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凋亡蛋白Daxx与TRAF3相互作用的筛选及相互作用位点的鉴定
1
作者
张翠莉
成海恩
王应雄
《第四军医大学学报》
北大核心
2007年第9期826-830,共5页
目的:利用酵母双杂交技术在成人肝文库中筛选能与死亡结构域相关蛋白(Daxx)相互作用的蛋白,并用哺乳动物细胞中进行了免疫共沉淀验证,以进一步了解Daxx的功能.方法:利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增Daxx全长ORF,构建pDBLeu-Daxx载体.转化M...
目的:利用酵母双杂交技术在成人肝文库中筛选能与死亡结构域相关蛋白(Daxx)相互作用的蛋白,并用哺乳动物细胞中进行了免疫共沉淀验证,以进一步了解Daxx的功能.方法:利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增Daxx全长ORF,构建pDBLeu-Daxx载体.转化MaV203,检测细胞毒性和自激活作用,确定His基础表达的3AT浓度.依次转化成人肝cDNA文库.在营养缺陷型培养基上挑取三阳性克隆.进行回转实验和免疫共沉淀验证,并利用β-gal分析进行了相互作用结构域的鉴定.结果:筛库转化效率达到5.8×106个克隆.筛选到了一株能与Daxx相互作用的阳性克隆,DNA序列分析和同源检索表明该阳性克隆为肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3).通过回转及co-IP证实了TRAF3能与Daxx相互作用,β-gal分析发现TRAF3通过TRAFDomain与Daxx相互作用.结论:TRAF3通过TRAFDomain与Daxx相互作用,可能参与了Daxx的调控和功能,为进一步了解Daxx作用的分子机制奠定了基础.
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关键词
凋亡
死亡结构域相关蛋白
TRAF3
酵母双杂交
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职称材料
题名
凋亡蛋白Daxx与TRAF3相互作用的筛选及相互作用位点的鉴定
1
作者
张翠莉
成海恩
王应雄
机构
武警四川总队医院检验科
浙江
大学
医
学院
附属第二医院检验科
重庆医科大学公共卫生学院遗传学教研室
出处
《第四军医大学学报》
北大核心
2007年第9期826-830,共5页
文摘
目的:利用酵母双杂交技术在成人肝文库中筛选能与死亡结构域相关蛋白(Daxx)相互作用的蛋白,并用哺乳动物细胞中进行了免疫共沉淀验证,以进一步了解Daxx的功能.方法:利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增Daxx全长ORF,构建pDBLeu-Daxx载体.转化MaV203,检测细胞毒性和自激活作用,确定His基础表达的3AT浓度.依次转化成人肝cDNA文库.在营养缺陷型培养基上挑取三阳性克隆.进行回转实验和免疫共沉淀验证,并利用β-gal分析进行了相互作用结构域的鉴定.结果:筛库转化效率达到5.8×106个克隆.筛选到了一株能与Daxx相互作用的阳性克隆,DNA序列分析和同源检索表明该阳性克隆为肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3).通过回转及co-IP证实了TRAF3能与Daxx相互作用,β-gal分析发现TRAF3通过TRAFDomain与Daxx相互作用.结论:TRAF3通过TRAFDomain与Daxx相互作用,可能参与了Daxx的调控和功能,为进一步了解Daxx作用的分子机制奠定了基础.
关键词
凋亡
死亡结构域相关蛋白
TRAF3
酵母双杂交
Keywords
apoptosis
Daxx
TRAF3
yeast two-hybrid
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
R349.5 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
凋亡蛋白Daxx与TRAF3相互作用的筛选及相互作用位点的鉴定
张翠莉
成海恩
王应雄
《第四军医大学学报》
北大核心
2007
0
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