对目前国内解剖学教学现状的评价及反思

借中国解剖学会与香港大学交流解剖学课程改革经验之际,收集了国内大部分医学院校的解剖学教学情况。调查结果显示,由于大量新兴学科的出现以及教学观念的转变,国内各高校都对解剖学课程进行了改革。但其措施主要体现在教学方法的改进,如PBL教学,与美国在20世纪60年代的做法大同小异,如今美国教育界已经对先前的改革进行深刻反思,剖析其带来的负面影响,而国内却继续沿袭美国以往的做法,这值得引起广大解剖学同仁的认真思考。文章通过总结目前国内的解剖学教学现状,分析当前改革中存在的问题,并明确通过拓展性学习和继续教育是解决当前问题的可能途径,以期在认识上同国外达到一致。

髋臼后壁钢板螺钉固定安全区域的应用解剖学研究

目的测量髋臼后壁三维重建模型参数和行虚拟钢板螺钉固定,明确髋臼后壁钢板放置的安全位置及螺钉置入角度。方法用Mimics软件对25例(50侧)骨盆薄层CT行三维重建,切割出髋臼后壁三维模型,测量相关参数。用SolidWorks2010软件设计髋臼后壁虚拟钢板,导入Mimics软件,得出髋臼后壁虚拟钢板放置位置和螺钉安全角度。然后在15具(30侧)尸体髋臼后壁标本上进行钢板螺钉固定。结果髋臼纵径为55 mm,横径为52 mm。髋臼后壁最宽处位于上缘,为51 mm,最窄处位于髋臼后壁中下部,为38 mm。螺钉能够拧入Zimmer重建钢板钉孔所允许最小角度范围为50-66°。Mimics模拟置钉后,将钢板放置在距尸体标本髋臼后壁外缘6 mm处行钢板螺钉固定,螺钉未进入髋臼。结论重建钢板放置在距髋臼后壁外缘6 mm以远时,螺钉可以安全置入,且钢板距外缘越远,螺钉的安全范围越大。

梓醇对APP/PS1双转基因小鼠焦虑行为和脑内神经元的影响

目的:观察梓醇对APP/PS1双转基因小鼠焦虑行为和脑内神经元的影响。方法:将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠按随机数字表法分为梓醇治疗组和生理盐水对照组,每组10只,用梓醇[(5 mg/(kg.d)]和等量生理盐水腹腔注射阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠3周,应用高架十字迷宫检测两组小鼠的焦虑情绪的变化;应用免疫组织化学染色和Western blot检测脑内神经元及突触相关蛋白的表达变化。结果:与生理盐水对照组比较,梓醇治疗组小鼠进入开放臂的次数(P=0.000 2,t=4.742)和时间(P=0.001,t=3.936)显著增加,神经元数量(P=0.028 4,t=2.872)及突触蛋白表达(P=0.002,t=5.265)明显增多。结论:梓醇治疗能显著缓解AD模型小鼠的焦虑情绪,这种改善作用可能是通过改善神经元及突触的丢失来实现的。

