PI3k/Akt信号通路及MMP-2、MMP-9在正常妊娠及自然流产绒毛组织中的表达

目的:检测磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinotidol 3-kinase/protein kinase B,PI3k/Akt)信号通路及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在早孕期正常妊娠和自然流产绒毛组织中的表达情况,并探讨其表达与自然流产的关系。方法:采用real-time PCR、免疫组织化学方法和Western blot技术检测20例早孕期自然流产绒毛组织与20例正常人工流产绒毛组织中PI3k、Akt、p-Akt、张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、MMP-2、MMP-9等表达情况。结果:荧光定量PCR结果显示,PI3k(P=0.000)、Akt(P=0.005)、MMP-9(P=0.000)的m RNA水平在自然流产组(SPO组)明显低于正常人工流产组(NOR组),PTEN的m RNA水平在SPO组则高于NOR组(P=0.000)。免疫组化结果显示PI3k(P=0.006)、Akt(P=0.000)、p-Akt(P=0.000)、MMP-9(P=0.000)在SPO组表达明显低于NOR组,PTEN的表达则呈现相反的趋势(P=0.000),MMP-2在SPO组与NOR组没有明显变化(P=0.092)。Western blot结果与免疫组化结果一致,PI3k(P=0.047)、Akt(P=0.011)、p-Akt(P=0.001)、MMP-2(P=0.893)、MMP-9(P=0.005)。结论:PI3k/Akt信号通路参与了早孕期自然流产的发生,可能通过影响MMP-9的表达而影响其侵袭功能。本研究对于揭示自然流产发生的分子机制具有重要意义,为临床上预防与治疗早期流产的发生提供了新的方向。

孕早期苯并(a)芘暴露对小鼠胚胎着床的影响

目的:探讨孕早期Ba P暴露对胚胎着床的影响,为进一步完善Ba P对雌性生殖功能的影响提供实验依据。方法:将60只孕鼠随机分为对照组和Ba P组,每组30只,每组再随机分成3小组,每组10只。从妊娠第1天对照组用玉米油、Ba P组用0.2 mg/(kg·d)剂量Ba P进行灌胃染毒,至妊娠的第4天(D4)、第5天(D5)、第6天(D6)处死并取材。计数小鼠胚胎着床点数目,ELISA方法检测小鼠血浆中雌激素和孕激素水平,荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学方法检测小鼠子宫内膜中雌激素受体-α(estrogen receptor-α,ERα)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)水平。结果:比较对照组与Ba P组的胚胎着床数,Ba P组的着床点数在妊娠D5和D6均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ba P组血浆雌激素水平和孕激素水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),不同染毒时间的雌激素水平与孕激素水平不同,由高到低依次为妊娠D6、D5、D4,各时间点的差异均有统计学意义(P<0.05);ERα的m RNA水平在Ba P组的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),不同染毒时间ERα的m RNA水平不同,妊娠D6的表达高于妊娠D4和D5,差异有统计学意义(P<0.05),PR的m RNA水平在Ba P组的表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot和免疫组化结果也表明苯并(a)芘暴露组小鼠子宫中ERα表达量升高,PR表达量下降。Western blot和免疫组化结果也表明Ba P组小鼠子宫中ERα表达量升高,PR表达量下降。结论:Ba P可能通过影响孕鼠雌孕激素水平及PR的表达模式,最终导致胚胎着床点数的下降。

小鼠围着床期子宫内膜甲基化CpG结合域蛋白2的表达规律

为研究甲基化CpG结合域蛋白2(methyl-CpG binding domain protein 2,MBD2)在围植入期小鼠子宫内膜的表达规律,通过采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)、Western blot和免疫组化技术检测未孕小鼠(d0)和不同孕天小鼠子宫MBD2的表达情况。qPCR结果显示,d0至d7的小鼠子宫内膜组织均有MBD2 mRNA表达,在d5至d7高表达。MBD2蛋白在子宫内膜的表达规律与qPCR结果相符。MBD2蛋白在孕d1到d4中度表达于腔上皮、腺上皮和基质细胞,在d5至d7基质细胞表达增强,主要表达于蜕膜区。假孕小鼠子宫内膜中,MBD2在腔上皮、腺上皮和基质细胞中中度表达,d5至d7基质细胞表达明显减弱。动物模型中,宫角注射MBD2基因反义寡聚脱氧核苷酸,可抑制MBD2的表达,降低人工诱导蜕膜化反应和蜕膜化标志物PRL的表达。MBD2在早孕小鼠子宫内膜的表达模式提示其可能参与了蜕膜化过程。

SF-1诱导小鼠子宫内膜基质细胞增殖及其机制的研究

该研究分离并鉴定了原代小鼠子宫内膜基质细胞(mouse endometrial stromal cell,m ESC)。过表达类固醇生成因子-1(steroidogenic factor-1,SF-1)可显著诱导该细胞的增殖能力、促进增殖相关基因PCNA(proliferating cell nuclear antigen)及PH3(phospho-histone 3)的蛋白质水平表达增高以及激活PI3K-AKT-m TOR信号通路;PI3K信号通路抑制剂LY294002和m TOR信号通路抑制剂Rapamycin等可抑制mESC中SF-1过表达所引起p AKT S473、pm TOR S2448、pp70S6K T389、p S6 S235/236和p4E-BP1 T37/46的蛋白质水平的增高。该研究初步揭示了SF-1表达与mESC增殖的相关性。