“课程思政”融入《组织学与胚胎学》教学的探索与实践

“课程思政”是当前中国高校思想政治工作的新模式新理念.医学专业学生的“课程思政”是指用好课堂教学主渠道功能,将“课程思政”教育理念融入到专业课程的课堂教学过程中去,在注重培养学生医学专业知识技能同时将思想政治教育融入到课程教学的各环节、各方面.本文以《组织学与胚胎学》课程为专业背景和载体,对“课程思政”教学途径、具体教学逻辑进行了实践与探索.

重庆地区6197例变应性鼻炎儿童吸入性变应原临床分析

目的：探讨重庆地区儿童变应性鼻炎患者吸入性变应原原谱特点及其影响因素。方法：选取2006年1月至2012年4月就诊于重庆医科大学附属儿童医院耳鼻喉科的重庆地区4月~12岁过变应性鼻炎患儿6 197例,对其进行皮肤点刺试验（skin prick test,SPT）,分析变应原阳性率、阳性反应程度及阳性种类数与性别、年龄、居住环境的相关性。结果：1在6 197例变应性鼻炎患儿中,4 048例（65.32%）具有特应性,屋尘螨（65.06%）、粉尘螨（63.35%）和热带螨（40.07%）阳性率及其阳性程度居于前3位。22006年至2012年间变应原特应性阳性率（依次为50.64%、80.21%、81.20%、82.36%、77.34%、71.18%、56.01%）先急剧上升,然后趋于稳定再缓慢下降（r=-0.104,P=0.000）。3随着年龄的增长,变应原阳性率、阳性程度及阳性种类均增加（r分别为0.115、0.120、0.080;P分别为0.000、0.000、0.000）,性别特应性差异具有统计学差异（幼儿期：61.9%vs.63.8%,P=0.739;学龄前期：73.6%vs.69.7%,P=0.030;学龄期：78.4%vs.73.4%,P=0.002）。4在男童的幼儿期和学龄前期变应性鼻炎患儿中,主城区患儿变应原特应性阳性率明显高于郊县（幼儿期：43.8%vs.64.7%,P=0.023;学龄前期：68.4%vs.74.6%,P=0.027）。结论：重庆地区儿童变应性鼻炎患儿大都具有特应性,屋尘螨、粉尘螨和热带螨是主要的吸入性变应原,随着年龄增长,特应性程度增加,性别差异更明显。

讨论式教学在《组织学与胚胎学》教学中的实践与思考

在重庆医科大学临床医学类本科生《组织学与胚胎学》课程中实践讨论式教学，从设疑、小组学习、课堂讨论、总结与梳理等方面开展教学，并进行随堂测试以评价教学效果。测试表明讨论式教学效果良好，92.36%的学生答题正确率大于或等于60%。学生不但较好地掌握了课程知识点，也提高了综合能力。而教师精心拟定讨论题目、学生积极参与和教师及时梳理是讨论式教学的实施要点。

以转染白血病抑制因子基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞

目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LIF的阳性细胞。将原始生殖细胞(PGCs)种植到转染后细胞制备而成的饲养层上,在不添加外源性LIF的条件下培养,并对PGCs来源的细胞集落进行鉴定。结果经RT-PCR及Western blotting鉴定证实,转染pcDNA3.1(+)-LIF的人胚肺成纤维细胞表达LIF基因。在转染后人胚肺成纤维细胞上生长的PGCs可形成典型的鸟巢状集落,经检测集落碱性磷酸酶活性呈强阳性,表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81,及未分化标志Oct-4。结论用转染LIF基因后的人胚肺成纤维细胞作为饲养层能支持PGCs来源人胚胎生殖细胞的生长,维持自我更新。

