MBBS留学生“病原生物学实验”在线课程调研——以重庆医科大学为例

文章以重庆医科大学2018级MBBS留学生班级为研究对象,通过问卷对留学生“病原生物学实验”在线课程质量进行调查分析,并根据调查结果提出了相应建议,包括在线实验课尽量结合线下实验室操作,设计多样化的在线课程活动并促进学生互动,采用循序渐进、多维度的在线课程测评方式,等等。

用虚拟实验软件进行医学免疫学和病原生物学实验考试的实践

随着信息科学技术的迅猛发展,计算机、虚拟现实等技术已进入社会的各个领域,产生了巨大的影响。在教育领域,多媒体、虚拟现实等技术已逐渐成为有效的教学媒体和工具,成为实验教学的新手段,使教学模式发生了巨大变化。

留学生医学微生物学教学的实践与探索

通过分析医学留学生的特点,针对性地从选择合适教学内容、综合应用多媒体、灵活选择教学方法、充分利用实验的互补性等方面,经多年探索与实践,提出了积极、有效改进留学生教学的教学方法及手段,提高了留学生医学微生物学教学质量,并为完善留学生医学教育提供参考。

流程讨论式教学在病原生物学实验中的应用

病原生物学是连接基础医学和临床医学的重要桥梁,实验教学更是体现其桥梁作用的重要手段。实验教学围绕尽快培养学生临床思维能力为中心,通过改革实验教学方法,引入流程讨论式教学,使学生从被动教育转变为主动学习、主动思维,培养了学生的自我学习能力、临床思维能力,为学生尽快适应临床工作奠定了坚实基础。

重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段表达纯化及生物活性鉴定

目的获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18(sCR1-SCR15-18)蛋白。方法重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA亲和层析后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性。结果得到了有较高表达量、较高纯度和较好生物学活性的sCR1-SCR-15-18蛋白。结论优化了sCR1-SCR15-18蛋白的表达、纯化和复性的参数,所获结果为进一步动物体内保护实验研究奠定了基础。

登革病毒中国株E基因重组的生物信息学分析

目的:了解我国登革病毒(Dengue virus,DV)包膜蛋白基因(Envelope,E)重组的发生情况。方法:从GenBank收集共70个DV中国株的E基因序列,Clustal-W比对后,重组检测软件包RDP3检测E基因中可能存在的重组事件,并经Mega4构建系统发生树验证所检测的重组事件的可靠性和真实性。结果:DV-1型中E基因区存在3个重组事件,共4个重组子,分别是1995、1997、1999年和2004年分离的DV病毒株,在其它3个血清型的DV病毒株中没有检测到重组,也未检测到血清型间重组。结论:我国DV 1型血清型E基因区域存在基因重组。

加强医学免疫学与临床学科教学联系的探讨

免疫学与临床医学有着非常密切的关系.内科、外科、儿科和妇产科等新版教材对免疫学的教学提出了新的要求.通过调研免疫学知识点在临床学科的分布,对免疫学教学内容优化,教学改革及与后续课程衔接等问题提出看法.

重庆市汉族健康人群白细胞介素-1基因多态性的研究

为了了解白细胞介素-1基因在中国重庆市汉族健康人群中的分布及其与不同种族比较的特点,采用了聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)的方法,对140名重庆市汉族健康者的IL-1B-511基因多态性和IL-1RN第2内含子可变数目串联重复序列多态性进行检测,并结合相关文献进行了不同种族间的分析比较。结果表明重庆市汉族健康人群中IL-1B-511的各基因型频率为C/T型0.58、T/T型0.50、C/C型0.32,与西班牙白种人相比,重庆地区汉族人IL-1B-511等位基因频率存在明显差异(P<0.05)。IL-1RN的各基因型频率为1/1型0.93、1/2型0.05、1/4型0.01、4/4型0.01,与西班牙白种人及南非黑种人相比,重庆地区汉族人IL-1RN等位基因频率存在明显差异(P<0.05)。由此可以得出重庆地区汉族人群IL-1B-511位点存在C/T多态性和IL-1RN基因的第2号内含子存在可变数目串联重复序列多态性,其在不同种族间的分布存在着差异。

