粒细胞集落刺激因子对骨髓极小胚胎样干细胞的动员和募集

背景:极小胚胎样干细胞(very small embryonic-like stem cells,VSEL-SCs)是一种非造血干细胞,具有类似胚胎干细胞的生物学特性。目前,心肌梗死后 VSEL-SCs 的研究较多,而急性脑梗死后 VSEL-SCs 的动员及其修复受损组织的研究在国内外报道尚少。目的:观察小鼠急性脑梗死后粒细胞集落刺激因子对骨髓来源的 VSEL-SCs 动员、募集及其作用机制。方法:线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,腹腔内分别注射粒细胞集落刺激因子和生理盐水,观察术后神经功能评分,流式细胞分析计数动员到外周血中的 VSEL-SCs 数量;ELISA 方法分析术后血浆及缺血侧脑组织中基质细胞衍生因子 1 水平的动态变化,免疫组化观察缺血边缘带的基质细胞衍生因子 1 阳性细胞表达。结果与结论:与生理盐水组相比,术后 108 h 粒细胞集落刺激因子组造模后神经功能评分明显降低(P < 0.05);术后 72,108 h粒细胞集落刺激因子组动员到外周血的 VSEL-SCs 含量高于生理盐水组(P < 0.05);粒细胞集落刺激因子组血浆和脑组织中基质细胞衍生因子 1 水平高于生理盐水组(P < 0.05),血浆基质细胞衍生因子 1 水平与动员到外周血的 VSEL-SCs 数量成正相关;脑组织免疫组化中,粒细胞集落刺激因子组基质细胞衍生因子 1 阳性细胞多于生理盐水组。结果显示粒细胞集落刺激因子能使更多的 VSEL-SCs 从骨髓动员到外周血中,粒细胞集落刺激因子对缺血脑组织的保护作用,可能在于其能够使缺血边缘带的基质细胞衍生因子 1 表达增加,并通过 CXCR4/SDF-1 轴的趋化作用,使募集到梗死区域的 CXCR4+细胞增多来实现的。

胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及其鉴定

目的 :通过培养了解神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)生物学特性 ,为深入研究其体内外分化奠定基础。方法 :分离培养大鼠胎脑NSC。通过单细胞克隆实验检测其自我更新能力、增殖能力和生物学特性 ;免疫细胞化学检测NSC特征性标志nestin表达和分化能力 ;BrdU掺入实验检测细胞增殖状态 ;并比较EGF、bFGF对鼠NSC增殖刺激作用。结果 :体外传代培养获得的NSC具有多向分化能力、很强的自我更新能力、表达nestin ;NSC扩增迅速 ;传代培养的NSC性能稳定 ;联合运用EGF、bFGF对NSC增殖作用较单用强。结论 :成功培养扩增了大鼠NSC ;EGF。

几种组织培养上清液对造血祖细胞体外增殖分化的比较

目的：寻求既经济又有效的造血生长因子样活性物质。方法：采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术，检测胎肌培养上清液、骨髓基质细胞培养上清液、胸腺细胞培养上清液与脾细胞培养上清液对造血祖细胞CFU-GM、BFU-E和CFU-Mix增殖分化的影响。结果：胎肌培养上清液和对CFU-GM和CFU-Mix的体外增殖与分化有明显刺激作用，而胸腺与脾细胞条件培养上清液对BFU-E的生长有显著促进作用。结论：胎肌培养上清液中可能含GM-CSF样活性物质，而胸腺与脾细胞培养上清液具有较高IL-3样活性，可以利用组织与细胞培养上清液替代重组造血生长因子进行造血细胞的实验研究和临床诊断。

中药复方S-抗毒合剂对兔组织器官的形态学影响

目的 观察中药复方S-抗毒合剂对实验兔组织器官的形态学影响。方法 通过在日粮中添加中药复方S-抗毒合剂饲喂实验兔30 d,无痛处死后解剖观察,组织切片行光镜、电镜观察。结果 大体观察、光镜和电镜观察实验组与对照组组织器官结构无明显差异。结论 中药复方S-抗毒合剂对动物组织器官形态结构无明显影响。

小鼠颌下腺组织培养上清液对造血干细胞和骨髓细胞增殖影响的实验研究

本实验采用脾集落形成法和流式细胞术等技术，研究了小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）对造血干细胞和骨髓细胞增殖的影响。结果表明：正常雄性和雌性ＳＧＣＭ对小鼠造血干细胞增殖和分化有明显促进作用；ＳＧＣＭ能有效促进小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）由相对静止期（Ｇ０／Ｇ１）进入增殖活跃期（Ｓ＋Ｇ２／Ｍ），并能提高骨髓有核细胞数。研究提示，正常小鼠颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进小鼠造血干细胞增殖和分化并加快ＢＭＣ从静止期进入增殖周期，从而发挥造血调控功能。

