免疫学检验实验教学改革与实践

针对传统教学模式存在的弊端,我们在《免疫学检验》实验教学中开设了综合性、设计性实验,将科研成果引入实验教学,狠抓实验后专题讨论,组织学生定期到检验科参观学习等一系列教学改革,充分体现了学生的主体地位和教师的主导作用,促进了学生综合素质的全面提高。

留学生医学免疫学教学实践和思考

医学免疫学是医学留学生的一门重要的医学基础课,为了提高留学生免疫学课程的教学质量,更好地达到培养目标的要求,根据以往经验,就留学生免疫学教学中教师语言运用能力的培养、教材的选择、教学内容的组织、多种教学方式的灵活运用以及中国文化的传输等方面进行了总结和分析,并提出了目前存在的一些问题及解决思路。

云芝黄芪有效组分对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:应用云芝黄芪有效组分单方及复方治疗肿瘤小鼠,以此来验证云芝黄芪有效组分单方及复方抗肿瘤的免疫调节活性。方法:建立艾氏腹水癌(EAC)实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组,每组10只:生理盐水组(NS,0.1 mL.kg-1.d-1)、阿霉素单纯化疗组(AMD,4 mg.kg-1.d-1,0.2 mL,连续3 d)、云芝糖肽组(PSP,250 mg.kg-1.d-1,0.2 mL)、黄芪多糖组(APS,250 mg.kg-1.d-1,0.2 mL)、云芝黄芪复方组(PSP+APS,250 mg.kg-1.d-1,0.1 mL)和阿霉素云芝黄芪综合治疗组(AMD+PSP+APS,用量同上)。分别治疗30 d后采用免疫细胞化学法检测荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化情况,计算脏器指数、抑瘤率,并与对照组及化疗组进行比较。结果:云芝糖肽组和云芝黄芪复方组小鼠的CD3+,CD4+T细胞百分率以及CD4+/CD8+均显著高于对照组(P<0.05),CD8+T细胞的百分率较阿霉素化疗组显著降低(P<0.05);综合治疗组CD3+,CD4+T细胞百分率显著高于单纯化疗组(P<0.05);单纯化疗组小鼠胸腺指数较对照组明显降低(P<0.05),而综合治疗组的胸腺指数显著高于单纯化疗组(P<0.01);并且各给药组肿瘤质量均显著低于NS对照组(P<0.05)。结论:云芝糖肽、云芝黄芪复方对荷瘤小鼠及经化疗后的荷瘤小鼠均具有免疫增强作用。

云芝糖肽、丹参酮ⅡA对荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用

目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)、云芝糖肽组(PSP)、丹参酮Ⅱ组(TanⅡA)、复方组(PSP+TanⅡA)和综合治疗组(PSP+TanⅡA+ADM),并给予相应药物治疗,应用免疫组化法检测小鼠脾脏IL-2、IL-2R和肿瘤组织中周期蛋白CDK4以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,并计算抑瘤率、脏器指数,结果与对照组和化疗组进行比较。结果:云芝糖肽组小鼠脾脏IL-2、IL-2R水平高于NS组和化疗组(P<0.05),各药物治疗组肿瘤Bax均高于化疗组,CDK4均低于NS组(P<0.05),复方组Bax高于NS组(P<0.05),云芝组糖肽、丹参酮ⅡA组、综合治疗组CDK4低于化疗组(P<0.05),云芝糖肽组、复方组与综合治疗组肿瘤Bcl-2低于NS组(P<0.05),各药物治疗组对肿瘤有明显的抑制作用(P<0.05),复方组胸腺指数高于NS组,各药物治疗组胸腺指数均高于化疗组(P<0.05)。结论:云芝糖肽、丹参酮ⅡA对EAC荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤和免疫调节作用,并能缓解化疗药物所引起的毒副作用,二者联用存在一定协同作用。

云芝、丹参对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节的作用

目的研究云芝、丹参有效成分抗肿瘤作用及其免疫调节机制。方法建立EAC荷瘤小鼠,并随机分为6组,连续给药30d后,测定其抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数以及外周血淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+。结果运用单因素方差分析进行统计学分析。结果云芝、丹参对肿瘤均有明显的抑制作用(P<0.01);云芝+丹参组胸腺指数高于NS对照组(P<0.05),各用药组胸腺指数明显高于阿霉素对照组(P<0.05);外周淋巴细胞分群:云芝组,云芝+丹参组CD3+、CD4+百分率高于NS对照组(P<0.05);各用药组CD3+、CD4+百分率明显高于阿霉素对照组(P<0.05);除云芝+丹参+阿霉素组外,各用药组CD4+/CD8+比值高于NS组(P<0.05),明显高于阿霉素组(P<0.01)。结论云芝、丹参具有明显的抗肿瘤作用和免疫调节作用,二者联用对免疫调节有一定协同作用,其抗肿瘤机制可能通过提高免疫力来实现。

