以器官系统为中心的基础医学课程改革初探

随着现代医学教育的发展,传统的"以学科为中心"的课程模式存在诸多弊端,而"以器官系统为中心"的课程模式受到诸多好评。重庆医科大学初步探索适应校情的基础医学课程教学体系改革,为全面开展以器官系统为中心的基础医学课程模式,为培养具有创新精神和综合能力的实用型人才打下基础。

医学院校实验动物学实验教学体会

实验动物学在生物医学科学研究和医学人才培养中均具有重要作用,实验教学是整个实验动物学教学的一个关键环节。结合多年来的实验动物学教学和从业经验,就医学院校实验动物学实验课教学的重要性以及如何从学校、教师和学生三个层面做好实验动物学的实验课教学提出了一些看法和体会,以资同行交流探讨。

基础医学硕士研究生培养模式的探讨

基础医学是医学教育与研究的基石,基础医学研究受到国内外的极大关注。重庆医科大学对基础医学硕士研究生的培养模式进行了探讨,在不同的研究生阶段进行不同的培养教育,培养研究生不仅掌握各种实验技术方法,而且具备独立思考、解决问题和设计研究课题的能力。

地方医学院校新进教师进行生物化学课程备课的体会

生物化学课程是医学专业学生必修的基础主干课程之一,在学生学习基础理论知识过程中具有重要的地位。由于生物化学课程涉及的内容多、概念抽象,因此想要取得良好的教学质量和教学效果,需要做好教学前的准备工作。尤其是对于教学经验尚缺的新进教师,备好课就显得尤为重要。本文详述了地方医学院校青年教师可从树立教师责任感、了解教学对象的专业和课时数、充分利用教学团队资源、搜集教学资源并深入掌握教学内容和学习并掌握现代化教学技术等五个方面开展教学前的准备工作。

医学分子生物学实验教学体会

分子生物学是在分子水平研究生命活动及其规律的科学,是各学科的领先学科和基础学科。医学分子生物学实验是其重要组成部分和强有力的支撑。为了提高医学分子生物学实验课的教学质量,对实验过程中所遇到的一些问题进行了分析和探讨,并积极地应用于实验教学。

GM130通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨高尔基体基质蛋白130(GM130)通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用免疫组化法检测在20例正常卵巢上皮组织和42例卵巢上皮恶性肿瘤中GM130和14-3-3ζ的表达,分析二者相关性。采用Western blot和RT-PCR法检测卵巢癌SKOV3/A2780细胞株GM130和14-3-3ζ蛋白及其mRNA表达情况,筛选出高表达细胞株。采用免疫荧光染色法检测GM130与14-3-3ζ在卵巢癌细胞中的共表达情况。将设计好的重组表达质粒shRNA-GM130片段稳转进入卵巢癌细胞中,采用Western blot和RT-PCR筛选出降低GM130的最佳片段。细胞分为三组:空白组(WT)、对照组(NC)、低表达组(313),采用CCK法和流式细胞术分别检测各组卵巢癌细胞生殖情况及周期变化情况,采用Western blot法检测各组14-3-3ζ、GRASP65、P115及增殖相关蛋白表达水平。结果GM130和14-3-3ζ在卵巢恶性肿瘤组织中的表达水平高于正常卵巢组织(P<0.001)。在卵巢恶性肿瘤组织中,GM130和14-3-3ζ呈正相关关系(r=0.873,P<0.001)。GM130蛋白及其mRNA在SKOV3细胞中的表达量高于A2780细胞(P<0.05),14-3-3ζ蛋白及其mRNA在SKOV3细胞和A2780细胞中比较差异无统计学意义(P>0.05)。后续实验选用SKOV3细胞。免疫荧光共定位染色显示,GM130与14-3-3ζ主要在胞质表达,前者近核膜部分呈堆叠样表达量较高,后者胞核中表达较少,二者可能存在共定位关系。转染313组片段后,对GM130的抑制效果最好。转染质粒313组细胞增殖能力降低,细胞在G1期阻滞的数量增多,G2期阻滞数量减少,S期阻滞的细胞数量稍减少,GM130、14-3-3ζ、P115、Cyclin A、Cdc25A蛋白相对表达水平降低,P21蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。结论抑制GM130可抑制卵巢癌细胞增殖,其机制可能与抑制14-3-3ζ表达,影响卵巢癌细胞周期有关。

