肺炎链球菌体内启动子诱捕文库的构建与初步分析

构建肺炎链球菌体内启动子诱捕文库（promoter-trap library），用于筛选肺炎链球菌体内诱导的基因。以穿梭质粒pEVP3为骨架，将无启动子的galU基因作为体内报告基因定向克隆到pEVP3上，与无启动子的体外报告基因lacZ基因融合，构建用于筛选体内诱导基因的载体pEVP3-galU；再把肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段（200-500bp）克隆到此载体galU基因上游的BglⅡ位点，构建了启动子诱捕文库，并转化肺炎链球菌galU缺陷菌株，获得相应的菌株库。文库大约覆盖基因组全长的5倍，插入率达到90％以上，保持了较高的复杂性。对得到的约450000个肺炎链球菌转化子进行体内、外初步分析，那些从小鼠体内分离出的细菌，并在X-gal平板上为白色的菌落表明galU报告基因上游含仅在体内表达的启动子，提示所构建的启动子诱捕文库可用于筛选肺炎链球菌的体内诱导基因。