GW112 mRNA 3’端非翻译区特异性结合蛋白研究

目的:通过体外实验筛选出与GW112 mRNA 3’非翻译区临床特异性结合蛋白,并研究蛋白性质。方法:以稳定表达GW112基因的胃癌细胞SGC-7901为实验对象,体外转录法获得GW112 mRNA 3’非翻译区片段并用生物素标记,结合亲和素磁珠特异性吸附原理,从细胞总蛋白中纯化出与GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白。经过质谱鉴定得到蛋白信息,并用Western blot验证结果。结果:用磁珠纯化的蛋白样品经SDS-PAGE电泳后,取目的条带进行质谱分析发现存在核仁素蛋白,以核仁素单克隆抗体进行Western blot验证后发现与质谱结果一致。结论:核仁素是GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白的一种,并很可能对GW112 mRNA稳定性有直接影响,这为进一步揭示GW112在胃癌细胞抗凋亡机制中的作用奠定基础。