人子宫颈癌PD-L1的表达及其与肿瘤内浸润T细胞的相关性研究

目的观察负性免疫调节分子程序性死亡配体1(programmed death receptor-ligand1,PD-L1)在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内T淋巴细胞浸润的关系。方法免疫组织化学染色观察5例正常宫颈组织、7例高级别宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CINⅡ-Ⅲ)组织和67例子宫颈癌组织中PD-L1的表达和淋巴细胞PD-1的表达,免疫荧光染色观察相应组织内浸润的CD4+T和CD8+T细胞数量,TUNEL法检测淋巴细胞凋亡。结果正常子宫颈上皮不表达PD-L1;宫颈瘤变上皮不表达或弱阳性表达PD-L1,70%(47/67)的宫颈癌表达PD-L1。肿瘤内浸润的部分淋巴细胞表达PD-1。子宫颈瘤变上皮与子宫颈鳞状细胞癌PD-L1表达存在明显差异(P<0.01),浅表浸润的子宫颈鳞状细胞癌PD-L1的表达略低于深部浸润的鳞状细胞癌,但无显著差异;PD-L1阳性病例肿瘤局部CD8+T细胞数量显著减少,且PD-L1表达与CD8+T细胞数量明显负相关(r=-0.82,P<0.01),但与肿瘤局部CD4+T细胞数量无明显相关性(r=-0.05,P>0.05);部分PD-L1阳性的子宫颈癌局部浸润的淋巴细胞存在凋亡现象。结论子宫颈癌细胞表达PD-L1,且PD-L1的表达与肿瘤局部浸润的CD8+T细胞数量减少有关,但与浸润的CD4+T细胞数量无关。癌细胞表达PD-L1可能促进了肿瘤内浸润的淋巴细胞凋亡。

微课在医学生物化学教学中的应用探讨

微课作为一种典型的泛在式网络学习资源形式,以其短而精的授课方式,受到越来越多的人喜爱和关注。而多年以来医学生物化学受其交叉学科知识点繁多、逻辑联系差、理论和临床实践操作脱节等学科特点所影响,学生的学习积极性和成绩一直难以有效提高,而微课改变了传统医学生物化学的自主学习形式,为医学生物化学的教学改革带来了新的契机。

肿瘤特异的sea基因真核表达质粒的构建及在肺癌细胞中的功能研究

构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核表达质粒,检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达以及表达产物的超抗原活性。以PCR法扩增sea基因,以含有Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒为基础,构建pGL-S-SEA真核表达质粒。用脂质体转染A549细胞,以RT-PCR法检测sea基因表达水平。制备健康献血者PBMC,用pGL-S-SEA质粒转染A549细胞的上清液和细胞裂解液进行PBMC刺激试验,以MTT法检测其促细胞增殖效应。结果显示,成功构建Survivin启动子调控的真核表达质粒pGL-S-SEA。重组质粒在A549细胞中启动了sea基因的表达,其转录强度为内参(GADPH基因)的65.96%,在对照MRC-5细胞中无明显表达。该质粒转化A549细胞的裂解液具有促进人PBMC增殖活性、上清液无明显促PBMC增殖作用,裂解液组、上清液组和PHA阳性对照组的刺激指数分别为1.29、0.95和1.58。结论成功构建pGL-S-SEA质粒,其在A549细胞的表达产物具有诱导人PBMC增殖的超抗原活性,为下一步将其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础。