丙戊酸钠对APP/PS1转基因小鼠自主活动及脑形态结构的影响

目的研究丙戊酸钠(valproic acid,VPA)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠自主活动及脑组织形态结构的影响,探讨VPA对AD的保护作用及可能机制。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠及同窝野生型小鼠分为VPA处理组和生理盐水对照组,运用VPA[30 mg/(kg.d)]和等量生理盐水腹腔注射4周。旷场实验观察各组小鼠的自主活动能力;尼氏染色、透射电镜观察各组小鼠脑组织的病理改变。结果行为学结果显示:与野生型小鼠相比,AD模型小鼠自主活动明显减少(P<0.05);野生型小鼠VPA处理组与对照组自主活动无明显差异(P>0.05);而AD模型小鼠VPA处理组比对照组的自主活动明显减少(P<0.05)。尼氏染色显示:AD模型小鼠脑内神经元密度显著低于野生型小鼠。AD模型小鼠中,对照组脑内神经细胞明显肿胀,尼氏小体明显减少而致细胞质淡染,神经细胞密度降低(85.2±13.3);而VPA处理组脑内神经元肿胀程度明显减轻,神经元数量显著回升(116.9±16.2,P<0.05),但VPA不影响野生型小鼠脑内的神经元数量及形态(VPA处理组:142.2±24.4 vs生理盐水对照组:136.7±23.1,P>0.05)。电镜结果显示AD模型小鼠对照组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡肿胀明显,突触结构稀松;而AD模型小鼠VPA处理组脑内神经元细胞核、线粒体及神经毡的水肿明显减轻,突触结构清晰。结论 VPA可显著减少APP/PS1双转基因AD模型小鼠的自主行为,显著减轻躁狂症状;VPA可改善APP/PS1双转基因小鼠脑内神经细胞的形态结构,减少肿胀的神经元并抑制神经元数量的减少。

红花注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤Caspase-3和bcl-2表达的影响

目的:探讨红花注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤凋亡相关基因Caspase-3和bcl-2表达的影响。方法:将75只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血再灌注组和治疗组。建立肾缺血再灌注损伤模型,检测肌酐和血尿渗透压值评价肾功能变化,TUNEL法检测凋亡率,免疫组化检测Caspase-3和bcl-2蛋白表达。结果:与正常对照组相比,缺血再灌注组肾功能明显减退,凋亡率显著增加、Caspase-3和bcl-2表达明显增强(P<0.01);运用红花注射液治疗后,与缺血再灌注组相比,治疗组肾功能明显改善,凋亡率显著减少、Caspase-3的表达明显减弱而bcl-2表达明显增强(P<0.01)。结论:在肾缺血再灌注损伤过程中,红花注射液具有抑制Caspase-3表达和促进bcl-2表达的作用。

AQP9在脑出血大鼠脑组织中的表达变化

目的研究大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)在脑组织中的表达变化,初步探讨AQP9在脑出血脑组织病理变化中的作用。方法采用定量胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型,运用HE染色、免疫组化、免疫荧光双标、RT-PCR等方法检测脑出血大鼠脑组织AQP9表达的变化。结果HE染色显示,脑出血面积随着时间的延长而逐渐增大,24 h达到峰值,24 h后无明显变化。RT-PCR结果显示,除ICH1 h外,ICH早期,AQP9 mRNA含量较假手术组降低,于6 h降至最低;24 h及以后各时段明显增高,于48 h达到峰值,7 d仍明显高于对照。免疫组化和免疫荧光双标显示,AQP9在脑内表达部位随时段变化而变化,其中,ICH后48 h,AQP9强表达于脑室周围器官和渗透压感受器。结论ICH早期AQP9表达降低可延迟细胞内水肿的形成,而ICH后期AQP9表达上调,可能与水电解质平衡调节和能量代谢调节有关。

