PBL教学法在病理生理学教学中应用的问卷调查

采用问卷调查比较PBL与传统教学法(LBL)在病理生理学教学中应用的优缺点,结果PBL评分均优于LBL。

羟基积雪草苷对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究羟基积雪草苷对小鼠急性肝损伤的保护作用及其初步机制。方法建立四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤模型,检测羟基积雪草苷(3、10、30 mg/kg)对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及肝组织一氧化氮(NO)的影响;Western-blotting检测肝组织中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达,并取部分肝组织进行HE染色,观察病理学改变。结果羟基积雪草苷明显降低急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性及肝组织中NO的量,抑制肝组织中iNOS、COX-2蛋白的表达,病理切片显示羟基积雪草苷组病变程度远较模型组为轻。结论羟基积雪草苷具有一定的肝保护作用,其机制可能与其抗炎作用有关。

乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对内皮细胞增殖的影响及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的作用

目的研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用。方法低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes。采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/ml Exosomes对HUVECs促增殖作用的影响,流式细胞仪测定200μg/ml Exosomes对HUVECs细胞周期的影响,Western blotting检测200μg/ml Exosomes诱导下HUVECs细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的表达水平。结果乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes可促进HUVECs细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24h后,S期细胞比例(27.8%±3.37%)较对照组(15.34%±0.71%)增加(P<0.05),G1/S期细胞比例(2.22%±0.37%)与对照组(4.67%±0.47%)比较下降(P<0.05)。Western blotting结果显示,200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24、48、72h后,磷酸化ERK表达(0.3378±0.0415,0.4967±0.0511,0.9205±0.0462)与磷酸化Akt蛋白表达(0.4091±0.0361,0.5484±0.0382,0.7496±0.0481)与对照组(磷酸化ERK 0.1836±0.0324,磷酸化Akt 0.2582±0.0215)相比有所增加(P<0.05)。结论乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes能促进HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变,以及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化有关。

UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响

目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW7 mRNA及蛋白在UO-126阻断丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein ki-nases,MAPK)信号通路前后的表达情况。结果:MTT结果显示各浓度UO-126具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。免疫荧光检测显示UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强。RT-PCR及West-ern blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞明显增高(P<0.05)。结论:MAPK信号通路阻断剂UO-126抑制HeLa细胞增殖,FBW7位于MAPK信号通路的下游。

顺铂联合exosomes抗小鼠肝癌效应的实验研究

目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制。方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H22源exosomes瘤苗免疫小鼠,3H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响。以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响。结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5mg/L顺铂预处理24h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P<0.05)。顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加。顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P<0.05)。结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关。

大鼠皮层神经元原代培养方法的改进

目的:建立一种简单、较理想的新生大鼠皮层神经元体外原代培养方法。方法:采用低浓度、短时间胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮层神经元悬液,进行培养。结果:在体外培养条件下神经元结构特征明显,并能形成典型的神经元网络。结论:本方法适合普通实验室进行大鼠皮层神经元体外培养。

中效原理在顺铂、足叶乙甙对人肺癌细胞株(PAa)相互作用中的应用

目的 :利用中效原理观察顺铂、足叶乙甙配伍在体外对人肺癌细胞株 (PAa)的相互作用 ,判断联合用药的效果。方法 :采用MTT法利用中效原理判断联合用药的效果。结果 :两种药物单独应用时随药物剂量增加 ,其效应也增加 ,两种药物合用时产生协同作用 ,两种药物合用时的浓度比例及给药时间次序不同均会影响效应大小。结论 :上述两种药物合用产生协同作用 。

大蒜素诱导鼠肝癌细胞MM45T.Li细胞株凋亡

目的探讨大蒜素对体外培养的鼠肝癌细胞MM45T.Li生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应,透射电镜及流式细胞仪观察大蒜素处理MM45T.Li细胞后细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法证实大蒜素对MM45T.Li细胞生长有抑制作用,呈浓度、剂量-效应关系。②DAN琼脂糖凝胶电泳可见细胞凋亡特征性“DAN梯形”。③流式细胞仪检测发现大蒜素处理MM45T.Li细胞后细胞周期滞留于G0/G1期,对照组及实验组细胞凋亡率分别为(4.98±4.841)%、(20.91±5.272)%,并可见凋亡峰。④透射电镜可见MM45T.Li细胞出现凋亡细胞形态学改变。结论大蒜素对鼠肝癌细胞MM45T.Li有抑制作用,其抑制作用可能与诱导肝癌细胞凋亡、阻抑细胞周期有关。

H_(22)源exosomes瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤及免疫调节作用

目的:探讨exosomes瘤苗对小鼠免疫功能及肝癌移植瘤生长的影响。方法:从培养的小鼠肝癌H22细胞上清中分离exosomes瘤苗,以H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,随机分为exosomes瘤苗接种组及PBS对照组。15d后处死小鼠,测量移植瘤体重量,计算抑瘤率;分别称取脾重、胸腺重,检测荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数;用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况和细胞毒活性;酶连免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞产生IL-2、INF-γ的能力。结果:接种exosomes瘤苗能显著抑制肿瘤生长,抑瘤率达42.26%;与对照组比较,实验组荷瘤鼠胸腺指数、脾指数显著提高(P<0.05);exosomes促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,同时脾淋巴细胞培养上清中IL-2、INF-γ的水平升高。结论:exosomes瘤苗可能通过增强小鼠的免疫功能抑制小鼠肝癌移植瘤生长。

姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响

【目的】研究姜黄素对人宫颈癌细胞Caski侵袭转移的影响并探讨其可能的机制。【方法】以10,25,50μmol/L姜黄素处理Caski细胞24,48,72h后,MTT法检测其对Caski细胞的生长抑制作用。应用Transwell小室进行人工重组基底膜(Matrigel)侵袭和运动实验,观察姜黄素对Caski细胞侵袭和转移的影响。Westernblot检测细胞中MMP-2、MT1-MMP和NF-κB蛋白水平变化。【结果】应用姜黄素处理后人宫颈癌细胞生长受到抑制且作用呈时效-量效依赖关系;同时细胞侵袭和迁移能力明显降低;MMP-2,MT1-MMP和NF-κB蛋白的表达均明显减弱。【结论】姜黄素能够减弱人宫颈癌细胞Caski的侵袭和转移,其机制可能与降低MMP-2,MT1-MMPandNF-κB的表达有关。

小鼠肝癌细胞(H_(22))源外泌体的体内抗肝癌作用研究

目的在荷瘤动物模型观察小鼠肝癌细胞(H22)来源的外泌体(exosomes)激发宿主抗肝癌免疫应答的效应。方法用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞H22源外泌体免疫小鼠,然后给小鼠皮下注射H22肿瘤细胞,观察肿瘤的生长状况。用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性;用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润情况。结果该外泌体使肿瘤出现时间延迟,肿瘤生长缓慢,小鼠生存率提高。促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,促进CD4+和CD8+T细胞活化。结论小鼠肝癌细胞(H22)源外泌体能诱导抗肿瘤应答,有效地诱导特异性的杀伤肿瘤细胞活性,有针对亲本细胞的免疫保护作用。

Amadori糖化白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油——蛋白激酶C级联的影响

目的 :探讨Amadori糖化血清白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油 (DAG)———蛋白激酶C(PKC)信号级联的影响及d-α-生育酚的干预作用。方法 :体外制备的Amadori糖化的牛血清白蛋白 (AGSA)分别在生理浓度葡萄糖 (5 .5mmol/L)和高浓度葡萄糖 (2 0mmol/L)培养液中作用于新鲜牛视网膜血管。采用薄层层析和放射自显影法测定DAG含量和PKC活性 ;并检测d -α-生育酚预处理后DAG、PKC改变。结果 :在生理葡萄糖浓度下 ,牛视网膜血管暴露于AGSA2 4h或 72h后细胞内DAG含量、PKC活性均较对照组显著增加 ,当AGSA和高葡萄糖同时作用于牛视网膜血管时 ,DAG -PKC级联显著激活 ,分别为正常葡萄糖组的 3.4 7倍和 4 .5 4倍 ;在正常血清培养液中 ,与 5 .5mmol/L的葡萄糖相比 ,2 0mmol/L高糖在 2 4h时并不刺激DAG含量增加 (P >0 .0 5 ) ,而 72h时则较对照组增加 4 5 % ,PKC活性较对照增加 5 6 % ,而d -α -生育酚可逆转上述生化改变。结论 :Amadori糖化血清白蛋白可在生理葡萄糖浓度下刺激DAG -PKC途径活化 ,从而影响血管一系列生理功能 ,而d -α-生育酚对血管生化改变有保护作用。

姜黄素联合木黄酮对人胰腺癌细胞株BXPC-3的作用

目的 体外观察姜黄素及木黄酮对人胰腺癌细胞株 ( BXPC- 3)增殖的抑制作用及两者联合应用时的抑制率及相互作用。方法 采用 MTT法测定两者对人胰腺癌细胞株 ( BXPC- 3)的增殖抑制率 ,利用中效原理判定两药合用的效果。结果 两种药单独应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加 ,它们的相关系数分别为 0 .95 3和0 .998,姜黄素的中效浓度为 2 89.16 μm ol/L,木黄酮的中效浓度为 10 7.5 5 μmol/L;两药合用时它们的相关系数为0 .987,中效浓度为 2 2 5 .2 0 ( 171.6 0 + 5 3.6 0 ) μm ol/L。大剂量 (大于中效剂量 )合用时是协同作用 ( CI<1) ,小剂量(小于中效剂量 )合用时是拮抗作用 ( CI>1)。结论 姜黄素联合木黄酮对人胰腺癌细胞株 BXPC- 3的生长有抑制作用 ,它们合用时大剂量是协同 。

大鼠脑皮质微血管内皮细胞的培养

目的:培养脑皮质微血管内皮细胞。方法:取～乳鼠脑皮质经不同孔径的筛网过滤后,用胶原酶振荡消15d Wistar,化获得的微血管内皮细胞进行培养,用Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定。结果:培养的细胞呈单层贴壁生长,～呈典型的铺79d路卵石样征象。结论:建立了一种简便易行的培养脑皮质微血管内皮细胞的方法。

