip1表达增加.由此可见,BUD对人气道上皮细胞株9HTEo-具有显著增殖抑制作用,其作用与提高p27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期有关.

视黄酸核受体γ重组腺病毒构建及其鉴定

目的构建携带大鼠视黄酸核受体γ（retinoic acid receptor γ，RARγ）的重组腺病毒，为研究RAR3,在骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）成神经分化中的作用奠定基础。方法体外扩增大鼠础研基因，将其定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAd Trace—TOX构建重组质粒pAdTrace—RARγ，并在BJ5183菌中与骨架质粒pAd Easy-1重组获得腺病毒载体pad—RARγ，Pac I酶切后转染HEK293细胞包装腺病毒。腺病毒Ad—RARγ感染大鼠MSCs，Real—time PCR和Western印迹检测RARγ的表达。结果PCR，酶切及测序均证实础研正确克隆至腺病毒质粒载体中，Ad—RARγ对MSCs感染率达60％～70％，并明显增强础研基因和蛋白的表达。结论成功构建携带RARγ的重组腺病毒，并具有上调大鼠MSCsRA脚基因和蛋白表达的功能。