β淀粉样蛋白及代谢酶类在阿尔茨海默病和糖尿病模型小鼠脑内的表达

目的观察阿尔茨海默病(AD)和糖尿病模型小鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)及代谢相关酶类的表达情况,以便从分子水平找到糖尿病并发AD的实验室依据。方法 5月龄双转基因痴呆症模型小鼠(APP/PS1双转基因小鼠)、ob/ob T2DM肥胖模型小鼠和野生型C57BL/6J小鼠为对照,分别用免疫组化染色、ELISA和Western blot检测脑内老年斑(SP)、Aβ含量及Aβ代谢酶类的表达情况。结果 APP/PS1小鼠大脑皮质及海马均可见一定数量的SP;ob/ob小鼠大脑皮质内偶可见SP,而对照组未见SP。与对照小鼠相比,APP/PS1与ob/ob小鼠脑内Aβ40、Aβ42的含量明显升高(P<0.05);但APP/PS1小鼠脑内Aβ水平显著高于ob/ob小鼠(P<0.05)。APP在APP/PS1小鼠脑内的表达显著高于其他两组小鼠;在ob/ob小鼠脑内的表达要强于对照小鼠(P<0.05)。Aβ生成的关键酶BACE1在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著高于对照小鼠(P<0.05),但其在APP/PS1小鼠脑内的表达要强于ob/ob小鼠(P<0.05)。Aβ降解的关键酶IDE在APP/PS1与ob/ob小鼠脑内的表达显著低于对照小鼠(P<0.05),且在ob/ob小鼠脑内表达最低。结论 Aβ生成与降解的异常以及其异常聚集沉积不仅发生在早期AD脑内,同时也发生在T2DM脑内,提示Aβ过表达可能是促进2型糖尿病并发AD的重要原因之一。

上调miR-320a对注射用核糖核酸Ⅱ诱导的肝癌Bel-7402细胞凋亡和迁移的影响

目的研究上调miR-320a对注射用核糖核酸Ⅱ(BP素)诱导的肝癌Bel-7402细胞凋亡和迁移的影响。方法用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-320a在正常肝细胞与肝癌细胞中的表达差异;将miR-320a mimic转染到Bel-7402细胞中,qRT-PCR法检测miR-320a的表达水平;CCK-8法检测注射用核糖核酸Ⅱ对肝癌细胞增殖的影响;FCM检测细胞周期分布及凋亡变化;Transwell法检测注射用核糖核酸Ⅱ对肝癌细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测细胞周期蛋白D1的表达及凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2,迁移相关蛋白MMP-3的表达。结果与正常肝细胞相比,miR-320a的表达水平在肝癌细胞中明显下调。转染miR-320a mimic的Bel-7402细胞命名为Bel-7402-miR-320a,CCK-8结果显示,给予注射用核糖核酸Ⅱ(100、200、300、400、500 mg·L^(-1))后,Bel-7402及Bel-7402-miR-320a细胞的增殖均受到了抑制。在Bel-7402和Bel-7402-miR-320a中,12h半数抑制浓度为250、200 mg·L^(-1),24 h半数抑制浓度为150、120 mg·L^(-1)。FCM检测结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ可诱导Bel-7402、Bel-7402-miR-320a细胞周期阻滞在G0/G1期,上调miR-320a后细胞凋亡率明显增加。Transwell结果显示,与Control组和加药组相比,Bel-7402-miR-320a+Ribonucleic acidⅡ组细胞迁移和侵袭明显受到抑制。Western blot结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ作用Bel-7402和Bel-7402-miR-320a细胞后,凋亡相关蛋白p53、Bax的表达增加,而Cyclin D1、Bcl-2、MMP-3蛋白的表达下调。结论 miR-320a在肝癌Bel-7402细胞中的表达水平明显低于正常肝细胞。注射用核糖核酸Ⅱ可以通过下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,将细胞周期阻滞在G0/G1期,激活p53信号通路,下调Bcl-2、上调Bax,破坏Bcl-2/Bax的比例,促进人肝癌Bel-7402细胞的凋亡,并通过抑制MMP-3的表达抑制人肝癌细胞的迁移和侵袭。而过表达miR-320a后,可提高肝癌细胞对注射用核糖核酸Ⅱ的敏感性,增强注射用核糖核酸Ⅱ对肝癌细胞Bel-7402的作用。