肿瘤特异性锚定型α-gal模拟表位真核表达质粒的构建及功能研究

目的构建Survivin启动子调控的、α-gal模拟表位序列和GPI锚定序列融合基因的真核表达质粒,研究该质粒在肺癌A549细胞表面锚定表达α-gal模拟表位及其抗肺癌细胞效应。方法 PCR法扩增gal-GPI融合基因,以pSGFP质粒为载体,构建Survivin启动子调控的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒。将其用脂质体瞬时转染A549细胞后,用荧光显微镜观察GPI锚定表达功能,分别用免疫组化法和Western-blot法对锚定表达的α-gal模拟表位进行定位和免疫反应性分析,并用新鲜人血清对表达α-gal模拟表位的A549细胞进行补体介导的溶细胞效应研究。结果 pSGFP-gal-GPI质粒转染细胞的绿色荧光不均匀分布在细胞膜周围,免疫细胞化学分析表明重组融合蛋白表达在细胞膜上,Western-blot结果表明重组融合蛋白与人IgG有良好的免疫反应性;人新鲜血清对表达该表位的A549细胞具有明显的溶细胞效应。结论成功构建了能在A549细胞膜锚定表达α-gal模拟表位的pSGFP-gal-GPI真核表达质粒,为肺癌等靶向基因治疗奠定了基础。

环状RNA hsa_circ_0001573对乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制研究

背景与目的:环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类呈闭合环状结构的非编码RNA,在基因表达调控方面具有重要的潜能。CircRNA与肿瘤的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨hsa_circ_0001573对乳腺癌细胞生物学行为的影响及机制。方法:收集重庆医科大学附属第一医院2020年1月—2021年1月经手术切除的4例乳腺癌组织和癌旁组织,通过RNA微阵列芯片分析(microarray analysis)技术进行分析,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)验证40例乳腺癌组织和癌旁组织以及正常人乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞(MCF-7和SK-BR-3)中hsa_circ_0001573的相对表达量。采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验进一步检测其在细胞中的定位与表达。转染干扰质粒后,采用细胞计数试剂盒(cellcountingkit-8,CCK-8)、EdU实验检测细胞增殖;通过transwell小室实验、伤口愈合实验和克隆形成实验分别检测细胞侵袭和迁移;采用Hoechst33342、TUNEL与流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测CCND1、CCND2和CDK4的表达。探讨hsa_circ_0001573对裸鼠移植瘤生长的影响。采用RNA pull down实验检测与hsa_circ_0001573相互作用的蛋白,荧光原位杂交联合免疫荧光(fluorescence in situ hybridization and immunofluorescence,FISH-IF)进一步检测hsa_circ_0001573与GNB4的亚细胞共定位,探究潜在的分子机制。结果:hsa_circ_0001573在乳腺癌组织(P<0.05)和乳腺癌细胞(P <0.001)中显著上调,敲低hsa_circ_0001573能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,降低CCND1、CCND2和CDK4的相对表达量。体内实验结果表明,敲低hsa_circ_0001573可抑制移植瘤生长。RNA pull down实验显示,hsa_circ_0001573与GNB4蛋白结合,FISH-IF表明hsa_circ_0001573与GNB4共定位于乳腺癌细胞中,且与GNB4相互作用能促进c-myc的表达。结论:环状RNA hsa_circ_0001573在乳腺癌中高表达,敲低hsa_circ_0001573对细胞增殖、侵袭能力及细胞凋亡和细胞周期有调控作用,并在体内抑制移植瘤生长,可通过与GNB4蛋白的相互作用,本研究结果可望为乳腺癌治疗提供新靶点。

高等医学院校生物学科主干课程整合与教学体系重构初探

课程整合及相应的教学体系重构是当前高等医学教育改革的核心与热点。医学教育中,生物学学科主干课程的整合很有必要,但目前尚无成熟的模式。作者尝试将《生物化学》、《分子生物学》、《细胞生物学》和《医学遗传学》四门生物学主干课程进行整合,对原有教学内容进行优化、精简和融合,形成了一门新的整合课程。在课程教学中,"以学生为中心",采用基于案例和问题的小组讨论式教学;采取形成性评价与总结性评价相结合的方法进行课程考核和成绩评定;跨科室组建教学团队,实行多学科联组教学。这些尝试为高等医学院校生物学相关课程的整合提供了有益的借鉴和经验。

