《临床检验仪器学》试题库管理系统的建设

探讨了《临床检验仪器学》试题库管理系统的设计思想和实现技术。采用Delphi7.0结合Word、Access2003数据库开发的试题库管理系统功能强大,操作简便,能完全满足《临床检验仪器学》试题库建设中,图文混编试题编辑管理和试题组卷与自动排版输出以及试题库安全保护的需要。同时软件具有较强的通用性,亦可应用于其他有关学科的试题库建设管理中。

电化学发光免疫分析及在临床检验中的应用

电化学发光免疫分析技术(ECLIA)是近年来发展的一项高新技术,作为一种痕量分析手段在物质分析中越来越得到重视。现已经应用于基础医学研究和临床疾病的诊断中,其应用前景十分可观。本文主要综述了电化学发光免疫分析的基本原理及其在临床检验中的应用。

肿瘤患者外周血活化血小板测定及其临床意义

目的:比较不同疾病状态下活化血小板测定值的差别及使用阿司匹林防治血栓的效果。方法:采用流式细胞仪测定126例肿瘤患者和60例非肿瘤患者外周血活化血小板CD62p和CD63的表达量,以及服用阿司匹林后的变化。结果:肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于非肿瘤患者(P<0.05),有血栓形成的肿瘤患者外周血的活化血小板CD62p和CD63的表达量明显高于无血栓形成的肿瘤患者(P<0.05),有血栓的肿瘤患者的活化血小板经过阿司匹林干预治疗后明显下降(P<0.05)。结论:测定活化血小板可以预测肿瘤患者存在高凝状态风险性的大小。同时,服用小剂量肠溶阿司匹林可以降低外周血活化血小板CD62p和CD63的值。

应用FITC系统建立非均衡竞争游离三碘甲腺原氨酸(FT_3)化学发光法

目的制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法。方法以T3-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化并联接辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)。用FITC标记T3-类似物。采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,通过非均衡竞争法原理,固相抗原与血清中FT3竞争结合抗T3抗体-HRP,通过标准曲线计算FT3浓度,建立方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine serum gamma globulin,BGG)包被(非FITC系统)的检测系统相比较。将本方法应用于临床120份血清标本的检测,定量结果与德国罗氏2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elec-sys 2010)定量结果进行比较。结果抗体经酶联免疫吸附实验证明对T3、具有高度特异性。应用FITC系统建立的非均衡竞争化学发光免疫分析标准曲线的线性R>0.99,线性范围0.25～50 pg/ml,分析灵敏度为0.25 pg/ml,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测。对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys2010定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数r=0.962 2,两者的测定值无显著性差异。结论制备的抗人T3多克隆抗体特异性强,以FITC系统为平台建立的非均衡竞争FT3检测化学发光法具有精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,达到临床测定的需求,可代替进口化学发光产品用于临床样本的检测。

藏红花素对人膀胱移行细胞癌T24细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的检测藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞癌T24细胞株裸鼠移植瘤的作用。方法12只裸鼠右后腿背侧皮下接种T24移植瘤细胞后随机分为PBS对照组(6只)和50mmol/L藏红花素治疗组(6只)。从接种后第28d开始,每3d一次于肿瘤局部注射给予PBS或藏红花素,每3d测量1次肿瘤大小,并绘制移植瘤生长曲线;处理后第21d杀鼠摘取移植瘤,光镜、电镜观察肿瘤组织形态改变;RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA表达;SP-免疫组织化学法分析sur-vivin、cyclinD1蛋白表达。结果藏红花素对人膀胱癌T24细胞裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,抑制率达28·7%。HE染色结果显示肿瘤标本内出现片状坏死灶;电镜观察可见凋亡的形态学改变;RT-PCR检测结果显示Bcl-2的表达水平下降,而Bax的表达水平上调;免疫组化结果显示经藏红花素处理后survivin、CyclinD1的表达下调。结论藏红花素能够抑制人膀胱癌T24细胞裸鼠移植瘤的生长,作用的分子机制与下调Bcl-2、survivin、cyclinD1和上调Bax基因表达有关。