重庆市耐多药肺结核可疑患者药敏结果分析

目的:通过分析重庆市耐多药肺结核(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)可疑患者药敏结果,为重庆市耐多药结核病的发现及控制提供参考和依据。方法:2014年7月至2016年2月重庆市39个区县573例MDR-TB可疑患者痰培养阳性分离株,采用比例法进行4种一线抗结核药物和6种二线抗结核药物的药敏试验,对药敏结果进行统计分析。结果:573例MDR-TB可疑患者的MDR-TB检出率为25.0%,明显高于单耐药结核病(single drug-resistant tuberculosis,SDR-TB)检出率(9.6%)及多耐药结核病(poly drug-resistant tuberculosis,PDR-TB)检出率(8.0%)(P<0.001)。高危人群MDR-TB检出率为26.6%(130/488),明显高于新患者的15.3%(13/85)(P=0.026)。高危人群中,复治失败患者MDR-TB检出率最高,为42.1%(16/38),其次为初治失败患者,为40.0%(18/45)。结论:重庆市耐多药肺结核可疑患者MDR-TB检出率高,耐多药肺结核防控形势严峻。高危人群尤其是复治失败和初治失败患者应该作为耐多药肺结核筛查的重点人群。

ADAR1 p150和p110参与肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)对肝细胞癌(liver hepatocellular carcinoma,LIHC)增殖、迁移与侵袭的影响。方法:利用基因表达谱交互式分析网站GEPIA检测ADAR1在LIHC中的表达水平和预后价值;提取人体肝癌标本的蛋白,通过Western blot实验检测ADAR1的表达情况。将ADAR1 p150和p110过表达质粒和靶向ADAR1 p150和p110的小干扰RNA分别转染进HepG2和Huh7细胞,利用Western blot和qPCR检测转染后细胞的ADAR1表达情况。通过CCK-8实验检测ADAR1对肝癌细胞增殖能力的影响。通过细胞划痕实验和Transwell实验检测ADAR1对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。最后,在DAVID在线数据库中分析与ADAR1相关的信号通路,利用Western blot实验检测信号通路中相关蛋白的表达。结果:肝癌组织中ADAR1蛋白质水平明显高于癌旁组织,这与生物信息学的预测一致,且高表达的ADAR1与肝癌的不良预后相关;通过CCK-8实验,本研究发现过表达ADAR1可以促进肝癌细胞的增殖能力(P<0.05),敲低ADAR1使肝癌细胞增殖能力下降(P<0.05)。通过划痕和Transwell实验,本研究发现ADAR1的过表达促进了肝癌细胞的迁移和侵袭(P<0.05),敲低ADAR1后,肝癌细胞迁移和侵袭能力受到抑制(P<0.05)。DAVID在线分析结果显示,ADAR1主要富集在Wnt信号通路中。Western blot结果提示,过表达ADAR1抑制GSK3β表达和β-catenin的磷酸化水平,敲低ADAR1后GSK3β表达和β-catenin的磷酸化水平升高。结论:本研究结果表明,ADAR1在肝癌中处于高表达水平,可激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进肝癌的增殖、迁移和侵袭。

坦索罗辛对大鼠细菌性前列腺炎组织中左氧氟沙星药动学的影响

目的探讨坦索罗辛对急性细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中左氧氟沙星药动学的影响。方法将96只急性细菌性前列腺炎模型大鼠随机分为实验组（左氧氟沙星和坦索罗辛联合用药组）和对照组（单用左氧氟沙星组），每组48只，分别在给药后0．125、0．25、0．5、1、2、4、8和12h每个时间点处死6只大鼠，采集两组动物的前列腺制作组织匀浆，用HPLC法测定前列腺组织中左氧氟沙星浓度，3p97软件计算药动学参数。结果实验组和对照组药．时曲线均符合一室模型。主要药动学参数如下：t1／2分别为（4．78±0．75）h和（3．64±0．88）h,tpeak分别为（1．18±0．10）h和（O．81±0．29）h，Cmax分别为（6．16±0．57）μg／g和（3．91±0．62）gg／g，AUC0-12分别为（41．91±1．01）μg·h／g和（22．70±3．08）μg·h／g。结论坦索罗辛可以明显提高左氧氟沙星在急性细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中的药物浓度。