结缔组织对人胎骨髓间充质干细胞向上皮分化的诱导作用

目的探讨结缔组织诱导人胎儿骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为上皮细胞的机制。方法取20例孕16～20周因故引产胎儿,10例选择性剖宫产妇羊膜,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测去上皮羊膜和胎儿肠壁结缔组织中表皮生长因子(EGF)的含量;分离、培养、扩增胎儿BMSCs;将4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记的第3代BMSCs(P3-BMSCs)种植于羊膜上,分别加入肠壁结缔组织上清液、羊膜上清液(均含EGF 30μg/L)、外源性EGF 30ug/L、30ng/L、完全培养基(1～5组)中。培养7d后,免疫组织化学和激光扫描共焦显微镜检测BMSCs表达的细胞角蛋白(CK)及CK20。结果每100mg肠壁结缔组织及羊膜中EGF含量分别为(320.22±0.257)pg、(299.20±0.994)pg。羊膜与肠壁结缔组织上清液或羊膜上清液联合诱导BMSCs后,其CK和CK20阳性细胞率均明显强于羊膜与外源性EGF诱导组以及单纯羊膜诱导组,P<0.01。羊膜与肠壁结缔组织上清液诱导后BMSCs表达CK20高于羊膜与羊膜上清液组,P<0.05。羊膜诱导组与外源性EGF联合诱导组间的差异无统计学意义。结论直接接触可能是羊膜结缔组织诱导BMSCs向上皮细胞分化的机制之一。肠壁结缔组织上清液和羊膜上清液均能联合羊膜诱导BMSCs向上皮细胞及具有肠上皮细胞表型的细胞分化。

几种组织培养上清液对造血祖细胞体外增殖分化的比较

目的：寻求既经济又有效的造血生长因子样活性物质。方法：采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术，检测胎肌培养上清液、骨髓基质细胞培养上清液、胸腺细胞培养上清液与脾细胞培养上清液对造血祖细胞CFU-GM、BFU-E和CFU-Mix增殖分化的影响。结果：胎肌培养上清液和对CFU-GM和CFU-Mix的体外增殖与分化有明显刺激作用，而胸腺与脾细胞条件培养上清液对BFU-E的生长有显著促进作用。结论：胎肌培养上清液中可能含GM-CSF样活性物质，而胸腺与脾细胞培养上清液具有较高IL-3样活性，可以利用组织与细胞培养上清液替代重组造血生长因子进行造血细胞的实验研究和临床诊断。

中药复方S-抗毒合剂对兔组织器官的形态学影响

目的 观察中药复方S-抗毒合剂对实验兔组织器官的形态学影响。方法 通过在日粮中添加中药复方S-抗毒合剂饲喂实验兔30 d,无痛处死后解剖观察,组织切片行光镜、电镜观察。结果 大体观察、光镜和电镜观察实验组与对照组组织器官结构无明显差异。结论 中药复方S-抗毒合剂对动物组织器官形态结构无明显影响。

包皮成纤维细胞作为饲养层对人胚胎生殖细胞生长的影响

目的以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定。方法分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P3～P30代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定(ELISA)-双抗夹心法检测其分泌物成纤维细胞生长因子(FGF)的含量;分离培养5～11周人胚胎原始生殖细胞,在不添加任何细胞因子的人包皮成纤维细胞饲养层上培养人胚胎生殖细胞;细胞化学法检测人胚胎生殖细胞碱性磷酸酶的活性,免疫细胞化学法检测其胚胎表面特异性抗原SSEA-1及SSEA-4的表达,RT-PCR法检测Oct-4的表达。结果包皮成纤维细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;P3～P30代包皮成纤维细胞上清液中FGF含量在(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L之间波动。分离培养的人胚胎生殖细胞在饲养层上可形成典型的胚胎生殖细胞集落,体外连续培养超过3代,其碱性磷酸酶活性呈强阳性,集落未分化标志检测显示SSEA-l、SSEA-4呈阳性,Oct-4表达阳性。结论用人包皮成纤维细胞作为饲养层能支持人胚胎生殖细胞的生长并维持未分化状态。

结缔组织生长因子全长及其缺失突变体重组腺病毒的构建和鉴定

目的:结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)含有4个不同功能结构域,构建表达带有3×Flag标签的全长基因及5个缺失突变体的重组腺病毒,以研究CTGF各结构域的功能和作用机制。方法:通过聚合酶链反应(Polymerasechain reaction,PCR)等克隆方法制备目标质粒DNA,然后通过腺病毒穿梭载体与骨架载体的重组、包装构建全长CTGF和缺失突变体重组腺病毒。用anti-Flag抗体作为一抗做Western blot检测目的基因表达情况。结果:通过腺病毒基因组DNA PCR确认有CTGF全长和缺失突变体的存在;Western blot法验证了CTGF全长和缺失突变体的表达。结论:成功构建了6个表达CTGF全长和缺失突变体的重组腺病毒,为进一步研究CTGF的结构域功能奠定了基础。