RNA干扰沉默STAT3基因表达对膀胱癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨应用RNA干扰技术沉默信号转导和转录激活因子3(STAT3)基因对膀胱癌T24及5637细胞的影响。方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,转染人膀胱癌T24及5637细胞。通过半定量RT-PCR、Western印迹检测STAT3基因不同水平的表达情况,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验、流式细胞仪检测转染后细胞增殖及细胞周期的变化。结果成功构建pGenesil-1-shR-NA-STAT3重组质粒,并成功转染T24及5637膀胱癌细胞;半定量RT-PCR、Western印迹检测结果显示,重组质粒实验组细胞的STAT3基因表达在RNA及蛋白水平上显著低于对照组(P<0.05);MTT实验、流式细胞仪检测结果显示,重组质粒实验组细胞的增殖明显受到抑制并出现凋亡现象。结论pGenesil-1-shRNA-STAT3转染T24及5637膀胱癌细胞后,可有效抑制STAT3的表达,并抑制膀胱癌细胞的生长及增殖。

RNA干扰PLCε诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的实验研究

目的探讨以RNA干扰沉默人源磷脂酶Ce(phospholipase Cepsilon,PLCε)基因表达后诱导人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的作用和机制。方法脂质体介导重组阳性质粒pGenesil-PLCε(以下简称P)和阴性质粒pGenesil-NP(以下简称NP)转染BIU-87细胞48h后,用RT-PCR和Western blot检测转染前后PLCεmRNA和蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,电镜观察细胞形态改变。结果转染P质粒后可明显抑制PLCεmRNA和蛋白表达水平,抑制率分别为78.7%和76.6%;流式细胞术显示P质粒转染组细胞周期发生改变呈明显G0/G1期阻滞,并出现亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加(P<0.05);电镜观察P质粒转染组细胞可见凋亡小体。结论:RNA干扰沉默PLCε基因表达可诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡,其作用机制与细胞周期分布的改变有关。

人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的初步研究

探讨人白血病细胞系KG-1a中是否存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。瑞氏染色和吖啶橙染色分别观察白血病细胞系KG-1a细胞形态和RNA含量;流式细胞术检测细胞周期分布;免疫组化和流式细胞术检测KG-1a细胞CD34的表达;流式细胞术检测CD34+CD38–亚群细胞;烟酸己可碱Hoechst33342染色后用荧光显微镜观察KG-1a细胞中侧群(side population,SP)样细胞所占比例。结果显示,白血病细胞系KG-1a细胞核仁易见,形态原始;部分细胞RNA含量低,细胞处于G0/G1期的比例占15.5%。绝大多数细胞的胞浆和胞膜皆表达CD34抗原,KG-1a中CD34+细胞占96.3%,CD34+CD38–亚群细胞占7.02%;SP样细胞大致比例为7.60%。本研究表明,人白血病细胞系KG-1a中存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。

毒力蛋白CbpA抗肺炎链球菌侵袭性感染的实验研究

目的:原核表达肺炎链球菌毒力蛋白CbpA,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值。方法:分离培养TIGE4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将CbpA片段克隆到PET-32(a)原核表达载体内,测序鉴定后,原核表达及纯化CbpA;CbpA蛋白抗原主动和抗体被动免疫BALB/c小鼠,TIGR4型肺炎链球菌攻击,监测其生存时间。结果:获得了原核表达的重组抗原蛋白,Western blot鉴定证实为目的蛋白,镍柱纯化并透析复性可得到纯度达90%以上的重组蛋白。主动和被动免疫BALB/c小鼠后,TIGR4型肺炎链球菌攻击,与未免疫组相比,产生的保护性作用具有统计学意义。结论:CbpA蛋白免疫小鼠后可抵抗肺炎链球菌侵袭性感染,CbpA蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗。

5-FU富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞

探讨利用细胞周期特异性药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)从人白血病细胞系KG-1a中富集肿瘤干细胞样亚群细胞。体外药物敏感试验确定5-FU的最佳作用浓度和作用时间;KG-1a细胞经5-FU药物处理后,流式细胞术检测存活细胞群中CD34+CD38-亚群细胞比例;吖啶橙染色观察细胞内的核酸组成;RT-PCR半定量检测细胞内三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily Gmember2,ABCG2)mRNA的表达;半固体培养观察细胞的集落形成能力。结果显示,50μg/ml5-FU作用KG-1a细胞4天后,CD34+CD38-亚群细胞比例提高10倍以上;吖啶橙染色可见大部分细胞核酸以发出绿色荧光的DNA为主,RNA含量低;此类细胞高表达ABCG2 mRNA水平;而药物处理后细胞集落形成数量较未处理细胞明显减少。研究结果表明,利用5-FU能够杀死增殖期细胞的性质,成功建立体外药物筛选富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的方法。

