白藜芦醇通过Sirtuins 1通路促进自噬减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的观察白藜芦醇(Res)在大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤中脑保护作用与自噬的关系。方法随机将大鼠分成假手术组(S组)、脑缺血/再灌注模型组(I/R组)、低和高剂量(15和40 mg/kg)Res处理组(R1和R2组),其中将R2组另设2个亚组:R2+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和R2+Sirt1抑制剂Sirtinol组。线栓法构建大鼠I/R模型。缺血2 h,再灌注24 h后,用尼氏染色观察皮质区的组织学形态;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑组织的梗死体积;用real-time QPCR和Western blot检测脑组织中Sirt1和LC3的mRNA和蛋白表达。结果与S组相比,I/R组大鼠可见明显的脑梗死灶,显微镜下见病理损伤改变,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Sirt1表达均有上升。Res预处理后,能明显减轻I/R大鼠皮质区的病理损伤,减少脑梗死体积(P<0.01),显著增加I/R大鼠脑组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Sirt1的表达(P<0.01);而Sirt1抑制剂及3-MA能削弱Res的作用。结论 Res减轻大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的脑保护作用可能与Res通过提高Sirt1的表达进而促进自噬来完成的。

Sulfiredoxin-1对星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

目的探讨Sulfiredoxin-1(Srxn1)对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的星形胶质细胞损伤的保护作用。方法 1应用RNAi技术将Srxn1干扰小发夹RNA(shRNA)及阴性载体(negative control)转染至星形胶质细胞,Real-time quantitative PCR(QPCR)和Western blot检测转染后Srxn1的基因和蛋白表达水平;2实验分为control组、control+OGD/R组、negative control(NC)+OGD/R组、sh-Srxn1+OGD/R组(n=3),细胞转染72 h后建立OGD模型,6 h后予以复氧,模拟再灌注模型;3复氧12 h后,MTS法检测细胞活性,Hoechst 33342检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果 1shRNA-Srxn1转染细胞后,与空白组和阴性组比较,干扰组Srxn1 mRNA及蛋白表达水平明显降低,分别降低47%和58.5%;2MTS结果显示,干扰sh-Srxn1+OGD/R组细胞活性较control+OGD/R组显著下降[(38.79±2.14)vs(69.35±10.54),P<0.05];Hoechst 33342结果显示,干扰sh-Srxn1+OGD/R组细胞凋亡较control+OGD/R组明显增加[(51.67±7.64)vs(25.00±5.00),P<0.01];3Western blot结果显示,与control+OGD/R组比较,干扰sh-Srxn1+OGD/R组细胞Bcl-2的表达明显降低(P<0.05),Bax的表达明显上调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01)。结论 Srxn1对OGD/R引起的星形胶质细胞的氧化损伤具有重要的保护作用,这种保护可能与其抗凋亡作用相关。