过表达ALEX1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究过表达ALEX1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:将重组慢病毒LV5-ALEX1及阴性对照LV5-NC分别感染乳腺癌MCF-7细胞。感染72 h后,采用实时定量PCR和Western blot分别检测感染后ALEX1的表达情况;感染24、48、72、96 h,CCK8法检测细胞增殖情况;感染72 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:感染72 h后细胞ALEX1 mRNA表达水平明显上升(165.81±12.14 vs 52.29±2.32,P<0.01),实验组与对照组相比,细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加(20.55%±2.50%vs 3.60%±1.614%,P<0.05)。结论:过表达ALEX1能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。

异源接种建立小鼠和兔包虫病动物模型的初步探讨

目的采用人工接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴感染法建立小鼠与兔包虫病动物模型。方法 6周龄昆明小鼠经皮穿刺腹腔内接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液,新西兰大白兔于腹部手术后肝脏接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液。接种原头蚴6个月后剖检动物,观察小鼠腹腔和新西兰大白兔肝脏内包虫囊生长情况。结果接种羊源细粒棘球绦虫原头蚴6个月后,小鼠腹腔内包囊生成率为95%,新西兰大白兔肝内包囊生成率为50%。光镜观察见在小鼠腹腔和兔肝脏形成的囊泡具有与羊肝脏棘球蚴囊壁类似的类上皮细胞层和板层状结构。3种动物体内棘球蚴均有原头蚴。结论以羊源细粒棘球绦虫原头蚴悬液接种昆明小鼠腹腔和新西兰大白兔肝脏,可以建立小鼠和兔包虫病动物模型。

单羧酸转运蛋白过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的研究单羧酸转运蛋白(MCT)过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法将真核表达质粒pcDNA3.1/MCT(实验组)及空质粒pcDNA3.1(阴性对照组)分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,将未处理的细胞作为空白对照组。采用Real-Time PCR和细胞免疫荧光化学法分别检测转染MCT基因的效率;采用MTS法检测转染MCT基因后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时用吖啶橙染色法检测细胞形态学的改变;采用流式细胞仪检测过表达MCT基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、坏死和周期的影响;采用Transwell实验检测转染MCT基因后对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响。结果实验组MCT的基因和蛋白水平明显高于的阴性对照组和空白对照组(P<0.01);MCT基因过表达能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡和坏死,促使细胞周期S期上升和G2期下降,同时能抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力(P<0.01或P<0.05)。结论 MCT基因过表达能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡和坏死,调控细胞周期,同时能抑制细胞的增殖、侵袭和转移能力。

miR-335对MDA-MB-231乳腺癌细胞生物学特性的影响

目的检测microRNA-335(miR-335)在乳腺癌细胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达以及在原发性乳腺癌和淋巴结转移性乳腺癌中的表达,进一步研究miR-335对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法采用荧光实时定量PCR检测miR-335在乳腺癌细胞系BT474、T47D、MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231和正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达,以及在原发性乳腺癌和淋巴结转移性乳腺癌中的表达。体外培养MDA-MB-231细胞并将其分3组,分别为miR-335组、阴性对照组和空白对照组。miR-335组转染miR-335模拟物(has-miR-335 mimics),阴性对照组转染阴性对照序列(negative control,NC),空白对照组细胞不行任何转染。通过MTT实验检测过表达miR-335对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测过表达miR-335对细胞凋亡的影响;Transwell实验检测对细胞迁移能力的影响。Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果各乳腺癌细胞系中miR-335表达水平均低于乳腺正常上皮细胞系MCF-10A,MDA-MB-231细胞中最低(P<0.01)。在随机配对的10例原发性乳腺癌和10例淋巴结转移性乳腺癌标本中,有7例淋巴结转移性乳腺癌中MiR-335的表达低于对应的原发性乳腺癌(P<0.05)。过表达miR-335对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡无明显影响(P>0.05),但能显著抑制细胞的迁移能力(P<0.05)。Western blot结果显示:miR-335组MMP-2和MMP-9蛋白的表达量均低于阴性对照组和空白对照组。结论 miR-335在高转移性乳腺癌细胞系和淋巴结转移性乳腺癌组织中明显低表达,过表达miR-335对MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡无明显影响,但抑制MDA-MB-231细胞的迁移能力。miR-335可能通过下调MMP2和MMP9的表达从而抑制MDA-MB-231细胞迁移。

沉默GRP78/BIP表达对人膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响及机制

目的:探讨体外沉默葡萄糖调节蛋白GRP78/BIP表达对膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响及可能机制。方法:设计、合成靶向GRP78基因的小干扰RNA,利用脂质体Liopfecta mineRNAIMAX转染入膀胱癌T24细胞,分别采用Realtime PCR、Western blot在mRNA和蛋白水平检测细胞内GRP78、MMP2、MMP9、Timp-2表达,采用Transwell实验及细胞划痕实验检测沉默GRP78表达对膀胱癌T24细胞侵袭及迁移的影响。结果:实验(siRNA-GRP78)T24细胞中GRP78表达显著降低,细胞侵袭迁移能力明显受到抑制,MMP2、MMP9表达降低,而Timp-2表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默GRP78能明显抑制人膀胱癌细胞的侵袭、迁移能力,其机制可能与影响MMP2、MMP9、Timp-2表达相关。

自组装短肽K_2I_4K_2在PCR中提高Taq DNA聚合酶热稳定性

目的设计自组装短肽K_2I_4K_2作为新型表面活性剂来稳定Taq DNA聚合酶,探索其对Taq DNA聚合酶在高温下的半衰期以及对PCR扩增效率的影响,探讨其在PCR中应用的可行性。方法圆二色仪检测短肽K_2I_4K_2在不同理化条件下的二级结构;原子力显微镜检测其自组装形成的纳米结构特征;紫外可见光谱检测其对Taq酶在高温下半衰期的影响;普通PCR验证其在PCR中应用的可行性;RT-q PCR检测其对Taq酶扩增效率的影响。结果短肽K_2I_4K_2在盐离子溶液中能自组装形成纳米纤维结构,且在高温下拥有稳定的二级结构;短肽K_2I_4K_2使得Taq在95℃下的半衰期增加了约1.6倍;短肽K_2I_4K_2组装24 h后大大增加了Taq酶的扩增效率。结论短肽K_2I_4K_2较为显著地增加了Taq DNA聚合酶的热稳定性,能够很好地应用于PCR反应系统中。

miR-449a通过Trim11影响高糖培养的肾小球系膜细胞增殖

目的探讨在高糖培养的系膜细胞中miR-449a与Trim11结合对细胞增殖的调控作用。方法 RT-qPCR检测miR-449a在高糖(25 mmol/L)和低糖(5.5 mmol/L)培养的系膜细胞中的表达;EdU检测miR-449a及Trim11对系膜细胞增殖的影响;生物信息学预测miR-449a与Trim11的结合位点;双荧光素酶验证miR-449a与Trim11靶向作用;Western blot检测上调、下调miR-449a后Trim11蛋白的变化。结果与低糖组比较,miR-449a在高糖培养的系膜细胞中的表达显著降低(P<0.01);双荧光素酶证实miR-449a直接靶向Trim11,过表达miR-449a后,细胞增殖减少,Trim11蛋白水平显著降低(P<0.01);沉默miR-449a,细胞增殖增加,Trim11蛋白水平显著上调(P<0.01);沉默Trim11后,抑制miR-449a对于细胞增殖促进作用被阻止。结论 miR-449a可抑制系膜细胞增殖,其机制可能与抑制靶基因Trim11的表达有关,可能是糖尿病肾病的重要保护性因子。