人胚胎生殖细胞饲养层的制备

目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察细胞生长状况,免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术检测细胞纯度、生长曲线及细胞周期,筛选丝裂霉素C作用的最佳浓度和时间。分离5～11周人胚胎原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)并培养于经丝裂霉素C处理的HFF饲养层上,观察人EGCs生长情况。结果:机械法和组织消化法结合分离HFF方法可靠,纯度高,细胞生长活性好,能快速进入对数生长期,细胞周期与细胞生长曲线保持一致,细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;丝裂霉素C抑制细胞增殖的适宜浓度及时间为12.5 mg/L作用2.5 h;分离的人PGCs在该饲养层上培养可形成典型的EGCs集落,体外连续培养超过3代。结论:HFF饲养层能有效地支持人EGCs的生长。

《组织学与胚胎学》混合式教学的实践探索

混合式教学通过充分融合线上自主学习和线下课堂学习, 能够调动学生自主性、增强学生的体验。研究者在重庆医科大学护理本科《组织学与胚胎学》147人的大班教学中, 开展了这一新的教学方式。首先通过学情分析进行混合式教学设计, 建设在线教学资源;其次通过学习导图引导学生自主学习和小组讨论;然后在线下课堂中进行翻转课堂的教学实施;最后通过结课调查问卷和期末考试评估混合式教学效果。回收的142份有效问卷统计表明, 123名学生(86.6%)认可混合式教学效果, 133名学生(93.7%)多方面能力得到提升, 79名学生(55.6%)能在少于课堂面授所需学时内完成线上学习任务。期末考试表明, 混合式教学的班级平均分较传统课堂面授教学提高3.5分。因此, 在大班授课的《组织学和胚胎学》课程中进行混合式教学取得了较好的学习效果和教学效果, 值得进一步推广和应用。

过表达海马LINGO-1对小鼠学习和记忆能力及海马各亚区Spinophilin+树突棘的影响

目的 脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法 将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位注射携带绿色荧光的空载腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV),LINGO-1过表达组小鼠海马立体定位注射同时携带绿色荧光和LINGO-1过表达载体的AAV。运用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力,荧光定量PCR及免疫荧光染色方法分别检测小鼠海马内LINGO-1基因表达水平和各亚区荧光强度,体视学三维定量小鼠海马各亚区体积及Spinophilin+树突棘总数。结果 对照组和LINGO-1过表达组病毒注射前后体质量差异无统计学意义;LINGO-1过表达诱导小鼠海马LINGO-1的mRNA水平升高、荧光强度增强(P<0.01);与对照组相比,LINGO-1过表达组小鼠在Morris水迷宫实验中的表现明显更差(P<0.05);LINGO-1过表达诱导小鼠海马各亚区体积显著下降(P<0.05,P<0.01),Spinophilin+树突棘密度显著降低(P<0.01,P<0.05),Spinophilin+树突棘数量显著减少(P<0.05)。结论 海马立体定位注射过表达LINGO-1腺相关病毒能够特异性上调小鼠海马内LINGO-1水平,海马LINGO-1的异常高表达可导致小鼠海马体积减小及Spinophilin+树突棘突触丢失,并在一定程度上损伤其空间学习与记忆能力。

