激酶mTORC2在EAE模型中对致病性CD4^(+)T细胞的调控作用

目的研究mTORC2信号缺陷减轻EAE临床症状和其对致病性CD4^(+)T细胞的调控机制。方法通过MOG35-55肽免疫分别诱导Rictor^(fl/fl)CD4cre(Rictor^(-/-))和Rictor^(fl/fl)(WT)小鼠,记录其临床症状分数和体质量变化情况,应用流式细胞术检测致病性CD4^(+)T细胞亚群的数目、过氧化脂质水平和线粒体来源的ROS水平。结果Rictor^(-/-)小鼠中EAE临床症状比WT小鼠更轻,致病性CD4^(+)T细胞更少,且这群细胞更易发生铁死亡。结论mTORC2信号缺陷通过促使致病性CD4^(+)T细胞发生铁死亡来减轻EAE的临床症状。

SQLE敲除促进黑色素瘤肿瘤微环境CD8+T细胞浸润发挥抗肿瘤效应

目的探讨黑色素瘤细胞鲨烯环氧合酶(SQLE)基因敲除调控肿瘤微环境T细胞浸润影响机体抗肿瘤效应的作用及其分子机制。方法使用SQLE敲除的B16F10细胞系分别接种免疫完全和免疫缺陷小鼠,明确基因敲除对肿瘤细胞恶性表型的自主和非自主性调控,进一步使用抗体阻断、Luminex多因子检测和流式细胞等技术探索SQLE基因敲除对细胞因子/趋化因子分泌及免疫浸润的影响,结合生物信息学分析,验证SQLE表达与免疫浸润和临床预后的相关性。结果与免疫缺陷型小鼠相比,敲除SQLE显著抑制免疫完全小鼠肿瘤增殖,延长小鼠生存期。SQLE敲除诱导肿瘤细胞分泌细胞因子和趋化因子,增加肿瘤微环境CD8+T细胞浸润从而改善机体抗肿瘤效应。生物信息学分析提示SQLE及其对应的免疫浸润标志物与黑色素瘤患者临床预后明显相关。结论SQLE通过细胞因子和趋化因子调控肿瘤微环境参与机体抗肿瘤效应,有望成为新的肿瘤免疫药物靶点和疗效预测分子指标。

乳腺癌淋巴结转移动物模型的建立及评价

目的建立不同乳腺癌淋巴结转移的动物模型,并评价其效果。方法取6~8周龄BALB/c雌性小鼠60只,采用4T1乳腺癌细胞悬液注射小鼠不同部位等人工移植方法构建6种淋巴结转移动物模型(n=10),另采用小鼠乳腺肿瘤病毒介导多瘤病毒中间T抗原(mouse mammary tumor virus-polyoma middle T antigen,MMTV-PyMT)转基因小鼠作为肿瘤自发淋巴结转移模型(n=5),并从操作可行性、病理组织学观测、肿瘤生长速度及小鼠生存等多方面综合评价不同淋巴结转移模型的优劣特征。结果7种转移模型方法中有4种成功建立淋巴结转移的动物模型,其中PyMT小鼠自发淋巴结转移模型临床复现情况最佳,成瘤率可达100%,但存在实验标准化差的弊端;后脚掌-腘窝淋巴结模型淋巴结发生转移速度最快,易操作且重复性高,成瘤率也可达100%,适合用于淋巴结转移相关研究;腿部-腹股沟淋巴结模型操作简单,重复率高,可达100%,但是其转移时间较后脚掌-腘窝淋巴结模型略长;腹股沟淋巴结-对侧淋巴结模型存在操作较难、荷瘤成功率仅为50%、重复性差的缺陷;另外3种荷瘤模型(舌下-颈内静脉肩胛舌骨肌淋巴结模型、骨髓内-腹股沟淋巴结模型及右上背皮-腋窝淋巴结模型)均未能在短时间内成功建立淋巴结转移模型,在病理切片中未观察到肿瘤细胞的存在。结论后脚掌-腘窝淋巴结模型成瘤效果好,最适合用于开展乳腺癌淋巴结转移相关研究。