应用基因芯片技术观察云芝丹参对鼻咽癌患者的免疫调节作用

目的为进一步研究云芝丹参的免疫调节功效,利用基因芯片技术筛选鼻咽癌患者服用云芝丹参后免疫功能指标的变化。方法收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂组,采用基因芯片技术检测鼻咽癌患者服用中药云芝丹参后免疫功能指标的变化,并与安慰剂组比较分析。结果用基因芯片技术检测中药组鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后第7天,TNFR2基因表达水平较安慰剂组明显下调(P<0.05)。结论基因芯片技术是筛选肿瘤患者免疫功能指标变化的一种快捷、方便、灵敏的方法。

结核菌H37Ra免疫小鼠后机体抗结核细胞免疫功能的研究

目的探讨小鼠皮内接种H37Ra后,细菌在体内的定植及机体能否产生针对结核菌的免疫力。方法用H37Ra皮内免疫小鼠后15、30、60 d,检测结核菌在小鼠体内脏器的定植;免疫后第30、60天,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后的增殖转化刺激指数、ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞受PPD刺激后IL-2、sIL-2R的表达量。结果小鼠脾、肺脏中有结核菌定植,并至少存活60 d;脾淋巴细胞30、60 d的刺激指数分别为(2.81±0.63)、(2.16±0.52),与BCG皮内接种组无显著性差异,与未免疫组有显著性差异(P<0.05);脾淋巴细胞IL-2、sIL-2R表达量分别为(126.88±8.11)、(91.26±7.29)pg/m l和(138.58±7.67)、(127.09±5.47)pg/m l,与BCG皮内接种组、未免疫组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论H37Ra免疫小鼠后能诱导机体产生特异性的抗结核免疫力,且免疫效果略优于BCG。

对高等医学双语教学若干问题的探讨

双语教学在我国高等医学院校已实施了数年,目前存在不少问题亟待解决。本文论述了双语教学的意义及其搞好双语教学的关键因素与关键环节,以及面临的困难和问题。

有机硒增强BCG细胞免疫效果的初步探讨

目的:探讨酵母硒(Yeast-based selenium,Se)对卡介苗(BCG)免疫效果的影响。方法:将小鼠分为4组:A组BCG皮内接种+喂硒、B组BCG皮内接种、C组单纯喂硒、D组对照组(control)。于接种4周、8周后取单个脾淋巴细胞,通过检测淋巴细胞增殖指数(Stimulation idex,SI)、IL-2、IFN-γ、细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活力及淋巴细胞颗粒酶B及穿孔素的表达量来评价机体抗结核的细胞免疫能力。结果:6项指标A与B组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);A组的SI、IL-2、IFN-γ、CTL杀伤活力,免疫4周后分别为2.61±0.24、(172.56±9.34)pg/ml、(131.89±3.32)pg/ml、(43.91±3.21)%(8周值分别为2.32±0.31、(138.04±9.67)pg/ml、(129.17±2.41)pg/ml、(39.92±6.45)%,均显著高于B组(4周值:(1.62±0.14)、(134.06±9.60)pg/ml、(105.89±4.62)pg/ml、(30.46±7.97)%;8周值:1.61±0.19、(101.42±7.76)pg/ml、(102.00±5.41)pg/ml、(28.14±5.70)%),P<0.05。结论:BCG与硒酵母有免疫协同作用,能诱导机体产生较强的抗结核的细胞免疫应答反应。

结核病血清学诊断进展

结核病的细菌学检查目前是结核病实验室诊断的金标准。由于痰涂片阳性率较低，镜检需要经验，难以区分环境分枝杆菌造成的假阳性；痰培养需时太长，因此细菌学检查对结核病的诊断价值有限。随着分子生物学技术的迅速发展，用高度敏感的方法检测结核分枝杆菌（简称结核杆菌）及其特异性DNA片段，如聚合酶链反应（PCR）、生物探针和基因芯片等，需要相应的检测设备和检测费用高而未能广泛推广。