小鼠脑梗死后骨髓极小胚胎样干细胞的动员

目的探讨G-CSF和AMD3100对小鼠脑梗死后骨髓来源的极小胚胎样干细胞(VSEL-SCs)的动员和募集机制。方法线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,腹腔内分别注射G-CSF、AMD3100及G-CSF联合AMD3100,观察术后神经功能评分,流式细胞法计数外周血中VSEL-SCs数量;ELISA检测血浆及脑组织中SDF-1水平,免疫组化检测SDF-l阳性细胞。结果 G-CSF组神经功能评分明显降低(P<0.05);各组动员到外周的VSEL-SCs含量高于对照组(0.17%±0.01%)(P<0.05);G-CSF组在72和108 h时血浆SDF-1浓度高于对照组(P<0.05),但低于AMD3100组和G-CSF+AMD3100组(P<0.05),血浆SDF-1水平与动员到外周血的VSELs数量成正相关(P<0.05);G-CSF组、G-CSF+AMD3100组脑组织的SDF-1浓度及SDF-1阳性细胞均高于对照组(P<0.01)。结论G-CSF的脑保护作用是通过CXCR4/SDF-1轴的趋化作用使募集到梗死区的CXCR4+细胞增多来实现的。

氢化可的松对小鼠胚胎肠上皮凋亡的影响

目的观察氢化可的松(hydrocortisone,HC)对胎鼠肠上皮细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法分别取E13.5d、E14.5d胎鼠的十二指肠及结肠段,体外组织培养,实验各组分别加入HC液(0μg/ml,0.5μg/ml,1.0μg/ml,2.0μg/ml),培养24h后取出标本,制成石蜡切片。部分切片经HE染色,体视学法观测胎鼠肠上皮中的凋亡小体数;余切片经免疫组化染色,观察凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,P53及c-Fos的表达。结果①各实验组胎鼠肠上皮凋亡小体数均较对照组高,P<0.05,与HC剂量呈正相关,P<0.01。②各实验组胎鼠肠上皮细胞表达的Bcl-2均较对照组低,P<0.05,与HC的剂量呈负相关,P<0.01;而Bax及c-Fos的表达则高于对照组,P<0.05,与HC剂量均呈正相关,P<0.01;P53的表达差异无统计学意义。结论HC在体外可促进胎鼠肠上皮细胞凋亡,可能是一种通过下调Bcl-2表达,上调Bax及c-Fos表达的P53非依赖机制。

人参多糖和当归多糖诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究

目的 :研究和论证人参和当归促进血细胞生成及“补气生血”的现代生物学机理。方法 :采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术 ,研究经人参多糖 (GPS)和当归多糖 (APS)诱导的人脐静脉内皮细胞株 (Ecv30 4 )上清液 (HEcCM)中造血生长因子的活性及粒单系集落刺激因子 (GM CSF)、IL 3和IL 6在内皮细胞的表达。结果 :GPS和APS体外诱导制备的HEcCM能显著促进粒单系造血祖细胞(CFU GM )和多向性造血祖细胞 (CFU Mix)的增殖 ;同时 ,GPS和APS能不同程度地促进内皮细胞GM CSF、IL 3和IL 6蛋白表达。结论 :GPS和APS能上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血生长因子来调节血细胞的生成。

糖皮质激素治疗血管瘤机理的初步探讨

目的 :初步探讨糖皮质激素治疗血管瘤的机理。方法 :采用光镜和电镜技术对 2 2例血管瘤石蜡标本及 5例正常皮肤标本进行形态学观察 ;并用TUNEL法检测血管内皮细胞 (vascularendotheliacell,VEC)凋亡及免疫组化方法检测增殖细胞核抗原 (Proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)。 结果 :所有病例标本中均未发现明显炎症及坏死征象 ;透射电镜观察发现显效组VEC呈典型的凋亡形态变化 ,未见坏死征象 ;治疗显效组血管瘤VEC的凋亡水平显著高于无效组、未治疗组及正常皮肤组 ,而PCNA水平低于上述 3组 ;未治疗组和无效组之间凋亡水平无显著性差异。结论 :糖皮质激素可能通过诱导VEC凋亡及抑制其增殖而促进血管瘤消退。

紫外分光光度法测定青蒿素的含量

目的:建立测定青蒿中青蒿素含量的紫外分光光度检测方法,为筛选收购优质青蒿提供快速检测的方法。方法:用紫外分光光度计对青蒿素标准溶液进行波长扫描,确定最适吸收波长,在最适吸收波长下建立青蒿素标准品的吸光度-浓度曲线。根据标准曲线测定青蒿样品中青蒿素的含量。结果:青蒿素的最适吸收波长为290.5nm,吸光度-浓度回归方程为:Y=0.043X+0.006,不同青蒿样品中青蒿素含量有差异。结论:紫外分光光度法测定青蒿中青蒿素成分含量操作简便、快捷、准确。