乳酸链球菌素对乳酸菌抑菌作用的研究

目的:为了观察Nisin对乳酸菌的抑菌效果,探讨Nisin作为食品级载体筛选方法的最佳抑菌浓度和持续时间。方法:采用试管稀释法和纸片扩散法检测Nisin对乳酸菌的抑菌浓度,并根据乳酸菌的OD600nm作出生长曲线,以研究Nisin对乳酸菌的抑菌效果。结果:Nisin对乳品工业常用乳酸菌具有较强的抑菌作用,仅某些乳酸乳球菌对Nisin表现出抗性;Nisin对乳酸菌有较持久的抑菌效果,可达30～48h以上。结论:该实验为Nisin作为食品级载体筛选方法的最佳抑菌浓度和持续时间提供了依据。

椰汁体外促双歧杆菌生长作用的研究

目的探讨椰汁体外对4株双歧杆菌生长的促进作用。方法利用4株常见的双歧杆菌作为受试菌,以菌液D(600)值、pH值、活菌计数以及发酵牛乳凝乳时间和乳液pH值等为指标,来研究椰汁对4种双歧杆菌增殖和活性的促进作用。结果按照25%(V/V)添加椰汁时,4株双歧杆菌菌体浓度(光密度值及活菌计数)均明显高于空白对照组(P<0.05),其中两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌以及长双歧杆菌甚至高于双歧因子阳性对照组﹙P<0.05﹚。4株双歧杆菌发酵含有椰汁的牛乳后,两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌和长双歧杆菌的凝乳时间均较空白对照组和阳性对照组明显缩短﹙P<0.05﹚,婴儿双歧杆菌却未出现凝乳现象,但4株双歧杆菌pH值均低于空白对照组和阳性对照组(P<0.05)。结论椰汁有可能成为一种良好的双歧因子,并可作为双歧杆菌的天然培养基。

嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因的克隆及其作为食品级筛选标记的研究

为研究嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶基因(lacZ)作为食品级筛选标记的活性及筛选稳定性,作者从嗜酸乳杆菌基因组中克隆β-半乳糖苷酶基因并在乳酸乳球菌中表达,通过X-gal显色筛选阳性克隆;用X-gal显色筛选方法将重组乳酸乳球菌传60代,并测定β-半乳糖苷酶酶活和比活力。结果显示:通过表达有活性的β-半乳糖苷酶和X-gal显色可成功筛选出阳性克隆菌株;对借助X-gal传60代后的重组乳酸乳球菌进行β-半乳糖苷酶比活力检测,与X-gal筛选的第二代相比没有显著差异(P=0.592>0.05),与红霉素筛选比较也没有显著差异(P=0.882>0.05)。由此可见,β-半乳糖苷酶基因作为筛选标记具有较好的活性和稳定性,为以β-半乳糖苷酶基因作为筛选标记的食品级载体的研究奠定了基础。

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对免疫性肝损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对雷公藤甲素(TP)诱导的免疫性肝损伤的保护性作用及其作用机制。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,即正常对照组、EGCG对照组、TP组、EGCG治疗组。以赖氏法检测血清中ALT水平,以分光光度法检测肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的变化情况,以HE染色观测小鼠肝脏组织形态学变化,以ELISA方法检测肝脏中白细胞介素(IL)-17和IL-6的表达水平,以Western blot方法检测肝脏中Toll样受体4(TLR4)的表达情况。结果:TP组小鼠血清转氨酶水平明显高于正常对照组(P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组小鼠血清转氨酶水平与TP组相比下降明显(P<0.005)。TP组小鼠肝脏病理切片示较多肝细胞坏死和中性粒细胞浸润,EGCG对照组和正常对照组小鼠肝脏形态学基本正常,EGCG治疗组示肝细胞炎症坏死程度较TP组有大幅减轻。TP组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平明显高于正常对照组(P<0.005),而SOD和GSH水平明显低于正常对照组(SOD,P<0.05;GSH,P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),EGCG治疗组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平均下降明显(P<0.005),而SOD和GSH水平均增高,与TP组比较有显著性差异(SOD,P<0.05;GSH,P<0.005)。TP组肝脏TLR4蛋白表达水平高于正常对照组,EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组TLR4水平显著降低。结论:EGCG对TP所致小鼠肝损伤有明显的保护作用,可能与其抗氧化作用及对炎症因子的调节有关。

