Beclin-1、P62、LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达变化

目的:探讨自噬相关蛋白Beclin-1、P62及微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3B)在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达及意义。方法:生长至对数生长期的肺炎链球菌标准株D39用无菌PBS调节浓度为1.5×109CFU/mL,采用鼻滴的方法对50只SPF级雌性Balb/c鼠(6~8周,16~20 g)进行处理,分别在感染后0、6、12、24、48 h收集Balb/c小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织,瑞氏-吉姆萨染色进行BALF细胞计数,HE染色观察肺组织病理学改变,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、P62、LC3B在肺组织中的表达水平,免疫荧光观察LC3B在肺组织中的表达情况。结果:HE染色显示,小鼠鼻饲肺炎链球菌后12 h及24 h后肺组织内出现大量炎症细胞浸润。BALF中总细胞数量及中性粒细胞数量于感染后6 h开始增高[(1.280±0.506)vs.(6.272±1.312),P=0.000;(0.000±0.000)vs.(3.456±1.308),P=0.000],在12 h时达到高峰[(1.280±0.506)vs.(19.456±0.997),P=0.000;(0.000±0.000)vs.(15.040±1.012),P=0.000],48 h后基本恢复正常水平[(1.280±0.506)vs.(3.520±0.933),P=0.005;(0.000±0.000)vs.(0.128±0.175),P=0.835]。Western blot结果显示:自噬相关蛋白Beclin-1于感染后6 h开始增加[(0.626±0.078)vs.(0.921±0.093),P=0.002],48 h时达到最高水平[(0.626±0.078)vs.(1.884±0.158),P=0.000];自噬相关蛋白P62于感染后6 h开始减少[(2.915±0.094)vs.(2.275±0.269),P=0.000],48 h时降低至最低水平[(2.915±0.094)vs.(1.178±0.142),P=0.000];自噬相关蛋白LC3B于感染后12 h开始升高[(0.747±0.197)vs.(1.429±0.318),P=0.006],24 h时达到高峰[(0.747±0.197)vs.(2.002±0.451),P=0.000],48 h后降低[(0.747±0.197)vs.(1.563±0.501),P=0.002]。免疫荧光显示:小鼠感染后12 h与24 h,肺组织中LC3B蛋白表达水平增加。结论:肺炎链球菌感染小鼠肺部后激活自噬的发生,且自噬在免疫调节过程中发挥着重要作用。