糖皮质激素瘤内注射治疗婴幼儿血管瘤机理的研究

目的:探讨糖皮质激素治疗婴幼儿血管瘤的机理.方法:对50例不同组别血管瘤(治疗显效组18例,无效组17例,未治疗组15例)及16例正常皮肤标本进行:①凋亡研究:光镜及透射电镜下观察组织形态学变化;TUNEL法检测血管内皮细胞(VEC)的凋亡水平;IHC法检测凋亡调控基因bcl-2,c-myc的表达;②增殖水平研究:IHC法检测PCNA.结果:①组织形态学变化:光镜下各组均无明显炎症及坏死征象,透射电镜观察显效组有较多VEC凋亡征象.②VEC增殖及凋亡:显效组VEC的凋亡水平显著高于无效组、未治疗组及正常皮肤组(TUNEL:47.86±3.14,22.05±3.93,19.20±2.82,35.51±3.81,P<0.01),而增殖水平明显低于上述三组(PCNA:10.25±3.89,44.33±5.01,56.32±4.12,17.91±3.76,P<0.01).③凋亡调控情况:显效组bcl-2表达显著低于无效组和未治疗组(21.28±4.70,49.96±5.33,52.51±7.69,P<0.01);c-myc表达也明显低于后两组(25.20±5.01,51.81±5.68,56.28±6.92,P<0.01).结论:①糖皮质激素可能通过诱导VEC凋亡及抑制其增殖而促进血管瘤消退.②糖皮质激素对VEC凋亡的影响可能与其下调bcl-2和c-myc的表达水平有关.

黄芪总黄酮对辐射损伤小鼠的防护作用研究

目的:研究黄芪总黄酮(Total flavonoids of astragalus,TFA)对受60Coγ射线损伤小鼠的辐射防护作用,为TFA的临床应用提供实验依据。方法:采用大剂量60Coγ射线一次性全身照射雌性昆明小鼠,制成放射损伤动物模型。小鼠在照射前3d及照射后,以不同剂量的TFA连续灌胃14d,观察受致死剂量60Coγ射线照射小鼠的30d存活率及生存时间长短。同时,在低剂量照射组检测用药后小鼠体重、外周血指标、脾脏指数的变化。用HE染色观察脾脏的病理学改变。结果:TFA不仅能明显延长辐射损伤小鼠的平均存活天数,提高小鼠30d存活率(P<0.05);而且能显著降低辐射损伤小鼠外周血白细胞的下降幅度、缩短其恢复所需时间(P<0.05);同时,TFA还能促进小鼠脾重指数的恢复,减轻辐射对小鼠脾脏的损伤程度,促进造血灶增生,加快造血功能恢复。结论:TFA具有较强的抗辐射作用,能显著提高受致死剂量60Coγ射线照射小鼠的存活率,降低辐射对小鼠外周血WBC和PLT及脾脏的损伤作用,其具体作用机制有待进一步深入研究。

当归多糖对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

目的探讨当归多糖(APS)对小鼠外周血造血干细胞的动员作用。方法采用外周血白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LC)计数、免疫细胞化学、流式细胞术、造血祖细胞体外培养等实验技术观察APS的动员作用。结果APS动员后小鼠外周血的WBC、LC数明显高于生理盐水(NS)组(P<0.05);APS动员后外周血中CD34+细胞百分率明显高于NS组(P<0.05);APS组CFU-Mix产率显著高于NS组(P<0.01);并且APS和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)联合动员后的各项指标均高于单用APS或单用rhG-CSF组。结论APS对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,并且APS和rhG-CSF联合动员的效果好于单用APS或单用rhG-CSF的动员效果。

当归多糖对小鼠造血细胞表面粘附分子表达的影响

目的:探讨当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对小鼠造血细胞表面粘附分子表达的影响,旨在为阐述APS在造血调控和动员方面的机制提供实验依据。方法:采用外周血WBC、骨髓单个核细胞(Marraw mononuclear cell,MNC)计数,流式细胞术检测外周血和骨髓Sea-1^+细胞率以及骨髓MNC和Sca-1^+细胞表面CD49d(VLA-4的α链)、CD44表达情况。结果:1采用4mg/kg APS动员后小鼠外周血的WBC、Sca-1^+细胞数明显高于NS组(P<0.01),而骨髓MNC和Sca-1^+细胞数却明显低于NS组(P<0.01);2APS组骨髓MNC及Sca-1^+细胞表面CD49d表达明显下降(P<0.05);骨髓MNC表面CD44表达阳性率下降(P<0.05),但荧光强度无明显变化;骨髓Sca-1^+细胞表面CD44的表达与NS组无显著性差异。结论:APS可能通过降低造血细胞表面的某些粘附分子的表达而产生动员效果。