缺血性脑水肿的AQP-4表达与磁共振成像的相关性研究

目的 研究AQP 4表达与磁共振成像相关性 ,探讨脑水肿磁共振成像的分子生物学机制。方法 将Wistar大鼠 3 4只 ,随机分为 8组 ,即正常组 4只、假手术组 6只和大脑中动脉栓塞 (MCAO)后 15min、3 0min、1h、3h、6h及 2 4h组各 4只 ,分别进行脑部DWI和T2WI扫描 ,观察梗塞区异常信号出现时间 ,测量异常信号强度 (rd)和面积 (rs)、扩散异常区的表观扩散系数 (ADC) ,用免疫组化、原位杂交和图像分析技术检测以上各组的AQP 4蛋白 (rS)及AQP 4mRNA表达 (α) ,并进行统计学分析。结果 rS与α呈明显正相关 (r =0 .949)。栓塞后 15min即在DWI上出现高信号 ,而T2WI未见异常 ;在1h内ADC迅速下降 ,而AQP 4表达与DWI的rd、rs都快速增加。AQP 4mRNA(α)与rs DWI呈明显相关性 (r =0 .914 )。随着时间的延长 ,ADC值逐渐下降 ,于 3h达到最低 [( 2 .1± 0 .6)× 10 -4mm2 /s] ,随后缓慢递增直至 2 4h ,但AQP 4表达、rd、rs仍不断增加。T2WI最早于 3 0min ,平均在 1.4h显示异常高信号 ,在T2WI上的rs值都比相应的DWI上的值低 (P <0 .0 5 )。AQP 4mRNA(α)与rs T2WI无明显相关 (r =0 .116)。结论 AQP 4表达增强是缺血性脑水肿时ADC值下降、DWI上高信号的重要原因 ,与T2WI的信号变化无关。DWI高信号面积可以间接反映AQP 4的表?

喉返神经袢的形态及其临床意义

目的：为甲状腺手术中对喉返神经的定位和保护提供解剖学基础。方法：解剖５０具（１００侧）人颈部尸体标本。在甲状腺手术区对喉返神经袢进行定位观测。结果：（１）喉返神经袢出现率为１３％，左侧占９％；按形态可分“Ｈ”型、“Ｏ”型、混合型。（２）喉返神经袢的最低点距甲状软骨下角尖的距离为３４．５±１５．９ｍｍ。（３）喉返神经袢的最低点距甲状腺下极平面的距离：９％在其平面以上１～１０ｍｍ范围内；２％在其平面；２％在其平面以下１～３ｍｍ范围内。结论：以上喉返神经袢的定位观测结果，为临床甲状腺手术提供了新的解剖学基础。

改进的三套管血管吻合技术建立大鼠原位小肠移植模型

目的:改进大鼠原位小肠移植(Small bowel tansplantation,SBT)的三套管血管吻合技巧。方法:动脉吻合采用供体带肠系膜上动脉(Superior mesenteric artery,SMA)的腹主动脉(Abdominal aorta,AA)段两端与受体的腹主动脉套管吻合,静脉吻合采用供体的肝门静脉(Hepatic portal vein,HPV)与受体左肾静脉套管吻合。结果:60例接受小肠移植的大鼠存活率为93.3% (56/60),整个手术用时1.5～2h,其中动脉吻合用时(4±1)min,静脉吻合用时1min,动、静脉吻合共用时(4±2)min。结论:改进三套管血管吻合技巧既加快了吻合速度,缩短了手术时间,又减少了手术并发症,提高了手术成功率。

