细胞微缺氧模型的建立及其对胃癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:缺氧是实体瘤微环境的基本特征之一,体外制造微缺氧的细胞培养环境,对研究缺氧对肿瘤细胞的影响有重要意义。目前建立体外缺氧细胞培养模型的方法较为烦琐,尚缺少微缺氧对胃癌细胞影响较为完整的研究。本实验运用GasPaK产气袋法体外创建胃癌细胞微缺氧培养模型,并观察该状态下细胞生物学行为的变化。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件,血气分析监测RPMI-1640培养液中PO2、PCO2和pH值变化。流式细胞仪分析微缺氧对SGC-7901细胞周期分布的影响,光镜及透射电镜观察微缺氧条件下SGC-7901细胞形态的改变,台盼蓝染色计数微缺氧对活细胞数的影响,MTT法检测微缺氧对SGC-7901细胞粘附能力的影响,游走实验检测微缺氧对SGC-7901细胞游走运动能力的影响。结果:GasPaK产气袋法在0.5～48h内PO2、PCO2和pH稳定,并能达到微缺氧细胞培养的条件。微缺氧处理SGC-7901细胞16h后未见细胞周期的变化。微缺氧导致部分SGC-7901细胞形态发生改变。微缺氧处理16h后活细胞计数无明显下降,微缺氧组SGC-7901细胞粘附能力增强,游走穿膜细胞数(196±9)是对照组(114±7)的1.71倍(P<0.05)。结论:通过GasPaK产气袋法制造的微缺氧肿瘤细胞培养环境,达到了条件稳定、重复性好的特点。微缺氧对SGC-7901细胞有影响,但这种影响相对较小,SGC-7901细胞对微缺氧有一定的耐受性。

运用产气袋法制造微缺氧培养人胃癌细胞株SGC-7901

目的:运用GasPaK产气袋法制造微缺氧条件培养人胃癌细胞株SGC-7901并观察该细胞在微缺氧条件下超微结构的变化。方法:运用产气袋法(GasPaK)制造微缺氧条件,血气分析监测1640培养液中PO2、PCO2和pH值变化。透射电镜观察微缺氧对SGC-7901细胞超微结构的改变。结果:(1)GasPaK产气袋法在0·5-48h内PO2、PCO2和pH稳定,并能达到微缺氧细胞培养的条件;(2)微缺氧导致部分SGC-7901细胞超微结构发生改变。结论:通过GasPaK产气袋法制造的微缺氧肿瘤细胞培养环境,具有条件稳定、重复性好的持点。

基于Web方式的免疫学图文检索系统

建立免疫学图文检索系统,是解决医科大学重点基础课程《免疫学》教学中存在的免疫学知识的图文表达、图文检索以及网络远程教学等诸多问题的重要途径。该论文依托校园网,利用文本切分、图像分析以及智能化知识检索等技术,建立了免疫学图文检索系统,取得了良好的教学效果。

APOBEC3B羧基端抗乙肝病毒位点的筛选和鉴定

目的:筛选参与APOBEC3B羧基端脱氨酶及抗乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)活性的重要区域和关键位点。方法:定点突变构建羧基端活性中心附近的3个螺旋区段(α2、α3、α4)的缺失突变体和α4螺旋区内(D316、K320、E321、R327、D328)位点的突变体;Southern blot筛选APOBEC3B抑制HBV复制的重要区段和关键位点;不同DNA变性PCR(differential DNA denaturation PCR,3D-PCR)和克隆测序进行验证。结果:APOBEC3B羧基端脱氨酶活性中心周围的α3和α4螺旋区缺失后,其抗病毒活性消失;D316位点突变后APOBEC3B的脱氨酶活性和抗病毒活性消失。结论:APOBEC3B羧基端的D316位点是APOBEC3B脱氨酶和抗病毒的关键位点。

盐酸左氧氟沙星体外抗菌活性的研究

采用试管二倍稀释法测定了盐酸左氧氟沙星对临床分离的279株细菌的最低抑菌浓度（MIC），并与环丙沙星、氧氟沙星作了比较。结果表明：肺炎杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌及痢疾杆菌对该药甚为敏感。盐酸左氧氟沙星对上述细菌MIC的范围、MIC50、MIC90 分别为0．03～128μg／ml、0．03μg／ml、4μg／ml；0．03～128μg／ml、0．06μg／ml、16μg／ml；0．03～64μg／ml、0．03μg／ml、0．125μg／ml；0．03～2μg／ml、0．03μg／ml、2μg／ml，较氧氟沙星抗菌作用强。

人肠道病毒D68型5′UTR间隔区域对下游基因表达的影响

【背景】人肠道病毒D68型(EV-D68)属于小RNA病毒科肠道病毒属人肠道病毒D组,在2014年8月至2015年1月间,该病毒引起的感染在北美显著增多,我国也出现流行。相对于原始的Fermon毒株,流行株5′UTR区域几乎都存在一两处缺失,在起始密码子ATG前还存在两处ataaca重复序列,这两处位点的功能尚未见报道。【目的】探讨流行株5′UTR区域的缺失对下游基因表达的影响,以及ataaca重复序列的功能。【方法】通过序列比对分析现阶段流行株与原始毒株Fermon株5′UTR的差异以及保守区域,利用分子生物学方法缺失上述区域后,利用双荧光素酶报告系统分析5′UTR中上述区域对下游报告基因的影响。【结果】序列比对分析发现,目前流行的EV-D68毒株在对应于Fermon株基因组5′UTR的685-707区域发生了23个碱基的缺失,而部分毒株还在718-729区域发生了第二处缺失。荧光素酶结果显示,仅第一处缺失可以极大地提高下游基因的表达量,同时具有两处缺失则与野生型几乎相当,而仅缺失第二段序列则降低了下游基因的表达量。此外,还发现第一处缺失中的序列可能对下游基因表达起到了抑制作用,而靠近起始密码子的ataaca序列作用尚不明确。【结论】目前流行的EV-D68毒株在5′UTR区域大多出现了一两处缺失,第一处缺失极大地增强了下游报告基因的表达,而第二处缺失具有相反的功能,这一现象可能与起始密码子前的两处ataaca重复序列有关。