建立稳定敲减MINK1表达的肺腺癌细胞系及对其初步分析

目的:构建稳定敲减Misshapen/NIK-related kinase(MINK1)表达肺腺癌细胞系,并检测稳定敲减其表达后对细胞增殖、迁移运动及顺铂治疗的影响。方法:利用肺腺癌A549和PC-9细胞,基于pLKO.1-shRNA慢病毒基因敲减表达系统构建稳定敲减MINK1表达细胞系,分别通过qRT-PCR和Western bolt在mRNA和蛋白水平检测敲减效率。CCK-8和Transwell检测稳定敲减MINK1表达对细胞增殖和迁移运动的影响,流式细胞检测细胞周期与凋亡变化情况;分析稳定敲减MINK1表达对顺铂治疗敏感性变化情况,并通过免疫荧光染色DNA损伤标志物γH2AX检测细胞DNA损伤水平。结果:qRT-PCR和Western bolt分析结果显示2个特异shRNA均可显著下调MINK1表达。稳定敲减MINK1表达的肺腺癌细胞增殖能力降低,迁移运动能力下降;且敲减MINK1表达明显增强化疗药物顺铂对癌细胞杀伤作用,并诱导DNA损伤水平增加。结论:利用肺腺癌A549和PC-9细胞成功构建稳定敲减MINK1肺腺癌细胞系,而稳定敲减其表达可抑制癌细胞增殖及迁移运动,且可能通过调节DNA损伤修复过程促肺癌细胞耐药。

跑步对抑郁大鼠内侧前额叶皮质兴奋性突触的影响

目的:精确定量研究跑步锻炼对慢性束缚应激(chronic restraint stress,CRS)诱导的抑郁模型大鼠内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)内Sp^(+)兴奋性突触数量的影响。方法:选取雄性SD大鼠(54只),经过适应性喂养和糖水基线调整,在CRS模型建立成功后随机分为对照组、抑郁模型组和模型跑步组,其中模型跑步组大鼠在束缚的第5周开始进行为期4周的跑步锻炼干预。最后,对各组大鼠进行行为学测试,并运用免疫组织化学技术结合现代体视学方法对各组大鼠mPFC内Sp^(+)兴奋性突触变化进行精确定量研究。结果:与对照组[(97.14±2.64)%]相比,抑郁模型组和模型跑步组大鼠糖精偏好百分比[(89.62±6.05)%]减少(P=0.002),体质量的增长减缓,强迫游泳实验中大鼠的不动时间和新环境进食抑制实验的进食潜伏期增加。4周的跑步锻炼可以有效减缓抑郁模型组大鼠糖精偏好百分比的下降[(89.30±5.06)%vs.(97.30±2.08)%,P=0.018],降低强迫游泳实验中抑郁大鼠的不动时间,并在新环境进食抑制实验中缩短抑郁大鼠的进食潜伏期。体视学精确定量分析结果显示,抑郁模型组大鼠mPFC内的Sp^(+)兴奋性突触总量[(9.98±0.35)×10^(8)个]低于对照组[(11.50±1.27)×10^(8)个,P=0.013]。而跑步锻炼则可以逆转抑郁大鼠mPFC内的Sp^(+)兴奋性突触总数的减少[模型跑步组(11.30±1.21)×10^(8)个,P=0.003]。结论:跑步锻炼干预后CRS抑郁模型大鼠mPFC的Sp^(+)兴奋性突触数量的改变可能是跑步锻炼发挥抗抑郁作用的神经生物学基础之一。

当归多糖动员的造血干/祖细胞移植重建小鼠造血功能的研究

目的探讨当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)动员的造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitorcell,HSPC)对造血衰竭小鼠造血功能重建的作用。方法将APS动员的雄性BALB/c小鼠的外周血单个核细胞(periph-eral blood mononuclear cells,PBMC)静脉输注给受到8.5Gy60Coγ射线照射的雌性同系受体小鼠;观察受体小鼠外周血白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)的变化及30d存活情况;采用PCR方法鉴定其造血重建的来源。结果APS组受体小鼠WBC、PLT、HGB、30d存活数均明显高于对照组和NS组(P<0.05);对APS组存活小鼠进行Y染色体PCR分析,证实雌性受体小鼠重建的造血细胞来自雄性供体。结论APS动员的小鼠外周血HSPC移植后能够重建造血衰竭小鼠长期造血。

