提高《医用化学》本科教学质量的途径与实践

分析医用化学本科教学中的现状及存在问题,提出从激发学生的学习动机、提高教师的自身业务能力、采用科学的教学方式三个方面来提高教学质量。

常用抗肿瘤药物对KBV200耐药细胞株增殖抑制作用及苦参碱的耐药逆转研究

目的探讨5种常用抗肿瘤药长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、环磷酰胺对KBV200耐药细胞株的增殖抑制作用及苦参碱的耐药逆转作用。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象,采用MTT法观察5种抗肿瘤药物对其增殖抑制作用;并采用MTT法观察苦参碱对KBV200耐药细胞株的耐药逆转作用。结果长春新碱、平阳霉素、环磷酰胺对KBV200耐药细胞株的增殖抑制作用差,而阿霉素和顺铂对KBV200耐药细胞株的抑制作用好;当苦参碱浓度大于200μg/m l时对KBV200耐药细胞株具有直接抑制作用;苦参碱逆转KBV200耐药细胞株对长春新碱、阿霉素耐药的作用较强,逆转KBV200耐药细胞株对平阳霉素、顺铂、环磷酰胺的耐药作用较弱。结论KBV200耐药细胞株对长春新碱、平阳霉素、环磷酰胺3种药物有不同程度耐药;苦参碱能逆转KBV200耐药细胞株对长春新碱、阿霉素的耐药。

氧化苦参碱对放疗鼻咽癌HNE-1细胞P-糖蛋白表达影响

目的(1)氧化苦参碱对放射前后鼻咽癌HNE-1细胞有无生长抑制作用;(2)研究天然产物氧化苦参碱对鼻咽癌HNE-1细胞株放射前、后P-糖蛋白表达的影响。方法(1)MTT法检测长春新碱、维拉帕米、氧化苦参碱对放射前HNE-1细胞、放射后HNE-1(200)细胞生长抑制情况;(2)免疫化学法检测氧化苦参碱、维拉帕米对HNE-1(200)细胞P-糖蛋白表达的影响。结果(1)长春新碱、维拉帕米、氧化苦参碱对放射前、后细胞生长均有抑制作用,呈浓度依赖关系,随着浓度的增加抑制作用也增加;(2)高浓度VCR对放射治疗后细胞HNE-1(200)的抑制率比对HNE-1细胞的抑制率降低了近50%,P值小于0.01,有显著差异;氧化苦参碱、维拉帕米对两种实验细胞抑制没有显著差异。(3)免疫组化检测细胞P-糖蛋白表达,结果为HNE-1阴性,HNE-1(200)阳性,维拉帕米、氧化苦参碱分别作用于HNE-1(200)细胞后P-gp表达弱阳性。结论(1)氧化苦参碱对放射前后鼻咽癌HNE-1细胞有明显生长抑制作用;(2)放射后细胞HNE-1(200)对长春新碱产生耐药;(3)低毒性浓度氧化苦参碱具有与维拉帕米相似的作用,能使放射照射后鼻咽癌HNE-1细胞株P-糖蛋白的表达下降。

氧化铝干柱层析固相萃取测定血中吩噻嗪类药物含量

目的 建立一种血中吩噻嗪类药物的萃取及测定方法。方法 采用氧化铝干柱层析固相萃取技术分离血中吩噻嗪类药物 ,紫外二阶导数光谱图测定萃取物中吩噻嗪类药物浓度。结果 对于吩噻嗪类药物含量在mg/L级药物的血样 ,pH 8时氯丙嗪的萃取率 >80 % ;pH 1 2时异丙嗪的萃取率 >90 %。紫外二阶导数光谱图测定氯丙嗪的加样回收率 >90 %。结论 本方法操作简便 ,试剂价廉 ,萃取率较高 ,测试重现性好 ,批量测试更省时间 ,对于含吩噻嗪类药物mg/L级的血样 。

血液净化吸附剂CAA去除血浆亚甲蓝对人血浆正常成分的影响

亚甲蓝光处理法可以灭活血浆中多种病毒 ,随后去除亚甲蓝可以减少其产生的副作用。本研究考查了交联琼脂包嵌凹凸棒珠 CAA去除血浆亚甲蓝后对人血浆中部分成分的影响。通过测定对照试样和过柱血浆中的部分生化指标、凝血指标及阳离子浓度变化 ,评价了 CAA的生物医学性能。血浆经 CAA作用前后生化指标、钾、钠离子浓度指标几乎无变化 ;钙镁离子浓度的增加和血氨浓度降低明显 ;活化部分凝血酶原时间有明显延长 (由 4 2 s至 5 3s)。结果表明 ,CAA吸附剂保留了血浆的大多数重要性质 。