结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的抗结核细胞免疫应答的研究

目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株感染的保护力。方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化;取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-γ;免疫后第8周,用MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4周后处死小鼠,测定小鼠肺脏荷菌量,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用。结果:H37Ra免疫小鼠脾脏CD3^+T细胞、CD4^+T细胞的百分率分别为(41.63±1.68)%、(27.08±0.58)%,显著高于NS对照组(38.34±0.74)%、(24.37±1.60)%(P<0.05)。H37Ra免疫组脾脏CD3^+T细胞、CD4^+T细胞及CD8^+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫组,但差异无统计学意义。脾淋巴细胞SI和IFN-γ水平检测均发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05),略高于BCG免疫组。感染4周后H37Ra组小鼠肺脏荷菌量与NS对照组比较下降0.954log_(10)CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05)。结论:H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相近。

重组耻垢分枝杆菌与微卡在鼠结核病免疫治疗作用中的比较

目的比较颗粒溶素/白介素-12重组耻垢分枝杆菌(rMS)和微卡作为免疫治疗佐剂在鼠结核病治疗中的效果及机制。方法结核分枝杆菌H37Rv感染Balb/c小鼠4周后,分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌(MS)、rMS、INH+PZA,rMS+INH+PZA、微卡+INH+PZA治疗6次,于第1次治疗后3个月处死小鼠,检测器官荷菌量、血清IL-12和IFN-γ分泌水平和肺、脾组织中颗粒溶素表达及观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果rMS+INH+PZA器官荷菌量明显低于微卡+INH+PZA、rMS和INH+PZA药物组;血清IL-12水平rMS+INH+PZA和单纯rMS组明显高于微卡+INH+PZA和INH+PZA组;IFN-γ分泌水平rMS+INH+PZA、单纯rMS组和微卡+INH+PZA明显高于单纯的药物组;用免疫组化检测到单纯rMS组和rMS+INH+PZA组在肺脾组织中颗粒溶素的表达;rMS+INH+PZA、微卡+INH+PZA、单纯rMS组和INH+PZA组肺组织病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛,正常肺泡结构被破坏。结论rMS和微卡对小鼠结核病有一定免疫治疗作用,rMS通过增强宿主Th1型免疫应答和GLS的抗菌活性有关,而微卡主要通过调节免疫应答发挥作用;rMS对临床常用的抗结核药协同作用优于微卡,为结核病的综合治疗打下实验基础。

结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力

目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果。方法:BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测淋巴细胞的刺激指数,ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4水平。另一部分免疫小鼠经腹腔感染结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuber-culosis,MTB)毒株H37Rv,4周后处死,测定小鼠脏器重量指数。取稀释的小鼠脾脏和肺脏匀浆接种于改良罗氏培养基,培养21天后计数脏器荷菌量。结果:H37Ra和BCG免疫小鼠脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组。感染4周后H37Ra和BCG组小鼠脏器重量指数较NS对照组均显著降低。H37Ra组小鼠脾脏和肺脏荷菌量与NS对照组比较分别下降了1.228log10CFU和0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性。结论:H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生Th1型免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相当。

r干扰素抗结核免疫作用的研究进展

r干扰素是重要的Th1型细胞因子，它可通过促进T细胞的增殖和分化，激活巨噬细胞，参与结核病的肉芽肿免疫反应等多方面发挥抗结核免疫作用。这些使得r干扰素在抗结核免疫治疗方面的研究受到重视，并取得一定的成功。

序贯免疫策略用于结核疫苗研究的进展

序贯免疫策略目前是结核疫苗研究领域的又一新趋势,拓展了结核疫苗研究的思路和方法。序贯免疫策略的疫苗形式称为初免-加强疫苗,其用于预防结核病前景广阔。本文就近年来序贯免疫策略在结核疫苗研究中的组合方式及其优势等方面进行综述。

结核杆菌H37Ra免疫小鼠后脾淋巴细胞的杀伤活性及免疫机制的研究

目的探讨结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,产生特异性的脾淋巴细胞杀伤活性及其免疫机制。方法(1)分别以结核杆菌H37Ra、BCG和PBS免疫小鼠后第30天及第60天,分离各组小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,以表达Ag85B分泌蛋白的Sp2/0细胞为靶细胞,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的杀伤率;(2)在免疫后第60天,小鼠脾淋巴细胞经PPD刺激后,以RT-PCR法检测穿孔素mRNA及颗粒酶BmRNA的表达。结果(1)结核杆菌H37Ra组脾淋巴细胞的杀伤率明显高于PBS对照组(P<0.05),略高于BCG组;(2)H37Ra组和BCG组穿孔素、颗粒酶mRNA的表达量均显著高于PBS组(P<0.05),H37Ra组穿孔素mRNA的表达量显著高于BCG组(P<0.05),但颗粒酶BmRNA的表达量两组无差异。结论结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,能增强脾淋巴细胞的杀伤活性,其机制可能与增加穿孔素、颗粒酶B的表达有关。