人参多糖对K562细胞增殖抑制及诱导分化的实验研究

目的 研究人参多糖(GPS)对人白血病细胞株(K562)增殖抑制及诱导分化的影响。方法 采用细胞体外培 养技术,MTT法检测细胞增殖抑制,光镜和电镜观察细胞形态变化;联苯胺(Benzidine)、糖原染色(PAS)、过氧化物酶 (POX)、非特异性脂酶(α- NAE)细胞化学染色分别检测K562细胞向红系、粒系、巨核系分化的特征;免疫细胞化学检测细胞 表面分化抗原及因子表达(CD14、CD15、HIR2、EPO、GM CSF);FAS及FAS L等检测细胞凋亡情况。结果 GPS对K562细胞 的增殖有明显抑制作用并能诱导K562细胞向红系或粒系细胞分化,表现为:①K562细胞的增殖受到抑制;②K562细胞形 态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,核仁减少或消失,核染色质浓缩,胞浆丰富,核浆比例降低,可见中晚期粒、红系细 胞;③K562细胞血红蛋白(Hb)、糖原、α- NAE的表达明显增加,而过氧化物酶(POX)的表达与对照无显著性差异;④细胞表 面分化抗原CD15、HIR2、EPO、GM CSF的表达明显增强,CD14的表达与对照无显著性差异;⑤细胞凋亡明显增加。结论 人 参多糖(GPS)能明显抑制K562细胞增殖并能诱导其凋亡并使K562细胞向成熟方向分化。

氟西汀通过增加阿尔茨海默病APP/PS1转基因小鼠脑内乙酰胆碱的含量改善其空间学习能力

目的探讨胆碱能神经系统是否是抗抑郁药氟西汀(Fluoxetine,FLXT)改善阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者大脑空间学习记忆能力的作用靶点。方法随机选取18月龄的雄性APP/PS1双转基因AD小鼠20只分为阳性对照组(APP/PSI组)和FLXT组,分别给予为期4周的腹腔注射生理盐水和FLXT,并随机选取18月龄同窝生野生型(wild type,WT)小鼠10只作为阴性对照组(WT组),该组不给于药物干预。运用Morris水迷宫实验对三组小鼠的空间学习记忆能力进行检测,采用免疫组织化学染色和紫外分光光度法对三组小鼠大脑内β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)沉积情况和乙醜胆碱(acetylcholine,Ach)的含量、乙酰胆碱脂酶(acetylcholinesterase,AchE)及胆碱乙酰化酶(choline acetyl transferase,ChAT)活性等进行检测。结果水迷宫实验显示,APP/PS1小鼠逃避潜伏期显著长于WT小鼠,FLXT处理可明显缩短APP/PS1小鼠逃避潜伏期;免疫组织化学染色显示,WT小鼠脑内未见明显Aβ沉积,而APP/PSI小鼠海马内可见大量Aβ沉积,FLXT处理可明显减少APP/PS1小鼠海马内Aβ沉积;对Ach含量、AchE和ChAT活性检测显示,APP/PS1小鼠大脑皮质及海马内的Ach含量、AchE活性及皮质内的CHAT活性均较WT小鼠降低,FLXT处理可明显抑制APP/PS1小鼠大脑皮质及海马内Ach含量、AchE活性的降低,但对ChAT活性没明显的作用。结论胆碱能系统可能是FLXT作用于AD大脑的作用靶点之一,即FLXT可能通过增加AD大脑胆碱能神经系统的神经功能活性,进而增加Ach的含量,从而改善AD大脑的空间学习记忆能力。

对CUS抑郁症大鼠模型海马齿状回突触改变的体视学研究

目的运用无偏体视学方法定量研究慢性不可预知应激(chronic unpredictable stress,CUS)模型大鼠海马DG体积、DG突触密度、突触总数的改变情况。方法筛选4~5周龄雄性SD大鼠分为对照组(n=15)和CUS组(n=23)。CUS组大鼠通过孤养并结合慢性不可预知应激方式建立模型,对照组每5只为1笼,正常喂养。建模期间,每周进行糖水偏好试验。建模4周后,结合糖水偏好试验、旷场实验、高架十字迷宫实验对两组大鼠行为学表现进行评估。随后运用现代体视学与免疫组织化学相结合的方法测量两组大鼠海马DG体积、DG突触密度和突触总数。结果经过4周CUS干预后,CUS组大鼠与对照组相比,体质量显著降低(P<0.05),糖水偏好显著下降(P<0.05);旷场实验中央区域路程、中央路程比和中央时间比显著降低(P<0.05)。CUS组大鼠海马DG突触密度[(0.48±0.13)/μm^3]和突触总数(6.713 5×10~8)较对照组大鼠[突触密度(0.15±0.03)/μm^3,突触总数(2.103 3×10~9)]显著下降(P<0.05)。结论抑郁症模型大鼠海马DG的突触总数减少、突触密度减小,表明海马齿状回突触改变可能是抑郁症发病的重要神经结构基础之一。