果糖二磷酸钠镁对心肌缺血大鼠血流动力学的影响

目的：观察果糖二磷酸钠镁（ＦＤＰＭ）对心肌缺血大鼠血流动力学作用。方法：采用垂体后叶素诱发大鼠急性心肌缺血，经ＭＰＡ－Ｖ，型多道生物信号分析系统监测血流动力学变化。结果：（１）给垂体后叶素后，ＭＡＰ、ＬＶＥＤＰ 升高，ＩＴ延长，ＨＲ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、－ｄＰ／ｄｔｍａｘ、Ｖｃｅ－５ｋＰａ降低；（２）ＦＤＰＭ升高降低的＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ、－ｄＰ／ｄｔｍａｘ及Ｖｃｅ－５ｋＰａ，降低升高的ＬＶＥＤＰ，同时降低ＭＡＰ和减慢ＨＲ；该作用具有剂量依赖性。结论：ＦＤＰＭ能改善心肌缺血大鼠的血流动力学。

HBX基因重组腺病毒载体的构建

目的 :构建携HBX基因的腺病毒载体 ,为进一步研究HBX基因的功能 ,为阐明HBV感染导致肝癌的机制研究建立基础。方法 :采用PCR技术从HBV全基因组DNA中扩增HBX基因 ;将HBX基因亚克隆至质粒 pHAHA ,构建质粒 pHAHA-HBX ,酶切pHAHA -HBX质粒 ,将HAHA -HBX片段克隆到腺病毒载体 pAd -Track -CMV中 ,得到 pAdTrack -CMV -HBX ,同时与 pAdEasy - 1共转染 2 93细胞 ,确定转染效率。检测培养上清病毒中HBX的存在。结果 :将PCR扩增HBX片段成功克隆到腺病毒载体中 ,并经序列分析证实 ;建立了产病毒细胞株 ,证实重组病毒中含有HBX基因。结论

离子交换高效液相色谱法分析兔肝环核苷酸磷酸二酯酶反应体系

目的：用阴离子交换HPLC分析环核苷酸磷酸二酯酶反应体系。方法：用Shim-Pak WAX-1柱，30 mmol/L 的pH 4.0磷酸钾为流动相，洗脱速度0.5 ml/min，254 nm 检测，峰面积定量。结果：上述离子交换HPLC体系可分离并定量测定cAMP和AMP。在硫酸铵分级粗制兔肝PDE反应混合物中，cAMP 和AMP同杂质完全基线分离；随反应进行，cAMP逐步下降，AMP上升到平台后再下降。用米氏酶的积分速度方程作图分析cAMP下降的进程曲线，发现硫酸铵分级粗制的兔肝PDE的米氏常数为负数。结论：此离子交换HPLC方法可以分析无杂酶干扰时PDE对cAMP的水解。

胰岛素对胎盘肥胖基因表达的影响

目的 :探讨胰岛素水平升高对胎盘肥胖基因表达瘦素的影响。方法 :采用放射免疫法分别检测 35例糖尿病产妇、40例正常产妇的外周血胰岛素、瘦素水平 ,同时分别检测两组的脐血瘦素水平。采用 RT- PCR和荧光定量分析法分别检测两组的胎盘肥胖基因表达的 m RNA水平。并对结果进行统计学相关分析。结果 :1糖尿病产妇外周静脉血胰岛素水平、瘦素水平均高于正常产妇 (P<0 .0 1) ,胰岛素与瘦素水平两者具有明显的相关性 (r=0 .5 5 ,P<0 .0 0 0 1) ;2两组产妇的胎盘肥胖基因表达的 m RNA水平有明显的差异 (P<0 .0 1) ;3胎盘肥胖基因表达的 m RNA水平与脐血瘦素水平有明显的相关性 (r分别为 0 .5 2、0 .48,P<0 .0 0 1) ;4两组产妇的新生儿体重的比较也有明显的差异 (P<0 .0 1)。结论 :高胰岛素对糖尿病人胎盘肥胖基因的表达有上调作用 ,它可能是糖尿病产妇的胎儿容易出现超体重儿 (巨大儿 )