Mad1对膀胱肿瘤作用的体内实验研究

目的:在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型,观察转染Mad1表达质粒后对膀胱肿瘤增殖的抑制作用。方法:MNU对SD大鼠进行膀胱灌注诱发膀胱肿瘤,荷瘤动物随机分为3组:Mad1转染组(A组),空载体转染组(B组)和生理盐水转染组(C组)。通过大鼠重量(RBW)、膀胱绝对重量(BAW)、膀胱相对重量(BRW)、Mad1和TERT mRNA表达水平等指标,用流式细胞仪等检测手段,比较转染前后Mad1和TERT的表达差异、观察Mad1对膀胱肿瘤增殖的抑制作用以及探讨相应的机理。结果:成功在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型。A组与B、C两组相比RBW无显著性差异(P>0.05),但BAW和BRW分别有非常显著差异性(P<0.01)及显著差异性(P<0.05);Mad1mRNA相对表达量明显增加;TERT mRNA相对表达量明显降低;流式细胞仪显示G0/G1期细胞显著增加(P<0.01),S期细胞显著减少(P<0.01).结论:高表达的Mad1能抑制膀胱肿瘤的增殖。

基于Delphi7.0实现试题库编辑管理系统

探讨了在试题库管理系统中如何应用Delphi7.0和Word2003编程实现对含有图表、公式等图形的图文混合试题进行录入编辑、存储、浏览、维护及Word文档的数据库存储。通过Delphi7.0的TImage元件将Word编辑的图文试题内容以图形方式进行显示,实现了试题基本信息与图文内容的同窗口同步显示。在文中给出了在Delphi7.0和Micorsoft Word2003环境下的具体编程实现方法。

重组逆转录病毒RV-40AS对K562细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的通过重组逆转录病毒RV-40AS表达bcr-abl反义RNA,激活蛋白激酶PKR引起靶细胞表型改变的策略,研究RV-40AS对K562致瘤裸鼠的抗肿瘤效应。方法建立K562细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体注射重组逆转录病毒上清,观察裸鼠瘤体生长状况,于实验终点处死小鼠检测瘤体大小,用western blot检测瘤组织PKR、真核细胞蛋白合成启动因子eIF2α及其磷酸化(p-PKR、p-eIF2α)蛋白质水平。3H-亮氨酸掺入实验检测细胞总蛋白质合成水平。结果RV-40AS作用组裸鼠的瘤体明显小于对照组,瘤重抑制率为61.9%(P<0.05);p-PKR和p-eIF2α蛋白质表达水平有不同程度上调(88%和53%)。3H-亮氨酸掺入实验显示RV-40AS组细胞总蛋白质合成受抑。结论逆转录病毒RV-40AS能激活PKR从而抑制白血病K562细胞移植瘤裸鼠模型的瘤体生长,激活PKR可作为白血病治疗的又一策略。

诊断技术的群体化与集约化

诊断技术具有医学工程技术化的典型特征。探讨了CT诊断技术、实验室诊断技术、诊断芯片技术等的群体化与集约化方式,以及技术转化的成因和内在机制。诊断技术的群体化和技术的集约化是诊断技术发展中的两个阶断和转折,是诊断技术发展中的重要课题并具有普遍意义。

影响肺炎链球菌感受态形成的双组分系统

肺炎链球菌在生长过程中可自发形成感受态,从而改变自身的毒力和生存能力,以适应环境的变化。肺炎链球菌的部分双组分系统与其感受态形成密切相关,对相关双组分系统的研究可为进一步探索肺炎链球菌感受态形成机制、深入理解肺炎链球菌的致病机制和耐药机制提供理论依据。