慢性脑缺血后脑组织AQP4的表达变化

目的:探讨水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)在慢性脑缺血后的表达变化及其可能作用。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组(N组,10只)和实验组(30只);实验组根据脑缺血时长,分为慢性脑缺血2周组(2W组)、1月龄组(1M组)和2月龄组(2M组),每组各10只。采用双侧颈总动脉永久结扎法(2-VO),构建大鼠慢性脑缺血模型。干湿重法检测大鼠脑含水量,苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织形态学的变化,尼氏染色法观察细胞凋亡情况。免疫荧光法检测AQP4的表达水平和分布情况,免疫印迹法测定AQP4蛋白的相对表达量。免疫荧光检测AQP4与小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体(ionized calcium binding adapter molecule 1,IBA1)(小胶质细胞的标志物)表达情况。结果:大鼠慢性脑缺血组脑含水量(77.778±0.042,77.813±0.142,77.805±0.027)与对照组(77.786±0.029)相比,无统计学差异(F=0.136,P=0.936),且慢性脑缺血各组之间亦无统计学差异。苏木精-伊红染色和尼氏染色结果显示:与对照组相比,慢性脑缺血组脑组织细胞排列紊乱,部分细胞核固缩、消失,尼氏体数量减少。免疫荧光结果显示,慢性脑缺血组大鼠脑组织较对照组AQP4表达增强(前额叶:F=1 089.311,P=0.000,N组:90.000±1.000,2W组:166.722±3.660,1M组:200.347±0.284,2M组:229.333±5.033;顶叶:F=784.332,P=0.000,N组:171.512±1.340,2W组:215.107±1.817,1M组:223.014±2.080,2M组:232.654±1.319),小胶质细胞活化增生,且部分AQP4与IBA1共标(前额叶:F=182.218,P=0.000,N组:0.718±0.012,2W组:0.822±0.000,1M组:0.907±0.016,2M组:0.970±0.020;顶叶:F=785.416,P=0.000,N组:0.861±0.009,2W组:0.912±0.005,1M组:0.966±0.003,2M组:0.751±0.003);免疫印迹法结果显示,慢性脑缺血组大鼠脑组织AQP4的表达水平上调,并且随缺血时间延长,其表达进一步增强(前额叶:F=587.102,P=0.000,N组:0.589±0.026,2W组:0.938±0.028,1M组:1.185±0.011,2M组:1.515±0.060;顶叶:F=86.881,P=0.000,N组:0.663±0.073,2W组:0.865±0.044,1M组:1.228±0.082,2M组:1.282±0.047)。结论:慢性脑缺血后,由于缺血缺氧导致神经元凋亡、小胶质细胞活化增生和AQP4表达上调,上调的AQP4可能参与了慢性脑缺血后的相关炎症过程。

组蛋白乙酰化在衰老中的作用

衰老过程中细胞稳态丢失,组织功能改变,且身体健康水平普遍下降,最终导致死亡。随着年龄的增长,由多种表观遗传因素共同调控的基因表达控制将减弱。组蛋白修饰是控制染色质结构和基因转录的关键调控因子,从而影响各种重要的细胞表型。越来越多的研究表明,各种环境刺激下组蛋白乙酰化均参与调控翻译,从而影响基因表达和寿命。该综述总结了组蛋白乙酰化在基因转录调控和衰老过程中的机制,并探讨了组蛋白乙酰化直接或间接参与衰老相关基因表达和信号通路调控的作用,列举了目前靶向组蛋白的抗衰老药物,旨在促进研究者以组蛋白乙酰化为靶点的衰老研究的深入。

U251细胞MCT1、4在氧糖剥夺后的表达变化及其意义

目的:观察氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)后,神经胶质瘤细胞U251的乳酸转运和单羧酸转运蛋白(monocarboxylate transporter,MCT)1、4的表达变化,以探讨胶质瘤增殖生长的分子机制。方法:U251细胞随机分为对照组和模型组(OGD组),模型组的干预时间点为1、3、6 h。四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖生长情况,HE染色观察细胞的形态变化,乳酸试剂盒检测细胞培养液中的乳酸含量,免疫荧光和免疫印迹观察MCT1和MCT4的表达变化情况。结果:与对照组相比,随着氧糖剥夺时间延长,模型组细胞增殖能力下降(对照组、OGD 1 h、OGD 3 h、OGD 6 h组的光密度值分别为0.584±0.031、0.537±0.046、0.441±0.079和0.200±0.011),细胞培养液中的乳酸浓度增高(对照组、OGD 1 h、OGD 3 h、OGD 6 h组乳酸浓度值分别为0.150±0.029、0.707±0.022、1.167±0.024和1.325±0.023)。MCT1、4的表达上调,并随氧糖剥夺时间延长其表达逐渐增强(MCT1:F=46.256,P=0.000;MCT4:F=247.400,P=0.000)。细胞培养液中加入MCTs的抑制剂4-CIN后,其乳酸浓度降低(对照组、150μmol/L组、425μmol/L组的乳酸浓度值分别为0.249±0.012、0.222±0.016、0.167±0.117)。结论:U251细胞氧糖剥夺后,随着细胞培养液中乳酸浓度增加,MCT1、4亦表达上调,而细胞的增殖生长能力下降;抑制MCT的表达,细胞培养液中的乳酸浓度降低,提示MCT1、4可能通过参与神经胶质瘤缺血缺氧微环境中乳酸的转运,进而调控细胞的增殖生长过程。