Ag85B DNA/H37Ra序贯免疫效果的探讨

目的:初步探讨含结核分枝杆菌Ag85B成熟蛋白的DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠产生的特异性免疫应答。方法:重组质粒pTB30m用碱裂解法制备后进行质量鉴定。用pTB30m肌注初次免疫小鼠2周后,H37Ra皮内加强免疫作为DNA-85B/H37Ra组,同时设定DNA-85B/BCG组、H37Ra组、BCG组及未免疫组。免疫4周或8周后,用ELISA法检测小鼠血清中抗PPD IgG抗体的水平和MTT法检测其脾淋巴细胞的刺激指数(SI)。结果:酶切鉴定pTB30m所含外源基因片段大小正确,并且纯度较高。DNA-85B/H37Ra组小鼠血清中抗PPD IgG水平、脾淋巴细胞的SI均显著高于未免疫组(P<0.05);其抗PPD IgG水平稍高于DNA-85B/BCG组、H37Ra组及BCG组,但它们之间无显著性差异(P>0.05);其脾淋巴细胞的SI显著高于H37Ra、BCG组(P<0.05),而与DNA-85B/BCG组比较,仅在4周有显著性差异。在DNA-85B/H37Ra组内,SI在4周显著高于8周(P<0.05),而血清中抗PPD IgG水平8周均显著高于4周(P<0.05)。结论:DNA-85B/H37Ra序贯免疫策略可以诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,初步证明其免疫效果略优于BCG。

肺腺癌A549细胞中TNIK通过Rho/ROCK/LIMK1调控微丝骨架形态

目的探讨肺腺癌A549细胞中TNIK调节微丝骨架形态的分子机制及其联合靶向有丝分裂化疗药物处理对癌细胞增殖与凋亡的影响。方法利用RNA-seq筛选稳定敲减TNIK表达后A549细胞差异表达基因,并分析微丝骨架组装相关基因的表达情况;通过RT-PCR、免疫印迹和双重免疫荧光染色分析TNIK调控微丝-微管骨架系统组装的分子机制,并联用靶向有丝分裂化疗药物紫杉醇处理癌细胞后,检测癌细胞的生长及凋亡情况。结果RNA-seq结果显示,敲减TNIK表达后的差异表达基因与有丝分裂进程密切相关;进一步分析发现TNIK表达可在转录水平显著抑制Rho通路相关基因RhoA/B、ROCK1/2和LIMK1表达(P<0.01),但对Rac与CDC42通路相关基因表达无显著影响。免疫荧光检测发现,敲减TNIK表达导致微丝骨架系统形态紊乱及有丝分裂异常。与对照细胞相比,联合紫杉醇处理的TNIK敲减组细胞增殖下调(P<0.01),而凋亡率显著增加(P<0.01)。结论肺腺癌A549细胞中TNIK通过Rho/ROCK/LIMK1调控细胞微丝-微管骨架系统形态,敲减TNIK可增强化疗药物对癌细胞增殖的抑制作用。

小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体的构建及其在鼠巨噬细胞中的表达

目的:构建小鼠胞内病原体抗性基因1(Ipr1)基因与EGFP基因融合表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7中的表达。方法:从C57BL/6J小鼠胸腺组织提取总RNA,以RT-PCR法调取Ipr1基因编码序列,克隆至pEGFP-C1载体中,筛选阳性克隆作PCR、酶切及测序鉴定后得到pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7,以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照。采用RT-PCR法检测Ipr1的RNA水平表达及用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及细胞内定位。结果:扩增出小鼠Ipr1基因编码序列,经PCR、酶切及测序鉴定证明得到正确的重组质粒pEGFP-Ipr1,脂质体瞬时转染小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达,Ipr1基因表达产物定位于细胞核内。结论:成功地调取小鼠Ipr1基因,构建了小鼠Ipr1基因与EGFP基因融合表达载体并在小鼠巨噬细胞株RAW 264.7得到了成功表达。Ipr1编码蛋白定位于细胞核内,提示其是一种调节蛋白。