细菌密度感应系统抑制剂

许多条件致病菌依赖密度感应系统作为毒力表达的最重要的调节器。该文就革兰氏阴性细菌密度感应系统抑制剂的作用机制、分离与鉴定及应用等方面进行系统阐述。

复方斑蝥胶囊血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞蛋白质组差异表达分析

目的:考察复方斑蝥胶囊血清对SMMC-7721细胞蛋白质组的影响,从分子水平探讨复方斑蝥胶囊的抗癌作用机制。方法:用血清药理学方法制备复方斑蝥胶囊血清并处理人肝癌SMMC-7721细胞,用双向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定复方斑蝥胶囊对癌细胞中有影响的蛋白质。结果:双向电泳分离到SMMC-7721细胞蛋白质组约450个点,其中47个点在对照组和实验组之间有2倍以上量变,质谱鉴定发现实验组出现膜联蛋白A5、热休克70×103蛋白表达显著上调,真核翻译起始因子5A和硫氧还蛋白过氧化酶2表达显著下调。结论:研究发现了4种与肿瘤的增殖、免疫、凋亡相关的差异表达蛋白质,为进一步研究复方斑蝥胶囊的作用机制提供了线索。血清药理学与蛋白质组学相结合能够有效地展示与药物作用相关的蛋白质,可以作为研究复方药理的一个初步技术平台。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定血清中游离和结合型胆汁酸

建立了高效液相色谱-串联质谱同时测定血清中游离和结合型胆汁酸的方法。血清样品经固相萃取后，在C18色谱柱上梯度洗脱，用负离子多反应监测模式检测。15种胆汁酸在0．10～100．0μmol／L的浓度范围内与响应呈良好的线性，r为0．9990～0．9999；检出限为0．001～0．006μmol／L；本方法的相对标准偏差日内不超过3．0％，日间不超过6．0％；平均回收率为86．0％～110．0％，适合于临床检测血清胆汁酸。

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的:研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌(TCCB)增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:用crocin处理后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析其对T24细胞增殖的影响;流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率。建立人膀胱癌T24细胞株裸鼠移植瘤动物模型。随机分为对照组和处理组。50 mmol.L-1crocin处理后,观察其对肿瘤的抑制作用;电镜观察肿瘤组织形态改变;SP-免疫组织化学法分析Bcl-2,Bax,survivin,Cyclin D1蛋白表达。结果:Crocin能明显抑制人膀胱癌T24细胞的生长,并使T24细胞呈明显的G0/G1期阻滞现象;T24细胞早期凋亡率随crocin作用时间的延长而逐渐增加。Crocin对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,电镜观察可见细胞凋亡的形态学改变,免疫组化结果显示,经Crocin处理后Bcl-2,survivin,Cyclin D1的表达下调,而Bax的表达上调。结论:Crocin对人膀胱癌T24细胞株的体内外增殖均具有良好的抑制作用,其机制可能是改变细胞周期分布和诱导细胞凋亡,作用机制与下调Bcl-2,survivin,Cyclin D1基因表达和上调Bax的基因表达有关。

肺炎链球菌体内诱导基因的筛选及初步鉴定

为筛选鉴定肺炎链球菌宿主体内诱导的基因，寻找潜在的抗生素作用靶点和疫苗候选者，应用体内表达技术，以肺炎链球菌荚膜合成的关键基因galU作为体内报告基因，利用其缺陷体不能合成荚膜多糖，从而不能在宿主体内存活的特点，筛选鉴定肺炎链球菌体内诱导基因。首先，把肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段（200～500bp）克隆到含有体内、体外双重报告基因（galU—lacZ）的报告载体pEVP3-galU的BlgⅡ位点，将获得的质粒库转化肺炎链球菌galU缺陷菌株，得到肺炎链球菌体内启动子诱捕文库，将此文库去感染BALB／c小鼠，经过两轮体内筛选，在涂布有X-gal的TSA血清平板上得到了165个白色菌落，对插入的随机片段进行测序及生物信息学分析，共证实15个不同的体内诱导基因片段，8个为单独的ORF，7个为含有多个ORFs的操纵子结构，它们分别参与细菌在宿主体内的定植与粘附、能量代谢、物质转运、转录调节、DNA复制与重组、细胞壁合成等，另外还包括功能不明的假想蛋白。其中部分ORFs可能与细菌毒力相关，可以作为候选疫苗和药物的靶标。