靶向敲低腺苷转运体1通过降低炎症反应对阿尔茨海默病的保护作用研究

目的 通过构建腺苷转运体1(equilibrative nucleotide transporter 1,ENT1)过表达和敲低质粒,观察ENT1对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的影响及可能的机制。方法 利用分子克隆的方式构建ENT1过表达质粒pAAV-ENT1-mCherry和敲低质粒pAAV-ENT1shRNA-ZsGreen。将过表达质粒转染入小鼠神经元N2A细胞,将敲低质粒转染入含瑞士家族人APP695的N2A细胞(N2A-APP)。结合real-time qPCR和Western blot分别检测ENT1 mRNA和蛋白表达及炎症因子的变化,通过CCK-8试剂盒检测对细胞活性的影响。结果 测序和real-time qPCR验证结果显示小鼠ENT1过表达和敲低质粒已成功构建。CCK-8检测结果显示,过表达ENT1水平24 h内细胞存活率显著下调(P<0.05),而当敲低ENT1时细胞存活率显著上调(P<0.01)。Real-time qPCR检测进一步发现,ENT1过表达可引起细胞内炎症因子IL-1β、TNF-α、C1q-a和C1q-b水平的显著上调(P<0.05),而敲低ENT1时可逆转N2A-APP细胞内炎症因子水平的上调(P<0.05)。结论 靶向敲低ENT1的蛋白水平可通过降低炎症反应从而减轻AD的病理改变,ENT1可能是AD病理机制的一个潜在靶点。

APP/PS1双转基因小鼠视网膜内β-淀粉样蛋白及星形胶质细胞的变化

目的 通过比较阿尔茨海默病（AD）模型小鼠和野生型小鼠视网膜内病理改变情况,探讨AD患者视觉异常的原因. 方法 取3月龄、12月龄AD模型小鼠及同窝野生型正常小鼠各10只,采用免疫组化的方法比较2种小鼠视网膜内β-淀粉样蛋白前体蛋白（APP）和β-淀粉样蛋白（Aβ）的表达变化;应用视网膜铺片结合免疫荧光染色的方法比较2种小鼠视网膜内星形胶质细胞的形态及数量变化（通过检测其标志物胶质纤维酸性蛋白）. 结果 APP在不同月龄AD模型小鼠和野生型小鼠视网膜内均有表达,但AD模型小鼠视网膜内的表达明显强于同龄野生型小鼠,差异有统计学意义（t=3.232,P=0.018;t=5.797,P=0.001）.Aβ在野生型小鼠视网膜内几乎无沉积,而在AD模型小鼠视网膜内12月龄较3月龄表达明显增强,差异有统计学意义（t=6.486,P=0.001）.与3月龄野生型小鼠相比,同龄AD模型小鼠视网膜内的星形胶质细胞数量明显增加[（602.60±36.35）个/mm^2 vs （309.52±41.55）个/mm2],差异有统计学意义（t=5.309,P=0.006）,且突起增多、变短.结论 Aβ的沉积与AD模型小鼠视网膜的神经退行性变密切相关.