RNAi沉默PLCε对Crocin抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用调控的研究

目的:观察RNAi沉默膀胱癌BIU-87细胞磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)表达后对藏花素(Crocin)抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响。方法:将携有siRNA基因的真核表达质粒PGenesil-PLCε转染BIU-87细胞后,分为5组:未转染组、pGenesil-NP阴性质粒组、pGenesil-PLCε质粒组、Crocin组、pGenesil-PLCε联合Crocin组。MTT法观察不同处理组对BIU-87细胞的生长抑制作用。RT-PCR法检测转染后对PLCεmRNA表达的影响及各处理组PCNA(Proliferating cell nuclear antigen)、CyclinD1 mRNA表达。Western-blot检测PCNA、CyclinD1蛋白表达。结果:RNAi可抑制BIU-87细胞78.06%的PLCεmRNA表达。pGenesil-PLCε联合Crocin组可增强Crocin对BIU-87细胞的生长抑制作用,48h抑制率达45.30%,且与pGenesil-PLCε质粒组和Crocin组相比较有显著性差异(P<0.01)。RT-PCR和Western-blot结果显示与RNAi沉默PLCε组比较,RNAi PLCε联合Crocin组明显下调了PCNA、Cyclin D1基因和蛋白的表达(P<0.05);较单独Crocin组比较,RNAi PLCε联合Crocin组显著降低了PCNA基因和蛋白的表达(P<0.05),降低了Cyclin D1蛋白的表达(P<0.05),Cyclin D1 mRNA表达变化两组间无显著性差异(P>0.05)。结论:沉默PLCε基因可增强Crocin对BIU-87细胞的抑制作用,其机制与进一步下调PCNA、CyclinD1的表达有关。