移植性人白血病小鼠模型的建立

目的:建立移植性人白血病重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型,探讨人白血病细胞在SCID小鼠体内的生物学行为,为研究药物等因素治疗白血病的体内方法奠定基础。方法:在SCID小鼠腹腔或静脉分别接种5×106～1×107个K562细胞,应用组织细胞化学、RT-PCR、流式细胞术、组织病理监测SCID小鼠的外周血、骨髓、肝脏、脾脏的白血病细胞。结果:K562细胞经静脉或腹腔途径均可植入SCID小鼠体内,形成白血病模型;3w时外周血即可见白血病细胞,肝、脾脏增生期细胞达40.11%、41.66%;发病晚期,模型动物骨髓细胞中CD13+细胞占10.15%;接种K562细胞后能检测到人DQα,ABL-BCR基因,接种K562细胞后3～4w即可见白血病细胞累及肝、脾、肾、骨髓等主要脏器。结论:SCID小鼠接种K562白血病细胞能成功建立白血病动物模型,CD13阳性率能快速、客观地判断模型中肿瘤细胞浸润程度。

大鼠骨髓巨噬细胞的分离,纯化,培养以及鉴定

目的 :为深入研究骨髓巨噬细胞的生物学功能 ,探索一种简便的骨髓巨噬细胞的分离 ,纯化和培养的方法。方法 :分离获取大鼠骨髓细胞 ,在 6 0 %DMEM培养液 ,2 0 %马血清 ,2 0 % (v/v)L92 9培养上清的诱导条件下进行体外贴壁培养 ,6～ 7天时获得纯度较高的贴壁细胞。采用倒置显微镜下观察生活状态、Wright′s染色光镜观察、电子显微镜观察检测贴壁细胞形态学 ;酸性磷酸酶及非特异性酯酶染色测定细胞内酶的表达 ;吞噬鸡红细胞及墨汁颗粒实验检测其吞噬功能 ;免疫细胞化学染色观察细胞表面标志等生物学技术鉴定培养的贴壁细胞性质。结果 :获得高纯度的巨噬细胞 ,且具有良好的吞噬功能 ,并且具备巨噬细胞的形态特征 ,特有的水解酶类及特有的表面标志 -CD68。结论 :本法是一种简易实用的体外分离、纯化、培养骨髓巨噬细胞的方法。

细胞密度和血清对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响

目的:研究不同细胞接种密度、血清浓度及种类对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响。方法:设置不同细胞密度、不同种类血清及血清量的培养体系,观察细胞贴壁情况,细胞80%贴壁时间,用台盼蓝排斥试验检测活细胞率,MTT法检测细胞增殖情况,HE染色光镜下观察细胞形态。结果:原代全血培养的小鼠骨髓基质细胞适宜接种密度为1～4×106/ml;细胞最适生长的血清浓度为10%～20%;与胎牛血清相比马血清对小鼠骨髓基质细胞的促增殖作用更好(P<0.05);不同种类血清培养的小鼠骨髓基质细胞类型有一定差异(P<0.05)。结论:不同细胞接种密度及血清浓度和血清种类对小鼠骨髓基质细胞体外生长有一定影响。

人参总皂甙诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究

目的：研究和论证人参促进血细胞发生及“补气生血”的现代生物学机理。方法：采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术，研究经人参总皂甙（ＴＳＰＧ）诱导的人脉静脉内皮细胞株（Ｅｃｖ３０４）上清液（ＨＥｃＣＭ）中造血生长因子的活性及ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３和ＩＬ－６在内皮细胞的表达。结果：ＴＳＰＧ体外诱导制备的ＨＥｃＣＭ能显著促进ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ的增殖；同时，ＴＳＰＧ能不同程度地促进内皮细胞表达ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３和ＩＬ－６蛋白。结论：本研究提示ＴＳＰＧ能上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血生长因子来调节血细胞的生长，这或许是人参“补气生血”的现代生物学机理之一。

《组织学与胚胎学》课程考试评价体系改革

课程考核和成绩评定是人才培养过程中十分重要的环节。重庆医科大学组胚教研室对《组织学与胚胎学》课程尝试构建形成性评价和总结性评价相结合的考评体系；形成性评价采用课堂学习、课堂测验与平时作业、网络学习与综合学习能力等指标，评价学生平时学习态度、水平与能力。90％以上学生赞同新的考核评价体系；教师认为该体系强化了学生自主学习和终身学习能力，并由此积累了完善考试评价体系的经验。