Wnt/β-连环蛋白信号途径活性的分析系统的建立

目的 :建立Wnt/ β -连环蛋白信号途径功能活性的分析系统。 方法 :首先构建一个表达 β -连环蛋白 -绿色荧光蛋白的融合蛋白的载体 ,pCMV -bcGFP ;再用之转染HEK2 93细胞 ,用G4 18和LiCl筛选出稳定表达该融合蛋白的细胞 ,克隆建株并鉴定。结果 :成功获得稳定表达该融合蛋白的细胞株 ,即 2 93-bc -GFP细胞株 ;在荧光显微镜下以及蛋白质印迹分析证实 :所获得的 2 93-bc -GFP细胞株表达该融合蛋白的基础水平极低 ;用Wnt1和LiCl处理后可以明显地使该融合蛋白在细胞内的水平升高。结论 :上述结果提示该分析系统是以Wnt依赖的方式、受 β -连环蛋白调节的。该分析系统可以用作一个功能报告系统 ,以鉴定肿瘤发生中导致 β-连环蛋白信号途径失调的潜在的上游因子 ,也同样可以用于筛选那些特异抑制人类肿瘤中

血管生成抑制剂arresten的cDNA一步法克隆与原核表达

目的 :克隆与表达arresten ;方法 :从正常的肝组织提取总RNA ,逆转录成cDNA ,根据软件RNASTRUCTURE3.5设计两对引物 ,巢式PCR扩增arresten基因 ,其中每个内引物 5’端加上特殊核苷酸 ,PCR产物用T4DNAPolymerase处理后直接与用NdeI ,EcoRI酶切的表达质粒pTYB1连接 ,转化大肠杆菌ER2 5 6 6。筛选重组子 ,诱导表达。结果 :快速一步法克隆表达了arresten。讨论 :一步法克隆快速 。

人内皮抑素cDNA克隆和初步表达

目的：克隆人内皮抑素基因， 获得初步表达产物，为进一步研究打下基础。方法：用RT-PCR方法从中国汉族人正常肝组织扩增出内皮抑素cDNA，T/A插入pUCm-T载体，测序，再插入表达载体 pKPL-3a，转化大肠杆菌 POP2136，42℃诱导表达，SDS-PAGE分析表达蛋白。结果：中国人内皮抑素cDNA开放阅读框架全长552bp，编码184个氨基酸， 其85位谷氨酸和98位天冬氨酸密码子的第三位碱基出现改变，但编码的氨基酸不变。结论：构建了中国人内皮抑素的克隆载体和表达载体，初步表达了约20kD人重组内皮抑素。

人骨骼肌肌钙蛋白C在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用

为了探索重组人骨骼肌型肌钙蛋白C(rhTnC)的抗肿瘤作用,采用PCR技术,从人乳腺cDNA文库中获得编码TnC的cDNA序列,在大肠杆菌中进行了表达.经镍柱亲和层析纯化后,分别检测其在体外对人脐静脉内皮细胞生长的抑制作用与对小鼠异位移植肿瘤(S-180)生长的抑制作用.结果表明,rhTnC在大肠杆菌中呈可溶性表达.分离纯化后的rhTnC在体外对人脐静脉内皮细胞生长呈剂量依赖性抑制(IC50为7.5μg/ml);对小鼠异位移植肿瘤的生长也有明显的抑制作用,在20mg/(kg·d)剂量下对S-180的抑制率为64.4%.以上结果说明,rhTnC可抑制血管内皮细胞生长,并具有抗肿瘤作用.

检测膀胱癌患者外周血中CK-20mRNA的临床意义

目的 :探讨膀胱肿瘤患者外周血中CK 2 0mRNA表达的临床意义。方法 :采用RT PCR技术检测 32例膀胱癌患者手术前、10例手术后及 10例健康者外周血标本中CK 2 0mRNA的表达。结果 :在手术前外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率为 15 .6 % (5 / 32 ) ;在手术后外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率为 2 0 .0 % (2 / 10 ) ,其中 1例术前外周血CK 2 0mRNA表达阴性 ,手术后变为阳性 ;健康者外周血均无CK 2 0mRNA表达。膀胱癌患者外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率与肿瘤大小、数目无显著关系 (P >0 .0 5 ) ,但随着肿瘤分级、分期的增加 ,CK 2 0的检出率似有增加的趋势。结论 :以RT PCR技术检测膀胱癌患者外周血中CK 2 0mRNA的表达 ,可早期诊断和监测膀胱肿瘤细胞血行微转移。