自体肿瘤细胞药敏检测指导膀胱癌术后化疗

为了针对同一病理肿瘤不同个体术后选择性应用最为敏感的化疗药物．我们对１９９２年１月～１９９６年１２月收治的３６例膀胱移行细胞癌患者术中取出的活体标本制成单细胞悬液，对其行化疗药物敏感性检测。结果显示：同一病理级别膀胱癌对各种抗癌药物敏感性不同；单药总体敏感率与病理分级明显相关，二药联合应用随分级增加其敏感性明显高于单药。根据药敏结果进行治疗，３７例病人一年复发仅３例。体外药敏实验结果能指导临床用药，而且疗效较满意。

金雀异黄素与5-氟尿嘧啶对SGC-7901细胞的抑制作用

目的研究金雀异黄素（genistein，Gen）与5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法采用MTT法检测Gen和5-FU对SGC-7901细胞的抑制作用，流式细胞术检测细胞周期分布，并在透射电镜下观察细胞超微结构改变。结果Gen和5-Fu单用或联合应用对胃癌SGC-7901细胞的生长均有显著的增殖抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。两药联合应用时，当药物效应在0．2～0．8时，具有协同或相加作用（CI≤1）；18．8btmol／L的Gen作用后，62．97％的SGC-7901细胞阻滞在G2／M期；8．84μmol／L的5-FU作用后，63．76％的SGC-7901细胞阻滞在s期；3．06μmol／L的Gen与7．96μmol／L的5-Fu联合应用后，67．46％的SGC-7901细胞阻滞在G0／G1期。Gen和5-FU均可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论Gen与5-FU通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制胃癌细胞的生长，对胃癌细胞的增殖抑制具有协同作用。

Ras信号通路阻断剂FTI-277抑制HeLa细胞增殖及对cyclin E表达的影响

目的:观察Ras信号通路阻断剂(FTI-277)在人类宫颈癌细胞株HeLa细胞中对细胞周期素E(cyclin E)表达及对HeLa增殖、凋亡的影响情况。方法:采用MTT法观察不同浓度的FTI-277对HeLa细胞的生长抑制作用;流式细胞术(FCM)观察Hela细胞的细胞周期变化;RT-PCR、Western blot法检测FTI-277阻断Ras信号通路前后HeLa细胞cyclin E mRNA及蛋白表达。结果:各浓度范围FTI-277均能抑制HeLa细胞的增殖,且具有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞术分析显示,FTI-277作用后的HeLa细胞明显滞留于G1/S期,且具有时间依赖性。RT-PCR及Western blot结果显示,FTI-277作用前后HeLa细胞cyclin E mRNA表达无明显变化,而蛋白表达水平明显降低。结论:FTI-277可以抑制细胞增殖,Ras信号转导通路可能是通过影响HeLa细胞cyclin E转录后的翻译环节减少其表达。

表柔比星、羟喜树碱、顺铂对人膀胱癌细胞株的相互作用

目的：观察表柔比星（epirubicin，EPI）、羟喜树碱（hydroxy—camptothecin，HCPT）、顺铂（cisplatinum，DDP）在体外对人膀胱癌细胞株（T24）的相互作用。方法：采用四甲基偶氛唑蓝（MTT）法利用中效原理判断药物联合应用的效果及药物对膀胱癌细胞株粘贴力的影响。结果：3种药物单独应用随着药物剂量的增加，其效应也增加；EPI与HCPT或DDP联合时．两药大剂量（大于中效剂量）合用时可产生拮抗作用，小剂量（小于中效剂量）合用时可产生协同作用；HCPT与DDP联合时．在适当剂量（中效剂量×10^-2～中效剂量）合用时可产生协同作用；两药合用时的浓度比例及给药时间次序不同均会影响效应的大小；3种药物单用或合用均会使肿瘤细胞粘贴力下降．其下降程度与用药配伍情况有关。结论：两种药物合用时可以产生协同或拮抗作用．且效应大小与两药浓度比例及给药时间次序有关；3种药物均可降低肿瘤细胞的侵袭能力。

TCS对Eca-109的增殖抑制作用及其机制初探

目的:探讨天花粉蛋白(TCS)对食管癌Eca-109细胞增殖的影响及其作用机制。方法:采用MTT法检测TCS对Eca-109细胞增殖的抑制率;电子显微镜和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测Eca-109细胞Survivin mRNA表达变化;Western blot检测Survivin、Caspase-3与C-myc蛋白表达变化;TRAP-PCR银染法定性测定细胞的端粒酶活性。结果:TCS对Eca-109细胞增殖有抑制作用且具有剂量-时间效应;TCS明显诱导细胞凋亡,药物组凋亡率高于对照组(P<0.05),并且药物组的S期细胞明显高于对照组(P<0.05);TCS可降低Survivin mRNA和蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达,下调C-myc蛋白表达、使端粒酶活性降低。结论:TCS能够抑制Eca-109细胞增殖。其机制可能为TCS影响了细胞周期和抑制了Survivin表达。