人参多糖对K562细胞凋亡与细胞周期的影响及其机制

目的探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)诱导白血病细胞K562凋亡和周期阻滞的机制。方法取对数生长期的K562细胞,调整密度为7×108/L,空白对照组予以常规培养;GPS组加入400 mg/L GPS。流式细胞仪测定细胞的凋亡率及细胞周期分布变化;RT-PCR检测细胞ERK表达的变化。免疫组化的方法检测细胞中p-ERK、NF-κB、Cyclin D1蛋白定位及表达量的变化。Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、NF-κB、Cyclin D1蛋白的变化。结果与对照组比较,K562细胞在400 mg/L GPS的作用下,体外培养24、48、72 h后,GPS组细胞凋亡率显著增高(P<0.05),周期分布检测结果显示,与对照组相比,GPS组K562细胞G0/G1期细胞数量呈时间依赖性增多(P<0.05),G2+M、S期细胞数量则明显减少(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,400 mg/L GPS处理48 h组ERK mRNA的表达水平明显低于对照组(0.20vs 0.50,P<0.05)。免疫组化显示p-ERK、NF-κB、Cyclin D1主要分布在细胞核和细胞质,与对照组相比,GPS组K562细胞内p-ERK、NF-κB、Cyclin D1的表达明显减弱。Western blot检测结果显示,ERK总蛋白无明显变化(P>0.05),而p-ERK、NF-κB、Cyclin D1随时间变化有减少趋势,且在48 h减少明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人参多糖GPS可促使K562细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导K562细胞凋亡,且均呈时间依赖性。GPS促进K562细胞凋亡、导致其细胞周期阻滞的机制可能是通过抑制ERK/NF-κB信号通路的激活,进而下调Cyclin D1来实现的。

人参皂苷Rg1抑制白血病细胞K562增殖并诱导分化的分子机制

目的研究人参皂苷的重要单体Rg1对人白血病细胞K562的增殖抑制作用并诱导其向成熟分化的分子机制。方法取对数生长期K562细胞,分设人参皂苷Rg1组和常规培养组,以流式细胞仪检测24、48、72 h Rg1对K562细胞增殖的影响;Wright’s染色测定细胞形态和酶标仪测定血红蛋白合成来观察Rg1作用24、48、72 h后K562细胞向成熟细胞分化的特征;激光共聚焦显微镜检测Rg1作用48 h对K562细胞STAT5蛋白分布的影响;Western blot法检测Rg1作用24、48、72 h对K562细胞STAT5蛋白表达的影响。结果流式细胞仪检测提示Rg1作用后K562细胞S期比例增加,48 h达高峰(P<0.05);酶标仪测定显示Rg1作用后,K562细胞合成血红蛋白(Hb)的量与对照组相比具有显著性提高(P<0.05);Wright’s染色显示经Rg1诱导后,K562细胞体积缩小,细胞核直径减小,细胞核和细胞质的比例降低,细胞向成熟方向分化;激光共聚焦显微镜观察显示经Rg1诱导后,K562细胞细胞质内的STAT5荧光强度增加,而细胞核内STAT5荧光强度减弱;Western blot法检测显示Rg1作用K562细胞后,细胞质内STAT5的表达水平增加,细胞核内STAT5的表达水平减少,作用48 h变化最明显。结论人参皂苷单体Rg1可抑制人白血病细胞K562增殖并诱导其向成熟方向分化;Rg1改变K562细胞内STAT5的分布和减少K562胞核中STAT5的表达,这可能是Rg1抑制K562细胞增殖并诱导其分化的作用机制之一。