膀胱癌患者尿液中CK-20 mRNA检测的临床意义

目的 探讨检测尿液中CK 2 0mRNA诊断膀胱癌的可行性。方法 采用RT PCR技术检测 41例膀胱移形细胞癌、4例膀胱非移形细胞癌、15例膀胱炎伴血尿患者及 10例健康者的尿液脱落细胞中CK 2 0mRNA的表达 ,还包括 7种不同的肿瘤细胞系 (膀胱癌T2 4、肾癌 786 0和GRC 1、乳腺癌MCF 7和MDA MB 43 5、卵巢癌SKOV3 和 3AO)。结果 膀胱移形细胞癌中 3 6例CK 2 0阳性 ( 87 80 % ) ,GⅠ为 18/ 2 1( 85 71% ) ,GⅡ为 11/ 13 ( 84 62 % ) ,GⅢ为 7/ 7( 10 0 % ) ,统计差别无显著性意义 (P >0 0 5 ) ,Ta～ 1为 2 0 / 2 2 ( 90 91% ) ,T2～ 4为 16/ 19( 84 2 1% ) ,两组差别亦无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;膀胱非移形细胞癌均无CK 2 0阳性 ;膀胱炎伴血尿患者中 4例CK 2 0阳性 (特异性为 73 3 3 % ) ;19例膀胱癌组织及T2 4细胞系均有CK 2 0mRNA的表达 ,其余 6种细胞系及 10例健康者均为阴性。结论 CK 2 0在诊断膀胱癌有较高的敏感性和特异性 ,与膀胱癌的大小、数目、分期及分级无关 ,可用于膀胱癌的早期诊断和手术后随访。

瘦素与妊娠关系的研究进展

瘦素(leptin)是肥胖基因(obese gene,Ob)的表达产物,其分子量为16kD,主要由白色脂肪细胞产生,具有调节脂肪代谢的作用.近年的研究表明,leptin作为一种内分泌激素,具有多种重要的生理调节功能,且与妊娠关系密切.本文就瘦素与妊娠关系的研究进展作一综述.

人canstatin基因的克隆、表达、纯化及其生物活性测定

目的:克隆人Canstatin cDNA,在E.coli中融合表达和纯化,并测定表达产物抑制新生血管生成活性。方法:从中国人胎盘组织提取总RNA,RT-PCR扩增出Canstatin cDNA,克隆入pTYB1载体中并测序,构建原核表达载体pTYB1-hCAN,IPTG诱导表达,几丁质亲和纯化,鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验进行活性测定。结果:RT-PCR产物约为700bp,测序结果与文献报道序列一致。构建了人Canstatin原核表达载体pTYB1-hCAN,在大肠杆菌中表达。纯化的融合蛋白在CAM实验中能明显抑制血管生成。结论:克隆、表达了具有生物学活性的人canstatin蛋白。

保持端粒的端粒延伸替代机制

染色体的稳定需要端粒DNA保持一定的长度,端粒保持机制的激活在细胞永生和肿瘤发生中具有重要的作用。大部分人肿瘤细胞利用端粒酶来维持端粒DNA长度的稳定,然而在某些缺乏端粒酶活性的肿瘤细胞中,端粒DNA长度的稳定主要是通过端粒延伸替代机制(alternative lengthening of telomeres,ALT)来完成的。抑制端粒DNA保持机制的抗肿瘤治疗的发展将促进认识ALT及其在正常细胞中被抑制的机制。同时,对ALT机制的深入研究也将促进端粒抑制剂抗肿瘤治疗的发展。

对氧磷酯酶1与2型糖尿病肾病的关系

目的 探讨血清对氧磷酯酶 1(PON1)活性与 2型糖尿病 (DM)并发肾病 (DN)的关系。方法 血清PON1活性用酚乙酸酯为底物测定 ,血浆氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)用ELISA法测定 ,尿 2 4小时微量白蛋白用放免法测定。结果 91例 2型DM患者的PON1活性比 5 4例正常对照显著降低〔(138.2± 31.4 )kU/Lvs (184 .1± 2 9.5 )kU/L ,P <0 .0 0 1〕 ,且 2型DM的Ⅰ组 (UAER <30mg/ 2 4h)、Ⅱ组 (UAER 30～ 30 0mg/ 2 4h)和Ⅲ组 (UAER >30 0mg/ 2 4h)相比 ,PON1活性依次显著下降〔(15 1.8± 2 4 .5 )kU/L ,(12 4 .5± 32 .8)kU/L ,(10 1.1± 36 .6 )kU/L ,P <0 .0 1〕 ,而ox LDL的浓度却依次显著升高〔(6 16 .2± 135 .7) μg/L ,(75 3.9± 132 .5 ) μg/L ,(875 .1± 15 3.2 ) μg/L ,P <0 .0 1〕。PON1活性与ox LDL的浓度呈高度负相关 (r =- 0 .83,P <0 .0 0 1) ,也与UAER呈负相关 (r =- 0 .2 8,P<0 .0 5 ) ,多元回归分析表明PON1活性是 2型DM并发DN的高度危险因素 (P <0 .0 1)。结论 PON1活性在 2型DM显著下降 ,且在并发DN的 2型DM患者下降更显著。PON1活性与ox LDL呈负相关。PON1活性降低是