巨噬细胞Coronin-1的表达与非Mtb源性自噬相关性的实验研究

目的:研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:分别构建过表达Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的p Genesil-1-Coronin-1质粒,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Coronin-1高表达细胞株(RAW264.7-Cor.Plus)和Coronin-1低表达细胞株(RAW264.7-Cor.Minus)。将RAW264.7-Cor.Plus组、RAW264.7组和RAW264.7-Cor.Minus组细胞分别采取完全培养基(空白处理对照)、饥饿、雷帕霉素、环孢素A等因素处理后,通过RT-PCR法检测Beclin-1的基因转录水平,Western blot法检测Coronin-1、LC3BⅡ/LC3BⅠ及Beclin-1的蛋白表达水平。结果:Coronin-1过表达质粒和siRNA质粒均构建成功,其细胞稳定筛选株具有过表达或抑制表达Coronin-1特性。1空白处理三组细胞,Western blot法检测LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;Western blot法检测Beclin-1:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;RTPCR法检测Beclin-1转录水平,趋势同Western blot;2饥饿处理三组细胞,LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组<RAW264.7组<RAW264.7-Cor.Plus组;3雷帕霉素处理RAW264.7细胞,其Coronin-1蛋白被显著抑制;雷帕霉素和环孢素A分别处理RAW264.7-Cor.Plus细胞,其LC3BⅡ/LC3BⅠ比值明显较空白处理组高。结论:巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬具有相关性。在营养充足状态下,Coronin-1可抑制细胞自噬;在饥饿状态下,Coronin-1可促进细胞自噬。Coronin-1对自噬的调控可能与m TOR和钙离子信号通路有关。

新生儿PKU和CH疾病筛查对减少出生缺陷的临床意义研究

目的通过对新生儿进行苯丙酮尿症(PKU)和先天性甲状腺功能减低症(CH)筛查,考察乐山市新生儿疾病筛查对减少出生缺陷的临床意义。方法收集2012-2015年乐山市各采血地区筛查总数和医疗机构出生的婴儿总数,血片全部为验收合格的血片,根据《新生儿疾病筛查技术规范》,分别将所有参与筛查的新生儿中最后被确诊为CH或PKU的患儿作为统计对象。结果新生儿的筛查率从2012年的91.47%上升至2015年的94.10%,PKU平均发病率为1/25 448,CH平均发病率为1/2 544。结论新生儿早期疾病筛查能够有效筛查出PKU和CH可疑患儿,结合确诊实验,从而实现早期诊断与治疗,对降低出生缺陷、提高人口素质有重要现实意义。

功能性米酒抗疲劳作用的研究

探讨功能性米酒对小鼠的抗疲劳效应。将240只雄性昆明小鼠随机分为5组,每组48只。空白对照组给予生理盐水(50mL/kgbw),实验对照组给予市售普通米酒(50mL/kgbw),高、中、低剂量组每天分别给与剂量为100、50、25mL/kgbw的功能性米酒。30天后,测定各组小鼠体重、负重游泳时间、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、肝糖原和血乳酸(Lactic Acid,LAC)的水平,所得结果均进行组间比较分析。结果显示:高、中剂量功能性米酒能显著延长小鼠负重游泳时间、提高肝糖原含量(p<0.01)、降低运动后血尿素氮和血清乳酸的水平(p<0.01或p<0.05),表明功能性米酒具有抗小鼠运动性疲劳的作用。

雷公藤甲素致小鼠肝损伤的机制研究

本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17、IL-6、维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)mRNA表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-6蛋白表达水平,Western blot法检测小鼠肝脏中TLR4蛋白表达水平。与对照组比较,雷公藤甲素模型组小鼠血清ALT水平显著升高(P<0.005),HE染色切片显示较多的肝细胞坏死和炎症细胞浸润,IL-17、IL-6、ROR-γt mRNA表达水平和IL-17、IL-6蛋白表达水平显著升高(P<0.005),此外,TLR4蛋白表达水平显著升高(P<0.005)。结果表明,雷公藤甲素所导致的肝损伤可能通过激活TLR4信号,增加IL-17、IL-6的表达,影响Th17特异性转录因子ROR-γt,进而促进Th17细胞活化,增强其致炎功能。