多重耐药纹带棒状杆菌的耐药机制研究

目的研究多重耐药纹带棒状杆菌(MDR-Cs)的耐药机制。方法用微量肉汤稀释法检测临床分离的48株MDR-Cs的最低抑菌浓度(MIC);聚合酶连反应检测菌株的核糖体甲基化酶基因(ermX)、核糖体保护蛋白基因(tet(W))、DNA螺旋酶A亚单位基因(gyrA)和接合型转座子Tn1545整合酶基因(intTn)、L,D-转肽酶基因(ldt1/2),并测序分析。结果根据2007年CLSI M45文件的标准检测14种抗菌药物的敏感性,所有被测菌株均表现出多重耐药;ermX、tet(W)和intTn基因检出率分别为93.8%、100%和100%;与标准菌株比对,所有菌株的gyrA基因序列均表现为以间隔3个氨基酸的丝氨酸和天冬氨酸分别突变为苯丙氨酸和丙氨酸的双点突变;未检出ldt1/2。结论中国重庆地区的MDR-Cs对青霉素、Ⅲ、Ⅳ代头孢菌素、四环素、喹诺酮类和复方磺胺甲噁唑表现出全耐药,对万古霉素、利奈唑胺表现为全敏感;菌株介导ermX和tet(W)基因分别对红霉素和四环素耐药,介导gyrA基因双位点突变对喹诺酮类高水平耐药,所有菌株均携带转座子Tn1545整合酶intTn基因。

酪酸梭菌诱导结肠癌SW-480细胞凋亡及作用机制

目的探讨酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)诱导人结肠癌SW-480细胞凋亡的作用及机制。方法采用不同浓度的酪酸梭菌(1.5×103、1.5×104、1.5×105、1.5×106、1.5×107、1.5×108CFU/mL)在不同作用时间(24、48、72、96 h)处理结肠癌SW-480细胞后,CCK8法检测CB对SW-480细胞的增殖抑制。电镜观察CB对SW-480细胞形态的影响。Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡。Caspase试剂盒检测SW-480细胞中Caspase-3和Caspase-9的活性。Western blot法检测SW-480细胞Bax和Bcl-2凋亡蛋白表达的变化。结果酪酸梭菌对SW-480细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性;菌液浓度为1.5×107CFU/mL和1.5×108CFU/mL的酪酸梭菌处理后的SW-480细胞形成典型的凋亡小体;酪酸梭菌(1.5×107CFU/mL和1.5×108CFU/mL)处理能显著增强SW-480细胞Caspase-3和Caspase-9的活性,促进SW-480细胞凋亡(P<0.01);随着菌液浓度的增加,凋亡蛋白Bax的表达增强,而抑凋亡蛋白Bcl-2的表达减弱。结论酪酸梭菌可诱导SW-480细胞凋亡,其作用机制与凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspase-3、caspase-9的表达有关。

血小板分布宽度作为新型血小板活化特异性标志物的评价

目的：探讨血小板分布宽度（Platelet distribution width,PDW）作为血小板活化指标的可行性研究。方法：应用Sysmex XE-2100全自动血细胞分析仪测定100份本院体检的25~40周岁正常人群和100名已确诊的血小板活化患者的血常规标本的平均血小板体积（Mean platelet volume,MPV）与PDW值。随机选取本院患者血常规标本100份,在采血后的1、2、3、4 h检测MPV与PDW值。结果：已确诊的血小板活化患者的MPV与PDW值均显著高于正常人群MPV与PDW值（P〈0.001）。血样本采集后的12、、3、4h时的MPV值升高,但PDW值均值逐渐降低。采血后4h的MPV值明显高于采血后1h的MPV检测值（P〈0.05）,但4 h时的PDW值明显低于1 h时的PDW检测值（P〈0.01）。结论：MPV与PDW检测简单,在血小板活化时显著增高。血小板发生储存损伤时,PDW值却降低,故PDW是比较特异的血小板活化指标。

酪酸梭菌培养上清液通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制SW-480细胞增殖

目的研究酪酸梭菌培养上清液(C.butyricum culture supernatant;C.b.cs)对结肠癌SW-480细胞增殖的抑制作用,并探讨C.b.cs中可能的活性成分及相关分子机制。方法用C.b.cs处理后SW-480细胞,CCK-8及FCM检测细胞的增殖和凋亡。HPLC检测C.b.cs中主要的有机酸含量。Western blot及RT-q PCR检测经过C.b.cs和丁酸处理后的TLR4的表达。用TLR4配体脂多糖(LPS)激活TLR4,再用C.b.cs和丁酸处理细胞,观察TLR4和NF-κB的表达。结果 C.b.cs呈浓度依赖性地抑制SW-480增殖,并能诱导凋亡和G0/G1期阻滞。HPLC检测C.b.cs中乙酸和丁酸的含量分别为9.27 g/L和4.53 g/L。C.b.cs和丁酸可下调TLR4的表达(P<0.01),并下调TLR4的下游基因NF-κB的表达(P<0.05)。LPS激活TLR4的表达(P<0.01)后,C.b.cs和丁酸下调TLR4和NF-κB的表达(P<0.05)。结论 C.b.cs通过下调TLR4/NF-κB通路抑制SW-480细胞增殖,丁酸可能是发挥抑制作用的活性成分之一。

幽门螺杆菌感染对小鼠食道下端菌群的影响

目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌喂菌液4周后同时处死,取食道下端组织提取细菌的DNA,以原核生物16S rDNAV6区通用引物采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶技术(PCR-DGGE)对V6区进行扩增,用Quantity-One 1-DAnalysis software.对DGGE图谱进行菌群分析,并将DGGE图谱上的组间差异条带用16S rDNAV6区引物分别扩增后,DNA测序,BLAST比对分析。结果 DGGE指纹图谱分析显示,实验组DNA条带数量极显著高于对照组(P<0.01),多样性指数、丰富度指数均显著高于对照组(0.01<P<0.05);菌群聚类分析能很好地在相似性系统树中分开,主成分分析不同组的菌群分别聚集在不同的位置,BLAST比对分析感染组出现特有细菌。结论食道下端定植着以乳杆菌、拟杆菌为优势菌的稳定菌群,幽门螺杆菌感染后菌群结构变化为以葡萄球菌、不动杆菌、无芽胞杆菌为优势菌的菌群。

幽门螺杆菌HpaA重组蛋白的表达及免疫效果检测

目的表达幽门螺杆菌hpaA基因的重组蛋白,并检测其抗原性和免疫原性。方法用PCR方法从H.pylori DNA中扩增hpaA基因片段,插入原核表达载体pQE-30,转化大肠杆菌DH5α,进行诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白的相对分子质量和表达形式,Ni2+-NTA树脂纯化后,用Westernblot鉴定其反应原性。用重组蛋白免疫家兔,检测其免疫原性。用重组蛋白免疫小鼠,分别检测胃黏膜、PP细胞悬液及小肠黏液中的IgG和sIgA的含量。结果重组表达质粒pQE30-hpaA构建正确,所得序列完整,插入的基因片段全长783bp,与基因文库中的hpaA基因同源性达97.3%。表达产物相对分子质量为30000,目的蛋白表达量占全菌总量的31.67%,主要存在于碎菌后上清中,纯度在90%以上。Westernblot显示该蛋白可与病人血清特异性结合,免疫血清能与重组蛋白反应,双扩散效价为1:16。小鼠体内IgG、IgA、sIgA含量明显高于PBS对照组。结论已获得高纯度的HpaA重组蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于研制幽门螺杆菌疫苗。